目的:探究TFF3靶向抑制剂联合多西他赛在他莫昔芬耐药乳腺癌治疗中的应用1.体外研究:前期成功构建MCF7和T47D他莫昔芬耐药细胞系。(a)westen blot测量他莫昔芬耐药乳腺癌细胞中的TFF3表达。(b)利用流式细胞技术分析AMPC对于细胞周期,细胞凋亡影响。(c)TFF3靶向抑制剂AMhuman‐mediated hybridizationPC在耐药细胞系中的半抑制浓度,以及在2D细胞集落形成,3D细胞培养。(d)各类化疗药物在耐药乳腺癌中的效果。(e)AMPC和多西他赛联合作用指数(CI)。(f) AMPC联合多西他赛在2D细胞集落形成,3D细胞培养中的效果。(g)AMPC联合多西他赛在凋亡相关蛋白BCL2,BCL-XL,BAK,BAX,BID,BIM,Caspase3/7影响。2.体内研究:将5×10^6MCF7耐药细胞注射到BALB/c裸鼠乳腺脂肪垫中,待肿瘤长到100mm^3时将老鼠随机分为正常对照组,AMPC组,多西他赛组,AMPC+多西他赛组,每组6只。AMPC组老鼠每日腹腔注射药物AMPC 20mg/kg,多西他赛组每4日腹腔注射多西他赛5mg/kg,AMPC+多西他赛组同时注射AMPC和多西他赛。药物治疗14天Apoptosis抑制剂后牺牲老鼠,取小鼠肿瘤以及血清。肿瘤做免疫组化测量TFF3,ki67表达。ELISA测量血清中TFF3的表达量。结果:1.体内研究(a)TFF3在他莫昔芬耐药的MCF7和T47D细胞中表达增强。(b)AMPC可以明显降低TFF3的表达,阻止乳腺癌细胞在G2期,并且增加癌细胞早期和晚期凋亡。(c)AMPC在乳腺癌中的半抑制浓度约1μM,在2D细胞集落形成和3D细胞培养中有明显的抑制癌细胞生长作用。(d)在蒽环类,铂类,氟嘧啶类,紫杉烷类化疗药物中耐药细胞对于多西他赛敏感。(e)AMPC和多西他赛联合具有协同效用。(f)AMPC联合多西他赛可以明显降低耐药乳腺癌细胞集落形成和抑制3D细胞生长。(g)AMPC联合多西他赛抑制抗凋亡蛋白BCL2,BCL-XL表达,更好地促进凋亡相关蛋白BAK,BAX,BID,BIM,Caspase3/7的表达。2.体Vorinostat细胞培养内研究:MPC和多西他赛可以降低裸鼠乳腺癌肿瘤的生长,AMPC联合多西他赛明显降低肿瘤体积并且部分出现肿瘤完全消退。肿瘤免疫组化提示AMPC联合多西他赛降低Ki67表达。免疫组化和血清ELISA结果提示小鼠AMPC组可以降低TFF3表达量,而多西他赛增加TFF3表达,AMPC联合多西他赛仍可以降低TFF3的表达量。AMPC可以增强多西他赛在他莫昔芬耐药乳腺癌治疗作用。