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晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)是一类糖分子与蛋白质或脂质发生反应而形成的产物。糖尿病患者体内,由于高血糖水平导致的糖基化反应的终末产物会损害血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)结构和功能,从而导致细胞死亡,进而导致糖尿病患者出现严重的并发症,如肾脏损伤、心血管疾病、神经系统损伤等。近年来,一种新型的细胞死亡方式称铁死亡被研究报道,伴有大量活性氧和脂质过氧化物的形成,参与动脉粥样硬化的病变过程。其是否参与AGEs诱导的ECs功能障碍尚未见报道。新型降糖药物胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂具有显著的心血管保护作用。GLP-1是否具有拮抗铁死亡进而保护ECs的作用亦不清楚。目的:本研究以AGEs刺激下的人主动脉内皮细胞(aortic vascular endothelial cells,HAECs)为实验模型,观察AGEs诱导HAECs铁死亡以及GLP-1干预下产生的保护作用,并探讨可能的分子机制。方法:1、通过在人主动脉内皮细胞上,通过显微镜观察、细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8)法检测AGEs可否造成HAECs死亡;使用铁离子检测试剂盒检测细胞内亚铁离子浓度,使Imidazole ketone erastin浓度用C11-BODIPY荧光染料、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测细胞脂质过氧化水平,使用实时荧光定量聚合酶链反应和western bloting法检测铁死亡的相关调控基因和蛋白的表PF-02341066 IC50达情况,使用透射电镜观察HAECs线粒体形态变化情况,明确HAECs在AGEs作用下是否发生铁死亡;进一步使用凋亡抑制剂和铁死亡抑制剂证明AGEs诱导的HAECs死亡中,铁死亡是否是重要的死亡方式。2、将HAECs细胞分为6组:对照组、AGEs组、AGEs+Fer-1组、AGEs+GLP-1(7-37)组、AGEs+GLP-1(9-36)组,AGEs+GLP-1(28-36)组。培养48 h后,CCK8剂盒检测细胞活力,C11-BODIPY染料及丙二醛(MDA)试剂盒检测脂质过氧化水平,电镜观察线粒体形态变化、Western blot检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-Co A synthetase long-chain family member 4,ACSL4)蛋白表达,以确认GLP-1及其小分子片段是否能保护HAECs免受AGEs诱导的铁死亡。3、WB水平检测苏氨酸蛋白激酶(liver kinase B1,LKB1)、磷酸化苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated LKB1,p-LKB1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMPK,p‐AMPK)蛋白水平,初步确定GLP-1及其小分子片段是否通过激活LKB1/AMPK通路保护HAECs免受AGEs诱导的铁死亡。结果:1、AGEs诱导HAECs铁死亡:与对照组相比,AGEs作用下人主动脉内皮细胞活力下降、亚铁离子水平升高、脂质过氧化水平增加、电镜下AGEs处理组细胞线粒体形态明显异常。铁死亡正向调控蛋白ACSL4表达上升、负向调控蛋白GPX4表达下降,LKB1、AMPK蛋白磷酸化水平显著降低。与AGEs组相比,凋亡抑制剂Z-VAD-FMK仅轻微逆转细胞活力,铁死亡抑制剂铁抑素-1(Ferrostatin-1,Fer-1)可显著减轻AGEs诱导的细胞死亡,降低亚铁离子含量与脂质过氧化水平,部分逆转铁死亡相关蛋白表达,提高LKB1及AMPK蛋白磷酸化水平。2、GLP-1改善AGEs诱导的HAECs铁死亡:与AGEs处理组相比,GLP-1及其小分子片段干预组HAECs细胞活力明显上升、亚铁离子水平下降、脂质过氧化水平减轻、电镜下细胞线粒体形态异常程度减轻,前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)m RNA水平上调,ACSL4 m RNA及蛋白水平表达下调、GPX4 m RNA及蛋白水平表达上调。GLP-1及其小分子片段干预下LKB1及AMPK蛋白磷酸化水平升高。结论:1、晚期糖基化终末产物可以诱导Sulfamerazine antibiotic人主动脉内皮细胞发生铁死亡,其机制可能与LKB1/AMPK通路有关。2、GLP-1及其小分子片段可以减轻晚期糖基化终末产物诱导的HAECs铁死亡,其机制可能与LKB1/AMPK通路有关。

研究背景:非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是指由多种致病因素如病毒和细菌感染、自身免疫、肥胖,代谢等诱因使肝脏细胞受到破坏,肝脏功能受损并引起身体一系列不适症状的临床疾病。病理学特点表现为不同程度的脂肪浸润和炎症反应,随后发生肝纤维化,最终可发展为肝硬化,甚至肝癌。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是一种专性厌氧的革兰氏阴性杆菌,是目前公认的最重要的牙周炎致病菌之一。P.g可引起口腔微环境紊乱并引起一系列牙周疾病。P.g也可致使肠道微环境紊乱诱发肠道炎症并破坏肠道屏障使自身毒力因子进入血液循环从而导致NASH的发生以及消化系统疾病的恶化。同时,在P.g直接引起的NASH中,P.g导致肝细胞NF-κB信号通路激活使肝细胞发生炎症反应。然而,肝脏炎症反应增强可导致ROS增多,氧化应激增强从而引发肝细胞铁死亡。因此,探究P.g通过NF-κB信号通路调控肝细胞发生铁死亡在非酒精性脂肪性肝炎中的作用和机制具有一定的研究价值,并且阐明牙周疾病菌与NASH之间的关系,为后期通过治疗牙周炎来缓解或者预防NASH提供理论依据,为NASH治疗提供新的思路和策略。研究目的:通过体内外实验分析P.g通过激活NF-κB信号通路调控肝细胞发生铁死亡在非酒精性脂肪性肝炎中的作用和分子机制。研究方法:动物模型造模方法:实验组给BALB/C小鼠灌饲量约1×109的P.g,对照组给予相同量的BHI细菌培养基。在实验期间,每组小鼠每周称重一次,并监测其存活率。在第三,五周结束时,通过眼眶后静脉丛收集200μL的血液。在第七周灌饲后,收集血液、粪便,肝脏,脾脏,上颌骨,肠道器官。体内牙周,肠道和肝脏损伤实验:收集的血液测定肝功能生化指标ALT、AST评估肝脏功能;粪便采用16Sr RNA测序分析肠道菌群紊乱程度;H&E染色及免疫组化评估肝脏和肠道炎症浸润程度以及牙周炎症浸润情况和牙槽骨吸收情况。免疫组化分析肝脏和肠道中铁死亡相关调控蛋白(GPX4,ACSL4,SLC7A11)的变化;RT-PCR检测肝脏中铁死亡相关基因(Gpx4,Ptgs2,Ncoa4)的m RNA表达变化;Western blot分析肝组织蛋白中铁死亡相关调控蛋白的变化;RT-PCR检测肝脏中P.g菌特异性蛋白酶(Kgp,Rgp A,Rgp B)的m RNA表达变化;Western blot分析肝组织蛋白中NF-κB信号通路关键蛋白的表达水平。肝细胞损伤模型体外实验:将L-02细胞系与26.7%的P.g菌培养上清共培养24h,通过CCK-8和细胞活死染色分析P.g对肝细胞活力的影响;收集肝细胞RNA和蛋白后,RT-PCR检测肝细胞中铁死亡相关基因(GPX4,PTGS2,NCOA4)的m RNA表达变化,Western blot分析肝细胞蛋白中铁死亡相关调控蛋白(GPX4,ACSL4,SLC7A11)的变化,并分析肝细胞蛋白中NF-κB信号通路激活情况(NF-κB-p65,p-NF-κB-p65,IKBα)以及肝细胞炎症因子的表达情况(IL-17,IL-6,IL-10);并通过Western blot分析NF-κB入核情况;采用铁死亡抑制剂(Fer-1)浓度为5μmol/m L作用肝细胞2h后,在与26.7%的P.g菌培养上清共培养24h,评估细胞活力收集肝细胞RNA和蛋白,RT-PCR检测肝细胞中铁死亡相关基因(GPX4,PTGS2,NCOA4)的m RNA表达变化,Western blot分析Intrapartum antibiotic prophylaxis肝细胞蛋白中铁死亡相关调控蛋白(GPX4,ACSL4,SLC7A11)的变化;采用NF-κB信号通路抑制剂(QNZ)浓度为30 nmol/m L处理肝细胞2h后,在与26.7%的P.selleck PF-02341066g菌培养上清共培养24h,收集肝细胞RNA和蛋白,RT-PCR检测肝细胞中铁死亡相关基因(GPX4,PTGS2,NCOA4)的m RNA表达变化,Western blot分析肝细胞蛋白中铁死亡相关调控蛋白(GPX4,ACSL4,SLC7A11)的变化以及NF-κB信号通路(NF-κB-p65,p-NF-κB-p65,IKBα)的表达情况及肝细胞炎症因子(IL-17,IL-6,IL-10)的表达。研究结果:1.免疫组化及H&E染色可知小鼠牙槽骨吸收,牙周IL-17和IL-6的表达升高,提示P.g菌灌饲可造成小鼠牙周炎症;16Sr RNA测序结果发现小鼠经P.g灌饲后肠道微环境紊乱表现为拟杆菌群增加,厚壁菌群减少;肠道炎症反应增加以及绒毛间质水肿并发生铁死亡;肠道屏障改变后并发现P.g菌及其特异性蛋白Kgp,Rgp A,Rgp B在肝脏中表达,提示P.g菌可能定植于肝脏中;2.小鼠灌饲P.g菌7周后,血清学检测分析ALT、AST水平升高;H&E染色结果展示33.33%的小鼠肝脏发生脂肪性病变,100%小鼠肝脏出现大量炎症细胞浸润,提示P.g菌灌饲可造成小鼠NASH发生;3.P.g导致肝细胞发生炎症反应并激活NF-κB信号通路:免疫组化证实肝脏和脾脏组织中炎症因子的表达增加;Western blot和RT-PCR得知肝脏组织中炎症因子表达增加以及NF-κB信号通路激活;免疫荧光染色可见肝脏中NF-κB表达增强;体外实验证实NF-κB信号通路抑制剂QNZ可抑制NF-κB信号通路的激活并缓解由P.g引发的肝细胞炎症反应;4.P.g导致肝细胞发生铁死亡:免疫组化证实肝脏组织中铁死亡典型调控蛋白GPX4和SLC7A11表达减少,ACSL4表达增加;Western blot结果表明肝脏组织中铁死亡调控蛋白GPX4和SLC7A11表达减少,ACSL4表达增加;RT-PCR得知肝脏组织中铁死亡调控基因Gpx4的m RNA表达水平降低,Ptgs2和Ncoa4的m RNA表达水平增高,提示P.g灌饲后导致肝细胞发生铁死亡;体外实验通过使用铁死亡抑制剂Fer-1可缓解由P.g上清引起的肝细胞活性,铁死亡和炎症反应;5.NF-κB信号通路抑制剂QNZ可抑制由P.g上清引起的肝细胞铁死亡和炎症反应:Western blot结果表明铁死亡蛋白ACSL4的表达被QNZ抑制,并且QNZ有效的缓解GPX4和SLC7A11的表达水平;RT-PCR结果可知GPX4的m RNA水平被QNZ缓解,PTGS2和NCOA4的m RNA水平被QNZ抑制;Western blot结果表明QNZ抑制炎症因子IL-17,IL-6的表达,增加IL-10抗炎因子的表达。研究结论:1.体内研究证实通过灌饲P.g菌可导致牙周炎症和肠道炎症及铁死亡发生并导致肠微环境紊乱,发现P.g菌可能在肝脏中发生定植;2.体内研究发现通过灌饲P.g菌可直接导致肝脏功能损伤、肝脏炎症反应和脂肪性病变;体内研究证实P.g激活小鼠肝脏中NAMG510体内F-κB信号通路,体外研究证实P.g上清可激活NF-κB信号通路;进一步体外研究发现P.g上清可影响肝细胞活力及炎症反应并致使肝细胞发生铁死亡,并且体外通过铁死亡抑制剂可缓解铁死亡的发生;3.体外研究发现通过使用NF-κB信号通路抑制剂QNZ可抑制由P.g上清引起的肝细胞铁死亡并缓解肝细胞炎症反应,抑制促炎因子的表达。这表明P.g菌通过激活NF-κB信号通路致使肝细胞发生炎症反应进一步促进铁死亡的发生。图17表14参65

【目的】鉴定水稻颖壳类病斑突变体，并进行基因定位，为基因克隆及其分子机制研究奠定基础。【方法】对野生型材料LR005和经EMS诱变得到的颖壳类病斑突变体glmm1(glume lesion mimics mutant 1)进行农艺性状分析、扫PLX3397浓度描电镜分析、DAB染色和全硅含量测定。glmm1与广亲和材料L422杂交获得的F2群体用于遗传分析，利用图位克隆和BSA-seq方法进行基因定位。【结果】突变体glmm1在抽穗10 d后颖壳和叶片逐渐出现褐色斑点，成熟后颖壳完全呈现褐色。与野生型相比，突变体的株高、穗长、每穗总粒数、结实率和千粒重等都极显著降低。DAB染色表明glmm1颖壳和叶片的活性氧含量增多；扫描电镜显示突变体颖壳和叶片表面硅质细胞皱缩。遗传分析结果表明，突变体glmm1的颖壳类病斑表型受到一对隐性基因控制。利用glmm1与L422的RP56976小鼠F2分离群体，通过图位克隆和BSA-seAnal immunizationq等策略将glmm1定位在水稻第2染色体上68 kb的区间内。该区间内有10个候选基因。序列分析发现该区间仅有一个SNP位点，位于基因Lsi1(LOC＿Os02g51110)的第5个外显子上，导致第238位氨基酸由异亮氨酸变为苏氨酸。对颖壳和叶片全硅含量的测定表明，glmm1突变体中硅的积累减少，说明GLMM1可能是Lsi1的等位突变。【结论】GLMM1是Lsi1新的等位突变基因，该突变造成植株硅含量的降低和活性氧的积累，致使颖壳和叶片产生褐色类病斑。

目的:观察温阳通脉补血法的代表方加味黄芪桂枝五物汤治疗特发性肺纤维化的临床疗效,并进行动物实验研究其作用机制,为今后研究和治疗肺纤维化提供更多思路。方法:第一部分:收集山东中医药大学附属医院呼吸与危重症医学科门诊从2021年10月至2022年10月收治的42例特发性肺纤维化患者,随机分为对照组和试验组,分别应用吡非尼Bemcentinib半抑制浓度酮和加味黄芪桂枝五物汤治疗,并分别于治疗前和治疗对患者进行六分钟步行试验(6MWT)、肺功能(FVC、DLco)及中医临床症状分级量化评分,最后归纳、总结、分析,以评价各治疗组治疗效果。第二部分:36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组、中药低、中、高剂量组,每组6只。除空白组外,均使用博莱霉素气管滴入法构建肺纤维化大鼠模型,造模成功后各组给予相应药物灌胃28天后处死大鼠,称取大鼠肺湿重和体重计算肺系数;通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察各组大鼠肺组织病理学的改变;碱水解法检测大鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;Elisa法观察加味黄芪桂枝五物汤对肺纤维化大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响;RT-PCR法测定肺组织Nrf2、GPX4、SLC7A11、COX2、FSP1的m RNA表达量;相应试剂盒检测大鼠肺组织GSH、SOD、MDA、铁离子含量,最后应用SPSS统计软件对结果进行分析,以探讨加味黄芪桂枝五物汤治疗特发性肺纤维化的作用机制。结果:第一部分:临床研究结果显示,加味黄芪桂枝五物汤组可延长IPF患者6MWT距离,治疗前后对比,差异具有Microbial biodegradation统计学意义(P<0.05),吡非尼酮组治疗前后的6MWT结果呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后加味黄芪桂枝五物汤组患者6MWT结果优于吡非尼酮组;对于用力肺活量(FVC)和一氧化碳弥散量(DLco),两组患者治疗前后均没有明显差异,不具有统计学意义(P>0.05);加味黄芪桂枝五物汤组可降低中医临床症状积分总分,改善患者临床症状,治疗前后对比,差异具有明显统计学意义(P<0.01),对照组治疗前后中医临床症状总积分下降不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05),加味黄芪桂枝五物汤组优于吡非尼酮组;在不良反应发生率方面,吡非尼酮组共有4例患者组出现不良反应,加味黄芪桂枝五物汤组有1例患者出现不良反应,加味黄芪桂枝五物汤组不良反应发生率低于对照组。第二部分:动物实验研究结果显示,与空白组相比,其余各组HYP含量均有所升高、HE染色和Masson三色染色可见不同程度的炎性细胞浸润、肺纤维化改变和胶原沉积,证明造模成功。与模型组相比,吡非尼酮组及中药低、中、高剂量组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量均有所降低,差异具有明显统计学意义(P<0.01),与吡非尼酮组相比,中药高剂量组血清IL-1β的表达差异不明显,无统计学意义(VX-765 molecular weightP>0.05);加味黄芪桂枝五物汤可提高肺组织SOD、GSH表达水平,降低肺组织MDA表达水平,并呈剂量依赖性,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,加味黄芪桂枝五物汤可提高肺组织Nrf2、GPX4、SLC7A11m RNA表达水平,降低COX2、FSP1 m RNA表达及Fe~+含量,降低大鼠肺纤维化程度,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:加味黄芪桂枝五物汤可以明显减轻特发性肺纤维化患者的中医临床症状,治疗后中医临床症状分级量化评分较前改善,延长六分钟步行试验距离,减缓肺功能指标的进展,其机制可能是通过抑制氧化应激和铁死亡减少纤维化肺组织中铁的沉积和脂质过氧化物的积累来实现的。由此,温阳通脉补血法的代表方加味黄芪桂枝五物汤对于治疗和研究IPF有较高应用价值。

目的:以异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase, IDH)突变型星形细胞瘤为研究对象，探讨利selleck NMR用p16蛋白免疫标记替代CDKN2A基因纯合性缺失检测的可行性。方法:收集我院既往组织学诊断为低级别星形细胞瘤(WHO 2级)且伴有IDH突变的胶质瘤42例，通过免疫组化方法检测肿瘤组织中p16蛋白表达，分别依据其胞核或胞浆阳性表达率将肿瘤分为阴性(阳性率0%)、低表达(0%<阳性率≤10%)、中表达(10%<阳性率≤25%)、高表达(25%<阳性率≤50%)及过表Food Genetically Modified达(阳性率>50%)5个组别；利用FISH方法检测肿瘤CDKN2A基因纯合性缺失与杂合性缺失状况；采用Fisher精确检验评价p16蛋白表达水平与CDKN2A基因缺失间的相关性。结果:胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A基因纯合性缺失间存在显著相关(P<0.001)。阴性组(4/4,100%)均检测到CDKN2A纯合性缺失，中、高及过表达组(22/22,100%)均未检测到CDKN2A纯合性缺失。低表达组与CDKN2A纯合性缺失间缺乏明确对应关系，其中3例(3/16,18.75%)检出纯合性缺失，13例(13/16,81.25%)未检出纯合性缺失。胞核p16蛋白表达水平与CDKN2A杂合性缺失无相关(P=0.228)。胞质p16蛋白表达水平与CDKN2A纯合性(P=0.086)或杂合性(P=0.884)缺失均无相关。结论:IDH突变且组织学呈低级别的星形细胞瘤中，胞核p16蛋白阴性(阳性率0%)或中等及以VX-765生产商上表达(阳性率>10%)分别提示存在或不存在CDKN2A纯合性缺失。在上述区间p16蛋白与CDKN2A纯合性缺失间存在良好匹配关系，可用于协助病理诊断与分级。胞核p16蛋白低表达(0%<表达率≤10%)则不能预测CDKN2A纯合性缺失状态，此时仍需进行CDKN2A基因层面检测。

叶艺指兰花叶片上出现黄色或白色等的斑块,具有极高的观赏价值和商业价值。‘市长红’(‘Shi zhang hong’)作为建兰(Cymbidium ensifolium(L.)Sw.)的纯种品种,其叶片随着生长发育过程呈现不同的色彩,与一般的叶艺品种有明显的区别,但关于其叶色产生变化的原因还未明确。本研究以‘市长红’发selleck抑制剂育过程中表现为紫色、黄色和绿色的叶片组织为研究对象,进行细胞学观察、代谢组学分析及转录组测序,初步解析建兰‘市长红’叶片发育过程中叶色变化的分子机制,为培育兰属叶艺新品种提供重要候选基因。主要研究成果包括:1.细胞结构差异。‘市长红’叶片由紫色到黄色再到绿色的过程中,细胞结构方面存在差异性,主要表现为叶绿体含量和气孔数量减少,这对叶色变化产生影响。3种颜色叶片的超微结构存在明显的差异,与紫叶和黄叶相比,叶绿体在绿色叶片中结构完整,呈纺锤状‘八字’排列,膜结构清晰,基粒片层排列紧密且颜色较深,类囊体结构明显,嗜锇颗粒几乎没有,质体小球数量增加;与紫叶相比,黄色叶片中叶绿体数量少量增加,体积增大,类囊体结构稍显清晰。2.差异表达基因。转录组结果表明,‘市长红’中有266184条基因表达。紫叶和黄叶中共5376条基arsenic biogeochemical cycle因差异表达,红叶与绿叶中共19031条基因差异表达,黄叶和绿叶中共17259条差异基因差异表达。相较于绿叶,花青素合成相关基因BZ1以及类黄酮生物合成相关基因CHS、CHI、F3H、CYP73A、DFR、HCT、At1g67980在黄叶和紫叶中显著上调表达,叶绿素合成相关基因CAO、花青素合成相关基因UGT75C1、类黄酮合成相关基因ANR和类胡萝卜素合成相关基因VDE显著下调表达;相较于绿叶和紫叶,叶绿素合成相关基因CHLP transcript variant X2、CHLE、HEMB2以及类胡萝卜素合成相关基因crt Z、NCED1在黄叶中显著上调;相较于绿叶,叶绿素合成相关基因HEMC、PPOX、CHLH、POR在黄叶中显著上调表达,类胡萝卜素合成相关基因LUT5、D27、ZEP在紫叶中显著下调表达;相较于紫叶,花青素合成相关基因GT1在黄叶中显著上调表达。3.色素合成相关差异代谢物。代谢组测得的叶绿素类差异代谢物中,L-谷氨酸、胆色素原和叶绿素b的积累量由紫色变为绿色逐渐增加,5-氨基酮戊酸积累量逐渐降低;花青素类差异代谢物主要分为飞燕草素、矢车菊素、矮牵牛素、天竺葵素、芍药花色素、黄酮和原花青素,相较于绿叶,绝大部分代谢物在黄色和紫色叶片中显著上调表达;类黄酮类差异代谢物主要分为黄酮类、黄酮醇类、酚酸类、查耳酮类、异黄酮类、黄酮碳糖苷、二氢黄酮类和其他类黄酮,相较于绿叶,大部分代谢物在黄色和紫色叶片中显著上调表达;类胡萝卜素类差异代谢物主要分为胡萝卜素和叶黄素两大类,相较于紫叶,绝大部分在绿叶和黄叶中显著上调表达。叶绿素b、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、柚皮素查尔酮、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素是影响叶片呈色的关键物质。综上所述,经转录组和代谢组联合分析,初步推测,叶绿素合成调控基因CAO和类胡萝卜素合成调控基因VDE和ZEP的差异表达,导致叶绿素和类胡萝卜素积累量差异,叶绿体结构产生变异,是叶片呈现黄色和绿色重要原因;花青素Tofacitinib合成调控基因BZ1和类黄酮生物合成调控基因CHS的差异表达,导致花青素积累量产生差异,是叶片呈现紫色的重要原因。

目的：探讨低分子量肝素（low-molecular-weight heparin,LMWH）对骨肉瘤细胞恶性表型的影响及其对转化生长因子beta(transforming growth factor beta,TGFβ)/Smad信号通路的调控作用。方法：体外培养人骨肉瘤细胞SW1353，分为5组：对照组（不受药物处理）、LMWH组（5、10、20、40或80 IU/mL低分子量肝素钠处理24 h）、阳性对照组（6μM盐酸阿霉素处理24 h）、LMWH+通路抑制剂组（10 IU/mL低分子量肝素钠和10μM LY2109761共处理24 h）和LMWH+通路激活剂组（10 IU/mL低分子量肝素钠和10μM SRInfection transmissionI-011381共处理24 h）。利用细胞计数试剂盒（cell counting kit8,CCK8）和Hoechst 33258染色试剂盒检测细胞活力和凋亡率，以筛选最优低分子量肝素钠作用浓度。CCK8和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷试剂盒共同分析细胞增殖能力，酶联免疫吸附法测定细胞外炎症因子含量。蛋白免疫印迹法分析蛋白表达水平。结果：与对照组比较，LMWH组在低分子量肝素钠10～80 IU/mL剂量范围内细胞活力降低（PTalazoparib细胞培养 <0.05），而凋亡率升高（P <0.05），且10 IU/mL被选为低分子量肝素钠的最优作用浓度并用于后续一系列实验中。与对照组相比，LMWH组和阳性对照组增殖曲线、增殖率和促炎因子浓度[肿瘤坏死因子alpha(tumor necrosis factor alpha,TNFα)、白介素（interleukin,IL）-6、降钙素原（procalcitonin,PCT）]均较低（均P <0.05）,Bcl2、TGFβ、p-Smad3蛋白表达量减少（均P <0.001），而Bax、Smad7蛋白表达量增多（均P <0.001）,Bax/Bcl2比值升高（均P <0.001）。与LMWH组相比，增殖曲线和增殖率，TNFα、IL-6和PCT浓度，Bcl2、TGFβ和p-Smad3蛋白表达量在LMWH+通路抑制剂组降低（均P <0.05），但在LMWH+通路激活剂组升高（均P <0.05）;Bax、Smad7表达量和Bax/Bcl2比值在LMWH+通路抑制剂组增多（均P <0.001），但在LMWH+通路激活剂组减少（均P <0.001）。结论：LMWH可抑制SW1353细胞的增殖和炎症，而该作用依赖于对TGFβ/Smad3信号通路的抑制和对Bax/Bcl2蛋白表达比例的促进，为LMWH抗骨肉瘤提供新的实验依据和分子机GSK1349572小鼠制。

目的：探讨血液科患者临床分离病原菌分布及药敏特征，为临此网站床合理使用skin biophysical parameters抗生素提供依据。方法：回顾性分析2015-2020年南京医科大学第一附属医院血液科患者的病原菌种类分布和药物敏感性数据，并对不同标本类型分离的病原菌进行对比分析。结果：2015-2020年血液科1 501例患者共分离出病原菌2 029株，其中62.2%为革兰阴性杆菌，主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和鲍曼不动杆菌；革兰阳性球菌占18.8%，主要为凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）和金黄色葡萄球菌；真菌（17.4%）以念珠菌属为主。2 029株病原菌主要分离自呼吸道（35.1%）、血液（31.8%）和尿液（19.2%）标本。不同标本类型的病原菌均以革兰阴性杆菌为主（>60%），呼吸道标本最多见者依次为肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食单胞菌和鲍曼不动杆菌，血液标本以大肠埃希菌、CoNS、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌多见，尿液标本以大肠埃希菌和肠球菌最为常见。肠杆菌目细菌对阿米卡星、碳青霉烯类药物的敏感率最高（>90.0%），其次是哌拉西林/他唑巴坦；铜绿假单胞selleck化学菌对除氨曲南（<50.0%）之外的抗菌药物均有较好的敏感性；鲍曼不动杆菌对多种抗生素的敏感率低于70.0%。呼吸道标本中的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率高于血液标本和尿液标本。结论：血液科患者临床分离病原菌以革兰阴性杆菌为主，不同标本类型的病原菌分布有所不同，且各菌株对抗菌药物敏感性差异较大。临床应根据不同感染部位合理使用抗菌药物，预防病原菌耐药的发生。

目的 通过制备selleck产品破骨前体细胞膜纳米颗粒（nanoparticles,NPs）负载丹酚酸B(salvianolic acid,SalB)，构建载药纳米颗粒SalB-NPs，观察其对破骨细胞及成骨细胞分化的影响。方法 采用超声裂解、挤膜的方法制备NPs，并将NConditioned MediaPs与SalB共孵育后，使用200 nm聚碳酸酯膜挤出，获得SalB-NPs。在诱导小鼠原代破骨细胞分化和成骨前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化的过程中，按照处理方式不同，分为对照组、SalB组、SalB-NPs组。采用透射电镜、纳米粒度及ZETA电位仪和Western Blot对材料进行表征，采用噻唑蓝检测试剂盒检测材料对RAW 264.7和MC3T3-E1细胞活力的影响，采用高效液相色谱法检测SalB的释放率和装载率。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评价破骨细胞分化能力，通过碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色评估成骨分化能力，采用Real time-PCR检测破骨细胞分化及成骨分化相关基因表达水平。结果 制备的纳米颗粒直径在200 nm左右，同时表达RANK蛋白。TRAP染色显示SalB-NPs显著抑制破骨细胞的形成，下调破骨分化相关基因水平，与对照组和SalB组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。使用成骨诱导培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化，14 d ALP染色和21 d茜素红染色均显示SalB-NPs组ALP活性和钙盐沉积量较SalB组明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 寻找更多SalBNPs体外发挥促进成骨分化、抑制破骨细胞形成双重功效，作为骨质疏松的治疗药物开发，有很好的应用前景，未来仍需在骨质疏松模型动物进一步验证其治疗效果。

目的：探讨CYP2C19基因多态性与急性缺血性脑卒中氯吡格雷抵抗(CR)相关性。方法：选取2020年10月至2022年10月广州医科大学附属第五医院神经内科住院治疗的200例急性缺血性脑卒中患者为研究对象，按随机1:1的原则分成2组，其中未接受基因检测的100例患者设为A组，接受CYP2C19基因检PI3K抑制剂测的100例患者设为B组，并根据CYP2C19基因型分为B1组(快代谢型，n=33)、B2组(中间代谢型，n=46)、DS-3201价格B3组(慢代谢型，n=21),所有患者均口服氯吡格雷和阿司匹林，比较各组患者一般资料、不同基因型组患者血小板抑制率、氯吡格雷抵抗发生率，并统计心脑血管不良事件发生情况。结果：A组和B组患者一般资料比较，差异均无统计学意义autoimmune liver disease(P>0.05)。B1组血小板抑制率高于B2组和B3组；B1组CR率为30.30%低于B2组54.35%和B3组66.67%(P<0.05)。B3组不良事件发生率为28.57%,高于B2组8.70%和B1组6.06%。结论：急性缺血性脑卒中患者CYP2C19基因多态性与CR具有相关性，其中携带CYP2C19*2/*2、*3/*3、*2/*3突变基因患者更易发生CR,通过检测CYP2C19基因型有助于指导临床中抗血小板药物的应用。