akt receptor

目的调节性细胞死亡在紫外线诱导的皮肤炎症中起了重要的作用。课题组前期研究提示紫外线除了可以诱发角质形成细胞凋亡,很可能同时触发了其他种类的调节性细胞死亡方式。本研究分别在体外实验和动物实验中,探索了紫外线诱发角质形成细胞调节性死亡的方式。接着,本研究详细探讨了干扰角质形成细胞焦亡对紫外线诱发的角质形成细胞死亡和炎症的影响及其可能的分子机制。确认细节方法分为体外细胞实验和动物实验两部分。体外实验的研究对象为角质形成细胞系HaCaT细胞和人原代角质形成细胞。动物实验的研究对象为野生型C57BL/6J小鼠以及基因工程编辑小鼠。1、使用中波紫外线(Uselleck AY-22989VB)照射体外培养的角质形成细胞,鉴定其发生的调节性细胞死亡类型。2、鉴定角质形成细胞焦亡对下游重要的炎症因子IL-1β的影响。3、建立小鼠UVB急性皮肤损伤模型,在体内进一步确认UVB诱发的角质形成细胞调节性细胞死亡的类型。4、繁育GSDME敲除小鼠,探索抑制GSDME介导的焦亡对UVB诱发的角质形成细胞死亡与皮肤炎症的影响。5、构建GSDME角质形成细胞条件性敲除小鼠,进一步探索角质形成细胞是否贡献了 GSDME敲除导致的炎症微环境增强。6、通过检测募集中性粒细胞的细胞因子水平、测定中性粒细胞活化分子标志物、中性粒细胞耗竭实验等多种实验方式,探究中性粒细胞在GSDME敲除导致的UVB皮肤损伤加重中的作用。结果1、UVB照射(25 skin biophysical parametersmJ/cm2和50mJ/cm2),可以诱发体外培养的角质形成细胞出现GSDME介导的焦亡,并且对关键促炎细胞因子IL-1β的释放有促进作用。抑制GSDME降低了 UVB照射引起的角质形成细胞死亡。但是对程序性坏死(以关键分子MLKL的磷酸化作为标志)没有明显的诱导作用。2、在UVB照射小鼠模型中(430 mJ/cm2),小鼠表皮角质形成细胞出现了caspase-3、PARP、GSDME的剪切以及MLKL磷酸化水平的增加。3、GSDME敲除小鼠,表现出比野生型小鼠更为严重的UVB损伤表型。但是GSDME敲除小鼠虽不能执行GSDME介导的焦亡,PARP的剪切或MLKL磷酸化没有出现代偿性增加。4、UVB损伤的GSDME敲除小鼠,表现出比UVB损伤的野生型小鼠更强的招募中性粒细胞的免疫微环境,中性粒细胞在其局部皮肤损伤的组织中激活的分子标志物水平升高更为明显。5、UVB损伤的GSDME角质形成细胞条件性敲除小鼠,表现出与UVB损伤的野生型小鼠相近的炎症和损伤水平。6、中性粒细胞的耗竭,消除了 GSDME敲除小鼠中出现的紫外线皮肤损伤加重现象。结论1、UVB可以诱发体外培养的角质形成细胞焦亡并进一步介导IL-1β的释放,但对程序性坏死没有影响。2、在UVB小鼠皮肤损伤模型中,角质形成细胞同时出现了凋亡、GSDME介导的焦亡和程序性坏死三种调节性细胞死亡方式,UVB对在体和体外角质形成细胞细胞死亡方式出现差异性调控。3、GSDME敲除导致UVB损伤免疫微环境增强。4、角质形成细胞中GSDME的缺失并没有促进UVB损伤免疫微环境的增强。5、中性粒细胞过度活化是GSDME敲除导致紫外线损伤加重的重要因素。

1背景体外膜肺氧合(ECMO)凝血相关并发症的发生率高,甚至导致ECMO患者预后不良。目前ECMO患者的凝血评估研究多集中在其运行期间,此时凝血状态受患者、抗凝及ECMO设备多种因素影响,难以得出准确结论。ISTH DIC-2018评分由临床容易获取的实验室指标血小板(PLT)以及凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)组成,已广泛用于评估各种危重患者凝血状态和预后。然而,至今尚未发现关于成人ECMO患者启动前ISTH DIC-2018评分对预后评估的临床研究。2目的1.回顾性分析ECMO启动前PLT以及PT、FIB、D-D与成人ECMO患者的28天死亡率是否具有相关性。2.评估ECMO启动前ISTH DIC-2018评分是否可以作为28天死亡率的预测指标之一。3方法在2018年9月至2022年12月期间,总共收集了从安徽医科大学第一附属医院接受ECMO治疗的209名成人患者临床资料,排除ECMO支持≤72小时、1个月内接受抗血小板药物和/或抗凝治疗、血液系统恶性肿瘤、临床数据缺失过多、年龄<18岁、围产期的患者。第一部分:观察起点为患者ECMO启动当日,临床和实验室指标取ECMO启动前24小时内最差的结果,主要观察终点为28天全因死亡率,次要观察终点为住院死亡率、ICU死亡率以及ECMO成功撤机率,采用单因素分析比较两Nanomaterial-Biological interactions样本间中位数或构成比的差异,利用主成分分析法对数据进行降维,运用机器学习的Lasso算法建立凝血功能得分指标,采用倾向性得分加权法调整混杂因素对结局的影响,旨在分析ECMO启动前PLT以及PT、FIB、D-D、FDP异常与患者预后的相关性。第二部分:分析上述纳入研究的成年ECMO患者临床资料,评估ECMO启动前ISTH DIC-2018评分的诊断价值,显性ISTH DIC-VX-661临床试验2018评分是否可以预测28天死亡率。采用单因素和多变量逻辑回归分析来评估ECMO启动前ISTH DIC-2018评分与28天死亡率之间的关系。绘制接受者操作特征(ROC)曲线以确定ISTH DIC-2018评分最佳的截断值,评估ISTH DIC-2018评分预测28天死亡率的能力。采用Kaplan-Meier分析来比较不同ISTH DIC-2018评分的分组之间28天死亡率差异。4结果接受ECMO支持>72小时的133名成人患者(年龄≥18岁)符合入选标准。其中V-V ECMO患者72名(54.14%),V-A ECMO患者61名(45.86%)。28天ECMO患者总体死亡率为41.35%,其中V-V ECMO组为43.06%,V-A ECMO组为39.34%。第一部分:1.入选的ECMO患者:重叠加权法矫正多个变量(年龄、性别、BMI、心脏骤停、ECMO类型、上机前SOFA-PLT得分、V-A ECMO组的SAVE评分、V-V ECMO的RESP评分、实验室指标、上机前机械通气时间、上机前去甲肾上腺素最大剂量),高D-D组和高FDP组患者28天死亡率更高、成功撤机率更低。2.V-A ECMO组:PLT以及PT、FIB、D-D和FDP通过上述方法分析,结果均无统计学意义。3.V-V ECMO组:重叠加权后低PLT组住院死亡率更高;低FIB组住院死亡率更高;高D-D组和高FDP组的28天死亡率更高、成功撤Ipatasertib小鼠机率更低。为验证模型稳定性,纳入上机后存活≤72小时患者,结果提示低PLT组28天死亡率更高,住院死亡率更高;高D-D组成功撤机率更低;高FDP组28天死亡率更高,成功撤机率更低。4.Lasso回归分析PLT和凝血指标与预后相关性,发现总体ECMO患者和V-V ECMO组患者PLT和PT、FIB、D-D的异常与患者的预后(28天死亡、住院死亡、ICU死亡以及成功撤机)有明显相关性。第二部分:1.入选的ECMO患者:包括年龄、ECMO启动前去甲肾上腺素剂量、血乳酸、SOFA-PLT评分、ISTH DIC-2018评分5个变量,进行多变量逻辑回归分析,ISTH DIC-2018评分是具有统计学意义的预测指标(OR=1.376,95%置信区间:1.095-1.730,P=0.006)。ISTH DIC-2018评分的最佳截断值为4分,预测死亡的敏感性为54.5%,特异性为71.8%;ISTH DIC-2018评分的曲线下面积(AUC)为0.678(95%CI:0.585-0.771,P<0.001)。在Kaplan-Meier分析中,与ISTH DIC-2018评分<4的患者相比,ISTH DIC-2018评分≥4的患者28天累积死亡率更高(HR=1.980,95%CI:1.154-3.396,P=0.013)。2.V-A ECMO组:单因素分析非生存亚组的ISTH DIC-2018评分中位数高于生存亚组(5VS4,P=0.024);进行多变量逻辑回归分析,ISTH DIC-2018评分无统计学意义(P=0.140)。3.V-V ECMO组:多变量逻辑回归分析结果显示,ISTH DIC-2018评分是一个独立预测28天死亡率指标(OR=1.640;95%CI:1.044-2.576,P=0.032)。ISTH DIC-2018评分的最佳截断值也为4,敏感性为51.6%,特异性为80.0%;ISTH DIC-2018评分的AUC为0.702(95%CI:0.580-0.824,P=0.004)。ISTH DIC-2018评分≥4分的患者28天累积死亡率高于评分<4分的患者(HR=2.285,95%CI:1.117-4.674,P=0.024)。5结论1.ECMO启动前PLT以及凝血指标PT、FIB、D-D的异常与总体ECMO患者和V-V ECMO组患者28d死亡率明显相关。2.ECMO启动前的ISTH DIC-2018评分是成人ECMO患者28天死亡率的预测指标之一,尤其是V-V ECMO组患者。

背景:原发性肝癌中肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)是最常见的类型,具有高发病率、低生存率的特点。HCC的致病机制复杂,现有的研selleck抑制剂究还不能完全阐明其具体机制。目前肝癌缺乏有效的治疗方法,故进一步探究HCC的发病机制,寻找潜在治疗靶点,探究更为有效的治疗方法迫在眉睫。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是一种长度超过200个核苷酸,不具备编码蛋白质功能的RNA,但它可作为一种调控因子,调节基因的表达和多种生理病理过程,也可以通过调控表观遗传等机制在肿瘤发生和进展中发挥关键作用。目的:本研究通过探讨LncRNA-SNHG29在HCC中的表达及作用,为明确HCC的进展机制提供新的的理论支持。方法:(1)从医院收集22例HCC患者和37例健康人的血浆样本,采用磁珠法提取RNA,通过RT-qPCR检测血浆样本中LncRNA-SNHG29的表达。(2)合成靶向LncRNA-SNHG29表达的siRNA(si-SNHG29)。采用脂质体法对肝癌细胞Huh7进行转染,采用MTT实验以及高内涵成像系统检测细胞转染后72 h内的增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用划痕实验以及transwell实验检测Huh7细胞转染48 h后的迁移情况,Western blot检测Ecadherin、N-cadherin、Bcl2、Bax的蛋白表达。(3)Huh7转染si-SNHG29 24symbiotic bacteria h后,Western blot检测β-catenin在胞质和胞核中的表达情况,激光共聚焦显微镜检测β-catenin在细胞中的定位与分布。(4)采IACS-010759分子量用RNA免疫共沉淀技术验证LncRNA-SNHG29与β-catenin直接结合。结果:(1)LncRNA-SNHG29在HCC患者血浆中的表达量显著低于健康人,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,Huh7细胞干扰LncRNA-SNHG29的表达后,细胞活力和增殖能力显著增强(P<0.05)。流式细胞仪结果表明,与对照组相比,siSNHG29组细胞的凋亡率下降(P<0.05)。划痕实验和transwell实验表明,在Huh7细胞内干扰LncRNA-SNHG29的表达后细胞迁移能力增强(P<0.01)。Western blot结果表明,Huh7细胞内干扰LncRNA-SNHG29的表达,显著下调E-cadherin、Bax的表达,上调N-cadherin和Bcl2的表达(P<0.05)。(3)与对照组相比,si-SNHG29组的β-catenin在细胞质内的表达量显著下降,在细胞核内的表达量显著上调(P<0.05),激光共聚焦显微镜检测发现在Huh7细胞内敲降LncRNA-SNHG29后,β-catenin在细胞质内的荧光强度减弱,而细胞核内的荧光强度增强(P<0.05)。RNA免疫共沉淀结果表明,LncRNASNHG29可以与β-catenin直接结合。结论:LncRNA-SNHG29通过靶向结合β-catenin抑制肝癌细胞增殖和迁移。

目的:本课题是PEG联合中药活血通络汤来抑制SCF术后脊髓胶质瘢痕增生来达到促进SCF疗效的实验研究,通过观察新西兰兔SCF术后口服中药活血通络方疗效对比各项数据进行统计,来评价中药活血通络方的临床疗效及其安全性,为SCI的临床治疗提供新的方法和思路。方法:将纳入标准的新西兰兔以手术方式建立脊髓完全横断动物模型,构建模型后随机分成SCI组、SCI+PEG组、SCI+PEG联合活血通络方组,实验组动物术后48h开始喂食活血通络方,固定时间每日一次,一次10ml/kg,连续喂食30天。观察相应指标来明确应用活血通络方抑制胶质瘢痕后是否可以优化PEG-600治疗SCI的效果。采用Tarlov评分方法对两组动物进行术后后肢运动功能的评估。从术后DTI检查中观察脊髓横断面连接情况及信号通路的传导状况,再从动物活动状况评估治疗效果。对新西兰兔的脊髓损伤区组织进行免疫组化对GFAP、MSimilar biotherapeutic productBP、NF-200等指标进行分析。观察脊髓组织中胶质瘢痕的增生和神经纤维的再生状况。结果:1.行为学:SCI空白组术后各时间点评分较稳定,30天后下肢活动能力仍较差,PEG+中药组新西兰兔与空白组组间比较有明显差异(P<0.05)。提示活血通络方对改善新西兰兔脊髓损伤双后肢神经功能,具有一定的抗脊髓损伤作用,PEG组与空白组差异统计学比较有统计学意义p<0.05。PEG+中药组与空白组差异统计学比较,C组活动功能改善明显明显提高p<0.01,差异有统计学意义,说明PEG+中药活血通络方对促进活动功能恢复效果优于单纯PEG组。2.影像学:空白组影像扫描结果显示与其他组相比,空白组可见脊髓损伤区连接中断,PEG组和PEG+中药组移植部位解剖组织连续性重建更加显著Liproxstatin-1。通过观察神经纤维束的完整性,DTI结果表明了PEG和PEG+中药组中横断面的纤维再生明显。相比之下,空白组中的纤维再生不明显。3.组织学:HE染色结果提示脊髓损伤应用PEG及在PEG基础应用中药活血通络方对SCI后神经功能的恢复有明显的促进作用,损伤的胶质瘢痕增生改善情况PEG+中药组较单纯PEG组更为显著。在空白组脊髓病例图片中发现大量的GFAP增生,在PEG组中也存在部分GFAP,但在PEG+中药组中很少见,AIODs的半定量分析显示空白组和PEG+中药组之间存在显着差异(p<0.01)。这说明中药活血通络方对抑制星形胶质细胞是有积极作用的,同时PEG组中桥接组织也存在部分GFAP增生,与空白组比较(p>0.05)。在PEG组和PEG+中药组的桥接组织中观察到大量MBP,在空白组中很少见。半定量分析显示空白组与PEG组、PEG+中药组之间存在显着差异(p<0.01),这说明PEG对横断区脊髓生长起到了积极的促进作用。同时PEG组、PEG+中药组之间OD值相比较存在显著差异(p<0.05),说明PEG+中药活血通络方较PEG组促进神经再生selleck HPLC更为显著。NF-200是轴突细胞骨架的关键组成部分,PEG组、PEG+中药组横切位点有明显的轴突萌芽,但在空白组中没有。在PEG组、PEG+中药组的切片中也存在高密度轴突的区域,这是脊髓移植节段存活的标志。PEG组、PEG+中药组与空白组神经微丝蛋白AIOD的半定量分析都有显著差异,AB组间比较差异有统计学意义(p<0.05)。PEG组、PEG+中药组之间比较差异有统计学差异(p<0.05)。结论:1.PEG联合中药活血通络方治疗SCI,能够抑制胶质瘢痕形成,促进神经纤维修复。2.PEG联合中药活血通络方能够促进SCI运动功能恢复,优化脊髓融合疗效。

为了解环境丰富度在动物免疫功能和学习记忆中的作用,我们以雄性ICR小鼠为研究对象,随机分为对照组(n=7)和丰富环境组(n=7),处理33天。结果发现:丰富环境不影响小鼠的体重和身体成分包括胴体湿重、皮下脂肪重量及其含量、肠系膜脂肪重量及其含量、腹膜后脂肪重量及其含量和性周脂肪重量及其含量,也不影响器官鲜重包括脑、IBAT、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肾上腺、胃及其内容物、小肠及其内容物、盲肠及其内容物、结肠及其内容物、附睾以及储精囊,血液学指标中白细胞数(WBC)、淋巴细胞比例(LYMF%)、淋巴细胞数(LYMF)、中间群细胞数(MID)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞变异系数(RDW-CVcancer epigenetics)、平均血红蛋白含量(MCH)、分布宽度标准差(RDW-SD)、血小板数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板压积(PCT)、大血小板数(P-LCC)、中性粒细胞百分比(GRAN%)、中间群细胞百分比(MID%)、中性粒细胞数(GRAN)、血小板分布宽度(PDW)同样不受丰富环境的影响,但丰富环境显著提高了小鼠第21天的摄食量、红细胞数(RBC)和大血小板数(P-LCC),降低了睾丸重量。这些结果表明丰富环境不影响小鼠的免疫能力,但提高了其血液运氧能力和血液凝固能力。丰富环境同样不影响小鼠的中央格停留时间、水平穿行格数、直立次数、修饰次数、粪便粒数,暗示丰富环境不影响小鼠的焦Empagliflozin试剂虑样行为;丰富环境对Morris水迷宫实验中游泳距离、目标象限游泳时间占总时间的比、游泳速度均无显著影响,但显著降低Morris水迷宫实验中跨越原平台次数,说明丰富环境可能降低了小鼠的学习记忆能力。总之,丰富环境增强了小鼠的运氧与凝血能力,降低了学习记忆能selleck RP56976力,但对免疫功能及焦虑样行为没有影响。

【目的】本研究基于一例临床疑似家族性进行性高色素沉着和低色素沉着(Familial Progressive Hyperpigmentation and Hypopigmentation,FPHH)的患者,对其进行全外显子基因检测,对所发现的KITLG基因突变进行功能分析、细胞机制研究及动物模型研究,以了解该突变位点的致病性及其发病机制。【方法】通过全外显子测序及病人皮肤病理检测进行临床诊断。通过生物信息学分析该突变位购买Docetaxel点氨基酸保守性、蛋白结构预测和致病性预测。通过ABE单碱基编辑和构建过表达载体的方法在细胞水平分析其功能的变化。转录组测序寻找黑色素通路上的差异基因并分析其表达量变化。小鼠转基因动物水平进一步研究该突变的致病机制。【结果】全外显子检测发现KITLG c.329A>G,皮肤病理检测发现基底层黑色素沉着。生信分析表明该位点氨基酸较为保守,位点突变后蛋白质结构发生改变,致病性预测提示可能致病。过表达载体构建结果表明,相较于野生型,该位点突变后在m RNA水平和蛋白水平表达量显著下调。单碱基编辑后,相较于野生型细胞,在m RNA水平,纯合子细胞表达量显著上调,杂合子细胞表达量显著量下调。在紫外照射刺激后,三种细胞的表达量均上调,差异具有显著性。在蛋白水平,相较于野生型细胞,纯合子细胞表达量显著上调,杂合子细胞表达量差异不显著;紫外照射后,三种细胞表达量均上调,但是差异不显著。在黑色素水平,相较于野生型细胞,纯合子细胞黑色素含量下调,杂合子细胞黑色素含量上调,差异不显著;紫外照射后,三种细胞的黑色素含Infection horizon量均上调,纯合子细胞与野生型细胞差异具有显著性,杂合子细胞与野生型细胞差异没有显著性。RNA-seq结果发现差异基因MITF在纯合子细胞中表达量显著上调,杂合子细胞表达量差异不显著。黑色素合成关键基因TYR、TYRP1及TYRP2在A375细胞中表达量较低。【结论】研究结果表明KITLG c.329A>G突变位点具有致病性,且与FPHH病相关。并初步探索了该突变的致病机制,未来对于KITLG基因突变所致Belumosudil生产商疾病寻找新的治疗途径提供参考,具有重要的临床意义。

目的：建立测定复方富马酸酮替芬滴鼻液中富马酸酮替芬、盐酸麻黄碱、呋喃西林、亚麻酸、亚油酸含量的高效液相色谱方法。方法：采用Phenomenex Luna-C_(18Pexidartinib molecular weight)色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）；流动相A为0.1%磷酸水溶液-乙腈（95∶5），流动相B为乙腈，梯度洗脱。检测波长为205 nm（富马酸酮替芬、盐酸麻黄碱、亚麻酸、亚油酸）、370 nm（呋喃西林）；柱温40℃；流速1.0 mL·min~(-1)。结果：富马酸酮替芬、盐酸麻黄碱、呋喃西林、亚麻酸、亚油酸与相邻峰的分离度符合要求（r>1.5）；这5种成分的线性范围分别为0.247～0.743、1.265～3.795、0.052～0.156、0.156～0.468、0.074～0.221 mg·mL~(-1)(n=6)；平均回收率分别为99.64%、99.49%、100.6%、98.95%、98.78%(n=9)。结论Digital media：该方法简便准确、专属性强、重复性好，可用于复方富马Lapatinib研究购买酸酮替芬滴鼻液的质量控制。

目的:基于TCGA数据库获取HER2阳性乳腺癌患者靶向治疗耐药的铁死亡关键基因表达并基于铁死亡基因和临床特征建立乳腺癌靶向治疗耐药的风险预测模型。方法:通过TCGA数据库,收集HER2阳性乳腺癌患者的临床数据及其基因表达谱,利用R的limma R软件包分析HER2阳性的乳腺癌靶向治疗耐药患者与非耐药患者之间的差异表达基因,对差异表达基因进行KEGG功能富集分析。获取铁死亡相关基因,通过单因素分析明确铁死亡基因中的差异基因。根据差异铁死亡基因及其病人的临床特点,进行单因素、多因素COX回归分析明确引起HER2阳性乳腺癌患者耐药的独立危险因素。基于多因素COX回归分析结果绘制诺莫图建立风险预测模型。绘制ROC曲线并计算曲线下面积、绘制校准曲involuntary medication线及DCA曲线验证建立的预测模型的准确度及临床泛化能力。结果:通过TCGA数据库共获取239名HER阳性https://www.selleck.cn/products/mcc950-sodium-salt.html乳腺癌靶向治疗患者,根据患者是否耐药进行分组后进行差异基因分析,共获取148个显著下调差异表达基因和356个显著上调差异表达基因。通过查阅文献共获取25个铁死亡关键基因,进行进一步分析显示25个铁死亡相关基因中共有3个基因在耐药组患者中显著上调(NFE2L2、NCOA4、LPCAT4)。基于NFE2L2、NCOA4、LPCAT4和临床特征进行单因素、多因素COX分析显示年龄、ER、PR、NCOA4是引起乳腺癌患者靶向治疗耐药的独立风险因素(P<0.05)。根据年龄、ER、PR、NCOA4、骨转移、脑转移等数据绘制诺莫图以建立风ICI 46474险预测模型。绘制ROC曲线并计算曲线下面积显示靶向治疗后3个月、6个月、12个月的曲线下面积分别为0.673,0.0.693,0.774,表明模型有较好的预测效果。分别绘制靶向治疗后3个月、6个月、12个月的校准曲线显示预测值与实际值重合程度较好,证明模型与实际情况具有较好的一致性。绘制DCA曲线显示建立的预测模型具有较好的净获益率。结论:NFE2L2、NCOA4、LPCAT4都是铁细胞死亡相关基因,在对HER2阳性乳腺癌的靶向治疗及耐药人群中明显升高。年龄因素、ER、PR、NCOA4都是导致乳腺癌患者靶向疗法耐药的独立危险因素。基于铁死亡基因的HER2阳性乳腺癌患者靶向治疗后耐药发生的风险预测模型预测效能较好。

百合科(Liliaceae)中药材作为我国传统常用中药材,因含淀粉过高,本类药材具有不易干燥、贮运过程中易霉变的特点,常有使用硫磺熏蒸(以下简称“硫熏”)的乱象报道。再者,百合科大多为药食两用药材,故人们对其质量和用药安全的关注度更高。大量研究表明,硫熏往往会产生新化合物(以下简称“硫熏标志物”),进而影响中药材质量,严重威胁用药安全。但目前研究多集中在对单一药材的质量影响研究。当下,从同科或同属角度开展硫熏百合科中药材质量评价,探明硫熏标志物及其共性转化规律,建立稳定可靠的硫熏中药材质量评价体系对于阐明硫熏是如何影响中药材质量具有重要实际意义。目的:本研究以9种常见百合科中药材浙贝母、川贝母、平贝母、湖北贝母、伊贝母、百合、麦冬、知母、土茯苓为百合科类药材代表,采用代谢组学相关知识,分析其硫熏前后化学成分的变化,找出差异成分,挖掘共有及特征硫熏标志物,并对其安全性开展研究,以期阐明硫熏对百合科类药材质量和安全的影响机制,为市场监管和质量控制提供依据。方法:1.利用UPLC-QTOF-MS/MS及数据分析软件对硫熏前后9种百合科中药材的差异成分进行分析,利用Masslynx质谱软件挖掘共有及特征硫熏标志物,通过文献查阅及与对照品比对,总结硫熏标志物的裂解和转化规律;2.利用广泛靶向代谢组学对硫熏前后9种百合科中药材的代谢产物进行测定,通过PCA、OPLS-DA等多元统计方法分析硫熏前后的不含硫差异成分;3.利用对照品反应及核磁共振技术对硫熏标志物进行结构验证及鉴定;4.采用体外细胞毒性实验及斑马鱼模型实验对硫熏百合科中药材水煎液及共有硫熏标志物开展安全性评价;5.参照药典方法和UPLC-MS方法分别对市场上123批百合科类药材二氧化硫残留量和百合科类硫熏标志物进行检测,验证通过百合科类硫熏标志物检测判断其是否硫熏的可行性,服务市场监管。结果:1.基于UPLC-QTOF-MS/MS代谢组学的数据分析,挖掘了5种贝母中20个硫熏标志物,其中包括1个共有硫熏标志物,主要分为异甾体生物碱和十八碳烯酸两大类;解析了百合中10个苯丙烯酸类和呋甾皂苷类硫熏标志物、麦冬和知母中7个呋甾皂苷类硫熏标志物和土茯苓中2个黄酮醇苷类硫熏标志物。基于此,总结了9种百合科中药材硫熏过程中可能的转化规律,即异甾体生物碱类、苯丙烯酸类成分能与亚硫酸发生加成发应,羟基十八碳烯酸类、黄酮醇苷类和呋甾皂苷类能与亚硫酸发生取代反应,生成对应的含硫衍生物。2.通过广泛靶向代谢组学分析,从1061种百合科化合物中筛选出差异化合物743种,其中硫熏后成分含量升高的有312种,降低的有431种,相对含量变化较大的以生物碱类、黄酮类、萜类和氨基酸类为主,化合物含量上调的大多为氨基酸等初生代谢产物,下调的多为生物碱类、黄酮类等次生代谢产物。进一步对百合科中药材进行不含硫共有标志物挖掘,解析获得5种贝母药材硫熏前后共有差异化合物5个,包括骆驼蓬碱、4-甲基-5-噻唑乙醇、脱乙基莠去津、鸟苷3’,5’-环一磷酸和二烯丙基二硫醚,9种百合科中药材硫熏前后共有差异化合物1个,为4-甲基-5-噻唑乙醇。3.结构验证结果表明,贝母辛、王百合苷A、王百合苷B与焦亚硫酸钠反应的部分产物存在于其对应的硫熏样品中。对贝母辛的部分磺化产物进行重点分离制备,获得了100 mg的单体,同时利用核磁共振技术对其结构进行了鉴定并命名为磺酸贝母辛。4.细胞毒性结果表明,与正常对照组相比,硫熏前后9种百合科中药材水煎液均可不同程度的抑制selleckchem FUT-175L-02、HK-2和PC-12细胞的生长,但在相同剂量下没有显著性差异。斑马鱼模型急性毒性结果表明,在10和20 ng/尾剂量下,贝母辛对心血管的毒性作用大于磺酸贝母辛。在625、1250和2500 mg·L~(-1)浓度下,浙贝母水煎液与硫熏浙贝母水煎液对肝脏均有一定毒性,但硫熏前后没有显著性差异。抗炎结果表明,与模型对照组相比,贝母辛、磺酸贝母辛、浙贝母水煎液、硫熏浙贝母水煎液均具有抗肺炎功效。同一浓度下贝母辛的抗肺炎功效优于磺酸贝母辛,相CL13900浓度同低浓度下浙贝母水煎液硫熏后的抗肺炎功效优于硫熏前,浓度升高后硫熏前后浙贝母水煎液的抗肺炎功效无显著性差异。5.以磺酸贝母辛(m/z 508.27)作为贝母属的判别离子,二氢水合王百合苷A磺酸(m/z 497.09)、二氢水合王百合苷B磺酸(m/z 539.10)、王百合苷A二磺酸(m/z 561.06)、王Polyhydroxybutyrate biopolymer百合苷B二磺酸(m/z 603.06)作为百合的判别离子,麦冬皂苷B亚硫酸酯(m/z 981.43)和ophiofurospiside K亚硫酸酯(m/z 1127.49)作为麦冬的判别离子,提取离子色谱图。结果显示,89批贝母中有8批浙贝母、5批平贝母、4批川贝母、5批湖北贝母和4批伊贝母检测到共有硫熏标志物,检出率为29.21%;19批百合中有5批检测到硫熏标志物,检出率为26.32%;15批麦冬中未检出硫熏标志物。同时与二氧化硫残留量检测结果进行比较发现,硫熏标志物作为内在质控指标能够更加快速准确的反映中药材硫熏情况。基于磺酸贝母辛,可以实现硫熏贝母的快速检测,达到“一标多评”的目的。结论:本研究首次从同科及同属角度开展硫熏中药材质量评价,挖掘了9种百合科中药材共有及特征含硫标志物并总结了其裂解和转化规律,系统表征了9种百合科中药材硫熏前后差异化合物组成及类型,填补了硫熏对异甾体生物碱类、苯丙烯酸类和羟基十八碳烯酸类成分影响的研究空白。同时,获得了1种贝母属共有硫熏标志物磺酸贝母辛,实现了市场贝母药材的硫熏快速判别。从安全性评价角度,结合实际用药特点和用药习惯,适当硫熏(参照ISO 22590:2020中二氧化硫残留限量)并不会对百合科中药材产生安全问题。本研究将为其它具有相似化学成分类型中药材的硫熏研究提供示范和技术支撑,同时,基于共有硫熏标志物的中药材质量安全评价可为实现中药材质量可控和安全有效提供保障。

背景：核转录因子κB信号通路在骨质疏松症的发病中扮演着重要的角色。近年来，大量的研究表明萜类中药单体化合物可以通过调控核转录因子κB信号通Blebbistatin抑制剂路，抑制骨吸收细胞的活性，促进骨形成细胞的分化，从而降低骨吸收并BYL719增加骨形成，对骨质疏松症具有一定的预防和治疗作用。目的：通过对国内外文献的分析和总结，深入研究核转录因子κB信号通路与骨质疏松症的关系，并对萜类中药单体化合物调控核转录因子κB信号通路防治骨质疏松症的作用机制进行阐明，同时对靶向调控核转录因子κB信号通路防治骨BIOPEP-UWM database质疏松的萜类中药单体化合物进行系统性归纳。方法：由2名研究员根据拟定的纳入及排除标准以“NF-κB，骨质疏松症，成骨细胞，破骨细胞，血管生成，中药，萜类化合物”等为检索词检索中国知网数据库，以“NF-κB,osteoporosis,Osteoblasts,Osteoclasts,Angiogenesis,traditional Chinese medicine,terpenoid”等为检索词检索PubMed数据库相关文献，检索时间为建库至2022年12月，再通过第3名研究员对文献进行汇总和整理，最终纳入75篇文献进行系统性综述。结果与结论：(1)核转录因子κB信号通路能通过调控成骨细胞、破骨细胞的分化和增殖，以及血管生成，介导骨质疏松症的发病与进展。(2)核转录因子κB信号通路对成骨细胞的增殖和分化具有负调控的作用，激活核转录因子κB信号通路能增强破骨细胞的活性，抑制成骨细胞的生长，进而抑制代偿骨的生成保持骨稳态，但是过度激活核转录因子κB信号通路则会导致骨质疏松症。(3)核转录因子κB信号通路通过上调血管生成素1、血小板源性生长因子BB及血管内皮生长因子等细胞因子的表达水平，促进骨内血管生长，参与“血管生成-成骨”偶联。(4)萜类中药单体化合物在组织工程领域中具有促进骨细胞的增殖和分化，进而促进骨组织生长和修复的作用。(5)萜类中药单体化合物可以通过抑制核转录因子κB抑制蛋白降解，阻断核转录因子κB/P65蛋白磷酸化及核转位等过程，进而减弱核转录因子κB信号通路的传导，促进成骨细胞分化，抑制破骨细胞形成，起到防治骨质疏松的作用。(6)目前，萜类中药单体化合物调控核转录因子κB信号通路防治骨质疏松症的研究主要是基于体外细胞实验和动物模型，对于人体内复杂的生理和病理过程尚缺乏相关研究，未来需要开展更多的临床研究，进一步明确核转录因子κB信号通路参与干预骨质疏松症的作用机制和疗效。