基于G-四链体和滚环扩增的荧光生物传感器在检测产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌中的应用

蜡样芽胞杆菌(BaciPLX5622研究购买llus cereus)是一类兼性需氧的革兰氏阳性菌,广泛分布于空气、土壤和污水中,炒米饭、牛奶和肉类制品等食品也是其主要污染对象,该菌可引起食物中毒,中毒症状主要表现为呕吐和腹泻,分别与呕吐毒素和肠毒素有关。呕吐毒素与肠毒素相比,在环境中具有良好的耐受性,主要存在于产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌污染的食物中。因此,建立有效的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌检测方法,对于预防和监测因误食该菌污染的食物导致的中毒事件具有重要意义。滚环扩增(Rolling circle amplification,RCA)是一种简单、高效的等温酶扩增技术,利用环状DNA模板和特殊的DNA聚合酶将短单链DNA(Single stranded DNA,ss DNA)引物扩增为长链DNA分子,实现核酸信号放大。RCA因其反应恒温,设计简单、操作简便,并且可以结合不同的信号输出策略而被广泛应用。本研究基于RCA核酸信号放大技术,结合“阻断剂”加尾的聚合酶链式反应(Blocker-taileBioactive biomaterialsd polymerase chain reaction,Bt-PCR)、适配体(Aptamer,Apt)和指数型线性滚环扩增(ExpoMirdametinibnential-linear RCA,ELRCA)技术建立荧光传感器检测牛奶加标样中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,各章内容分述如下:第一章:介绍了G-四链体和RCA技术的基本原理,综述了基于G-四链体和RCA放大策略在生物传感器中的应用研究进展。第二章:建立了Bt-PCR-RCA荧光传感器用于牛奶加标样中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的检测,首先以产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的特异性基因ces B作为目的基因,设计“阻断剂”加尾引物,进行PCR扩增后得到的Bt-PCR产物以linker DNA作为“桥梁”,与哑铃DNA模板进行结合引发RCA反应,得到大量重复的富含G-四链体(G-quadruplex)序列的产物,荧光染料硫黄素T(Thioflavin T,Th T)与G-四链体结构的结合产生荧光信号,通过测定荧光信号,实现对产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的检测。在最优条件下,该荧光传感器对纯菌液中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的检测限(limit of detection,LOD)达到10 CFU/m L以下,对牛奶加标样中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的LOD达到10 CFU/m L以下,且该方法表现出较好的特异性。第三章:建立了Apt-RCA荧光传感器检测牛奶加标样中的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌。该荧光传感器通过构建DNA功能化磁珠,利用适配体和目标菌之间的亲和力使得适配体互补DNA链(complementary DNA,c DNA)被竞争下来,借助磁分离技术,游离于上清液中的c DNA链与环状模板的结合引发RCA反应,得到的RCA产物富含大量的G-四链体序列,荧光染料Th T与G-四链体结构的结合产生明显的荧光信号,从而实现对样品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的荧光检测。利用琼脂糖凝胶电泳和测定荧光强度验证了方法的可行性,并优化了磁珠孵育时间、RCA环状模板用量以及RCA反应时间等重要实验参数,并测定了Apt-RCA荧光传感器LOD及特异性。在最优条件下,该方法对纯菌液中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的LOD为1.4×10~2CFU/m L,对牛奶加标样中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的LOD为2.2×10~3CFU/m L。该荧光传感器所需检测时间短、操作简便且特异性较好。第四章:建立了Apt-ELRCA荧光传感器检测牛奶加标样中的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌。利用已构建好的DNA功能化的磁珠,目标菌与适配体特异性结合,竞争出互补链c DNA,经磁分离后,游离于上清液中的c DNA以环状DNA为模板进行ELRCA反应,实现了包含G-四链体短链的指数型放大和积累,荧光染料Th T与G-四链体结构的结合产生荧光信号,实现对产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的检测。利用琼脂糖凝胶电泳和荧光检测验证了方法的可行性,并优化了环状DNA模板的用量、第二引物浓度以及ELRCA反应时间等重要实验参数,并测定了该方法的LOD及特异性。在最优条件下,该荧光传感器在纯菌液中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的LOD为3.6×10~1CFU/m L,在牛奶加标样中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的LOD为3.0×10~2CFU/m L,且具有较好的特异性。综上所述,本研究基于G-四链体和RCA信号放大技术结合PCR及适配体构建荧光生物传感器,用于实现牛奶中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌灵敏特异的检测,所建立的荧光传感器具有较好的灵敏度和特异性,且较为简便,为我国食源性致病菌的快速筛查提供新的技术参考。

参芪降糖颗粒联合利拉鲁肽对胰岛素控制不佳的2型糖尿病患者血糖指标、血管内皮功能、miR-29b及miR-126水平的影响

目的 探讨参芪降糖颗粒联合利拉鲁肽治疗胰岛素控制不佳的2型糖尿病(T2DM)的效果。方法 选取2019年11月至2020年11月我院接收的7确认细节8例胰岛素控制不佳的T2DM患者作为研究对象,根据入院时间的不同将其分为对照组和观察组,各39例。对照组行常规治疗+selleck RP56976利拉鲁肽,观察组在对照组基础上加用参芪降糖颗粒。比较两组的治疗效果。结果 治疗后,观Glaucoma medications察组的日间血糖平均绝对差(MODD)、平均血糖波动幅度(MAGE)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)水平高于对照组,内皮素-1(ET-1)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的微小核糖核酸-29b(miR-29b)水平低于对照组,微小核糖核酸-126(miR-126)水平高于对照组(P<0.05)。结论 参芪降糖颗粒联合利拉鲁肽用于胰岛素控制不佳的T2DM患者治疗中,可有效控制血糖波动,改善血管内皮功能指标,调节miR-29b、miR-126水平,值得推广。

补肾活血胶囊对激素性股骨头坏死大鼠骨破坏的修复

背景:课题组前期研究发现,糖皮质激素可抑制Hedgehog信号通路关键基因的表达,从而扰乱骨髓间充质干细胞成骨、成脂与成血管方向的分化,进而破坏骨内血供与骨组织结构,而补肾活血胶囊对此具有一定的治疗作用。目的:观察补肾活血胶囊对激素诱导的股骨头坏死SD大鼠骨组织破坏的修复作用,进一步研究补肾活血胶囊对成骨与Hedgehog信号通路相关因子的影响机制。方法:SD大鼠臀肌注射甲泼尼龙MK-1775生产商琥珀酸钠建立激素诱导相关的股骨头坏死大鼠模型;分别灌胃给予低、中、高不同剂量的补肾活血胶囊干预;并以臀肌注射生理盐水的大鼠为对照。给药8周后取材,通过剖检大体观察、组织病理学检查、qPCR与Western blot分析在不同层面综合评价补肾活血胶囊对激素性股骨头坏死大鼠骨组织修复的影响及其作用机制。结果与结论:(1)大体观察:干预8周后,各组大鼠股骨头样本大体观无明显差异;(2)苏木精-伊红染色:与模型GNE-140组比较,各剂量补肾活血胶囊组大鼠均显著提高了骨小梁面积、降低了空骨陷窝率;(3)免疫组化:与模型组比较,各剂量补肾活血胶囊组大鼠在不同程度上提高了碱性磷酸酶、核心结合因子α1、Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白的表达;(4)qPCR检测:与模型组比较,各剂量补肾活血胶囊组大鼠提升了成骨相关指标碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、核心结合因子α1与HedgeBioprinting techniquehog信号通路相关指标音猬因子、核转录因子1、核转录因子2的mRNA表达;(5)Western blot检测:与模型组比较,各剂量补肾活血胶囊组大鼠均在不同程度上提高了成骨相关指标碱性磷酸酶、核心结合因子α1、Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白与Hedgehog信号通路相关指标音猬因子、核转录因子2的蛋白表达;(6)研究初步证实了补肾活血胶囊对激素性股骨头坏死有一定的治疗作用,其作用机制与成骨相关的Hedgehog信号通路具有一定相关性。

基于2020年全球流行病学数据分析中国癌症发病率、死亡率和负担的时间趋势及与美国和英国数据的比较

背景与目的 癌症是中国人群的主要致死原因之一,也是中国的主要经济负担。研究中国与发达国家在癌症模式和控制策略上的差异,可为政策规划提供参考,有助于改善癌症防控措施。本研究回顾了中国癌症发病率、死亡率和伤残调整生命年(disability-adjusted life year,DALY)负担的比率及趋势,并与美国(United States,US)和英国(United Kingdom,UK)进行了比较。方法 本研究从GLOBOCAN 2020在线数据库、2019年全球疾病负担(global burantibiotic-loaded bone cementden of disease,GBD)研究和五大洲癌症发病率plus数据库(Cancer Incidence in Five Continents plus database,CI5 plus)中获取中国、美GSI-IX化学结构国和英国的癌症发病率、死亡率和DALY数据。使用Joinpoint回归模型分析中国、美国和英国癌症发病率和死亡率的趋势,计算年度百分比变化(annual percent change,APC),并确定最佳拟合连接点。结果 2020年估算的中国新发癌症病例为4,568,754例,癌症死亡病例为3,002,899例。此外,在中国,癌症引起的DALY为67,340,309。与美国和英国相比,中国的癌症发病率更低,但癌症死亡率和DALY率更高。此外,中国的癌症谱正在发生变化,除了肝癌、胃癌、食管癌和宫颈癌的发病率高和负担沉重外,肺癌、乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌的发病率和负担正在迅速增长。结论 中国的癌症谱正在从发展中国家向发达国家转变。人口老龄化和不健康生活方式将继续增加中国的癌症负担。因此,中国应参考发达国家Bemcentinib试剂已建立的癌症防控策略,并结合中国不同地区癌症类型的多样性,调整国家癌症控制政策。

辣木叶抗糖尿病效果及其作用机制研究进展

辣木作为我国卫生部批准的新资源食品之一,其叶具有重要的食用和药用价值,在防治糖尿病及其并发症方面具有显著效果。该文概述了辣木叶在动物、细胞实验以及临床研究中的显著抗糖尿病效果,并进一步对辣木叶具体活性成分(黄酮类、多糖类和蛋白类等)在改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞、抑制肝脏糖异生、促进肝糖原合成、增强抗氧化作用以及降低血脂和胆固醇等方面的调控效果及其作用机制进行阐述。对已报道相关文献进行整合分析可知,辣木叶抗糖尿病作用可通过改善胰岛功能、Fulvestrant分子式调控肠道功能和肝糖代谢3条作用途径实现。其中,辣木叶中所含黄酮类活性成分或是其降糖优势成分,能够显著增加胰岛素分泌medical treatment量、促进β细胞的增殖和阻止β细胞的调亡作用,抗糖尿病效果显著;同时,辣木叶中所含多糖类或蛋白类活性成分能够通过改善葡萄糖耐selleck Telaglenastat受量、增强胰岛素敏感性、促进肝糖原合成、抑制肝糖原分解等方式,最终达到辅助降糖目的。未来需要进一步明确辣木叶中的降糖优势成分及其降糖机制,以期为天然降糖药物的开发和辣木资源的高值化利用提供参考。

数字乳腺断层摄影(DBT)对比全屏数字化乳腺摄影(FFDM)对致密性乳腺内乳腺癌诊断的应用价值

目的:探讨数字乳腺断层摄影(DBT)对比全屏数字化乳腺selleck激酶抑制剂摄影(FFDM)对致密性乳腺内乳腺癌诊断的应用价值。方法:选择2020.06-2020.12阶段来本院诊治的致密性乳腺内乳腺癌患者60例,对所有患者medieval European stained glasses进行DBT与FFDM诊断,以病理诊断为金标准,对比两种诊断方式的检出率与病灶特征,分析两种诊断方式的价值。结果:DBT检出率为88.33%,明显高于FFDM检出率73.33%,有显著差异(P<0.05);DBT的毛刺征、血管穿入征检出率26.67%、4NVP-TNKS656小鼠8.33%高于FFDM检出率8.33%、23.33%,有显著差异(均P<0.05);DBT检测下乳腺内病灶肿块的边界清晰占比59.18%高于FFDM的37.14%,边界不清晰占比10.20%低于FFDM的28.57%,有显著差异(均P<0.05)。结论:致密性乳腺内乳腺癌诊断中,DBT检测的检出率更高,病灶特征显示更明显,在致病性乳腺内乳腺癌诊断中具有较高临床价值。

乳腺癌患者Lin28A/B水平与乳腺癌转移及血管新生的关系

目的 分析RNA结合蛋白(Lin28A/B)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌转移及血管新生的关系。方法 将2019年1月至2020年1Hepatosplenic T-cell lymphoma2月唐山中心医院及滦州市人民医院收治的80例乳腺癌患者设为观察组,另纳入唐山中心医院同期门诊健康体检者40例为对照组,比较乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中Lin28A/B mRNA的表达量;同时比较观察组及对照组血清癌细胞转移指标基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管新生指标血管内皮生长因子(VEGE-616452分子式F)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮抑素(ES)表达水平,采用Pearson相关分析癌组织中Lin28A/B mRNA的表达量与癌细胞转移及血管新生指标的相关性。结果 癌组织中Lin28A/B mRNA的表达量均明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血清MMP-2及MMP-9,VEGF、bFGF及ES的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中Lin28AmRNA的表达量与MMP-2、MMP-9、VEGF、bFGF水平明显相关(r=selleck化学0.523、0.439、0.562、0.461,P<0.05),与ES无相关性(r=0.118,P>0.05);Lin28B mRNA的表达量与MMP-2、MMP-9、VEGF、bFGF明显相关(r=0.546、0.468、0.527、0.449,P<0.05),与ES无相关性(r=0.106,P>0.05)。结论 Lin28A/B在乳腺癌组织中高表达,其表达量与癌细胞转移指标及血管新生指标呈正相关,可能参与调节乳腺癌的疾病进展。

老年冠心病患者PCI术后发生严重出血的影响因素分析

目的 研究在老年冠心病患者中经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后诱发严重出血的主要影响因素。方法 选择2019年1月至2020年12月间80例于深圳市前海蛇口自贸区marine sponge symbiotic fungus医院行PCI的老年冠心病患者作为研究对象,根据在PCI术后是否发生出血症状将其进行分组,其中无出血组50例,出血组30例,并收集所有患者的基础资料,包括出血类型、临床资料、血液指标以及手术相关信息等。结果 在经过分析后得知,经PCI术后严重出血的发生率为37.5%(30/80)C59使用方法,其中影响出血的主要因素包括年龄、性别、消化系统疾病、大规格鞘管使用、多次球囊扩张以及血管闭合器使用。出血组的心脏不良事件发生率较无出血组更高(P<0.05)。结论 经过分析后得知,针对老年冠心病患者,在实施PCI前,应当结合年龄等相关信息进行评估,将病Roxadustat价格人的疾病变化情况纳入考虑中,制定合理的治疗措施,并且在术后针对高危病人实施严格观察,积极发现高危影响因素,预防出血的发生,保证其预后。

基于多肽、带电小分子复合染料分子LB膜的制备及其性能研究

分子自组装是在分子识别的基础上,不同Alpelisib结构成分通过弱的、可逆的非共价相互作用自发形成具有特殊功能的组装体。多肽的两亲性和生物相容性使其在气水界面自组装具有天然优autochthonous hepatitis e势。在这项工作中,通过Langmuir-Blodgett(LB)技术将棕榈酰五肽-4(PP4)和与染料分子进行自组装,根据不同染料分子性质的不同,自组装膜表现寻找更多出不同的性能。实验发现PP4/染料复合膜具有良好的酸碱气体响应。此外,PP4和甲基橙(MO)制备的LB薄膜呈现手性信号且反映在圆二色光谱中。利用LB技术将棕榈酰五肽-4(PP4)和酞菁染料分子进行自组装。PP4/酞菁复合膜不但对酸碱气体敏感响应,而且表现出良好的表面增强拉曼散射性能。以10~(-5)M甲基紫(CV)溶液为分子探针,增强因子EF可达5.42×10~4。除此之外,复合膜的圆二色光谱中表现出了明显的手性信号,实现了由非手性分子制备手性薄膜的转变。同时TPPS/PP4复合膜具有良好的催化性能和光电性能。利用LB技术、旋涂技术、滴铸技术,系统的制备了一系列含有ICG等带电小分子和酞菁染料分子的自组装复合膜。发现其亲水程度与粗糙度有关,LB复合膜相较其他两种薄膜更加平整致密,粗糙度最低,亲水性最差。在三电极体系测试中,LB膜在相同条件下表现出更好的光电性能。目前的研究工作为功能性自组装薄膜的制备及其作为气体传感器、手性开关、痕量检测的应用提供了新的线索。

褐马鸡繁殖期和非繁殖期血液转录组的比较分析

为探究繁殖期和非繁殖期褐马鸡差异表达基因和MCC950化学结构差异代谢通路的变化,基于高通量Illumina Hiseq/MisAZD2281 IC50eq测序平台对雌雄褐马鸡血液进行转录组测序,分析差异表达基因,进一步对差异表达基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果显示:转录组测序共获得39 907条Unigenes,总长度为39 002 861 bp,平均长度为324 bp。不同生理期褐马鸡筛选出差异表达的基因共7872个,经过GO功能分析,有5510个差异基因显著富Nucleic Acid Modification集到10 147条GO terms中。KEGG通路分析结果显示有5019个差异基因富集到了750个信号通路中,其中富集基因数目较多且与繁殖相关的信号通路主要包括卵母细胞减数分裂(22个)、促性腺激素释放激素(29个)、促卵母细胞成熟(19个)、催产素(13个)、雌激素代谢通路(5个)等。研究结果丰富了褐马鸡的基因资源,揭示了TGFB1、ACVR1B和BCL2L1三个基因在褐马鸡繁殖调控机制上的作用,同时也为褐马鸡该物种繁育相关基因的功能研究奠定了基础。