akt receptor

目的：从沉默信息调节因子1（SIRT1）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路介导自噬角度，探讨白藜芦醇对大鼠膝关节骨性关节炎（KOA）软骨细胞凋亡的影响。方法：50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇组、白藜芦醇+SIRT1抑制剂组、自噬激活剂组，每组10只。除对照组外其余大鼠均通过注射弗氏完全佐剂造模法复制KOA大鼠模型，白藜芦醇组、白藜芦醇+AMPK抑制剂组、自噬激活剂组分别使用10 μmol/kg白藜芦醇、10 μmol/kg白藜芦醇+10mg/kg EX527、2mg/kg雷帕霉素进行干预，4周后，观察大鼠Lequesne MG膝关节级别；测定大鼠膝关节液中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）水平；HE染色与TUNEL染色观测大鼠膝关节软骨组织形态及凋亡情况；透射电子显微镜观察大鼠软骨细胞自噬情况；Western blot法检测SIRT1、p-AMPK、AMPK、LC3、beclin-1蛋白表达。结果：与对照组相比，模型组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度加重（P＜0.05）；与模型组相比，白GSK126研究购买藜芦醇组、自噬激活剂组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度减轻（P＜0.05）。与对照组相比，模型组大鼠软骨组织细胞排列紊乱，粗糙，存在纤维化变性、边缘丘状隆起，细胞器减少，可见空泡变性，自噬小体数目增多，膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率、Beclin-1和LC3-B/LC3-AInfectious diarrhea升高（P＜0.05），软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK降低（P＜0.05）；与模型组相比，白藜芦醇组、自噬激活剂组大鼠软骨组织细胞排列紊乱、边缘丘状隆起等现象有改善，自噬小体数目增多，膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率降低（P＜0.05），软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1和LC3-B/LC3-A水平升高（P＜0.05）；SIRT1抑制剂可逆转白藜芦醇组对大鼠软骨细胞的保护作用。结论：白藜芦Regorafenib醇可能是通过激活SIRT1/AMPK通路介导的自噬KOA大鼠软骨细胞凋亡，SIRT1抑制剂可逆转此过程。

近些年来,恶性肿瘤的发病概率和致死概率一直居高不下,并逐年上升,这给社会造成了非常大的经济负担,也给患者和家庭造成了沉重的影响,因此恶性肿瘤也成了目前当之无愧的“杀手”。其中前列腺癌的发病率愈加显著,占据男性癌症死亡第二位,并且是男性生殖系统最为常见的恶性肿瘤,据统计其发病率占全球男性新诊断癌症的7%(发达地区为15%)。我国针对前列腺癌尚未有大规模的筛查工作,这也导致了新发病率中70%的患者发现时,已经是中晚期并呈现出远处转移或淋巴结转移。整体来说目前针对早期未转移的前列腺癌的治疗手段大都采取手术切除、放射治疗、免疫治疗以及内分泌治疗等单一或者多重治疗方式,但这些治疗方式也仅仅对未发生转移性去势抵抗性前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate cancer,m CRPC)有一定的疗效,而针对m CRPC目前尚无统一有效的治疗方式,因此亟需寻找更为有效medieval European stained glasses的治疗手段以期达到治疗m CRPC,延长患者的生存率。最近的研究显示光热治疗法(photothermal therapy PTT)是治疗前列腺癌的一种较好的手段,简单来说PTT是利用具有较高光热转换效率的材料,将其注射入人体内部,利用靶向性识别技术聚集在肿瘤组织附近,并在外部光源(一般是近红外光)的照射下将光能转化为热能来杀死癌细胞的一种治疗方法。这就需要具有较好光热转换效率的材料联合激光将光能转化为热能从而杀死肿瘤细胞。同时肿瘤免疫治疗可有效激活和保护免疫系统,以抵御肿瘤细胞的侵袭,并有效地阻止其发展。这种治疗方法可以采用多种手段,如单克隆抗体、治疗性抗体、肿瘤疫苗、生物大分子药物和小Canagliflozin核磁分子抑制剂等,通过使用一系列免疫检查点抑制剂,可以有效将前列腺癌“冷肿瘤”转变为“热肿瘤”。因此本文选择具有较高光热转化效率的二维黑磷纳米片,通过一系列的合成方式并采用液相剥离手段构建成为Se@BPNSs材料,并结合前列腺癌细胞膜,其在细胞和动物层面联合Anti-PD1以期实现光热联合免疫治疗激活免疫细胞的效果,为治疗前列腺癌带来一定的临床理论意义。实验目的:为了达到光热联合免疫检查点抑制剂治疗转移性去势抵抗性前列腺癌的目的,实现“冷肿瘤”转换为“热肿瘤”过程,本研究从光热材料出发,设计并合成二维材料硒掺杂的黑磷,并通过液相剥离的手段形成光热转换效率更高的Se@BPNSs。此外为了解决并实现较好的实体瘤的高通透性和滞留效应(Enhanced permeability andretention effect,EPR),我们在Se@BPNSs外层包裹了鼠源动物前列腺癌细胞膜RM-1,可以有效实现同源靶向作用。通过在瘤体注射一定剂量的Se@BPNSs@RM-1通过808nm激光的照射下,Se@BPNSs将光能转换为热能达到较高温度杀伤肿瘤细胞,同时释放的抗原可以被DC细胞所捕获。同时在此期间,我们联合免疫检查点抑制剂Anti-PD1以期放大免疫治疗,从而促进免疫细胞浸润。本研究通过在材料合成及其表征证实Se@BPNSs的成功制备,细胞层面和动物层面双向进行验证,以达到光热协同免疫治疗的目的,为治疗m CRPC带来一定的临床指导意义。实验方法:第一部分:采用液相剥离的方法制备硒掺杂的黑磷纳米片Se@BPNSs,通过一系列的表征手段,包括:透射电镜(TEM)、粉末X射线衍射(PXRD)、X射线光电子能谱仪(XPS)以及原子力显微镜(AFM)等手段证实材料的成功制备。硒的加入提高BPNSs的空气稳定性、延缓其降解,同时利用细胞膜表面特异性识别能力,用前列腺癌细胞膜包裹制备出的Se@BPNSs构成细胞膜仿生修饰纳米片,该纳米递药系统保留了留BPNSs良好光热效应能力的同时,赋予该材料前列腺癌细胞膜的特异性抗原,使得该纳米递药系统具有抗免疫逃逸及肿瘤靶向的能力,以增强前列腺癌治疗效果。第二部分:在细胞层面探究硒掺杂黑磷化合物对前列腺癌细胞的抗增殖活性及其潜在作用机制,采用CCK-8、细胞侵袭和迁移实验以及检测其ROS活性氧的生成情况,最后采用流式细胞术进行验证其抗增殖活性。第三部分:在动物层面将药物向肿瘤部位递送,联合抗PD-1检查点阻断剂,探究硒掺杂黑磷化合物抗癌免疫治疗相关机制,通过血生化指标、药物的EPR效应以及肿瘤免疫细胞的流式检测(DC、Treg等细胞)进一步揭示其抗肿瘤活性的机制。实验结果:1、本研究采用气相沉积法结合液相超声剥离法成功制备出Se@BPNSs二维纳米薄片,构建一种新型的细胞膜仿生修饰纳米递药系统,即Se@BPNSs@RM-1。该材料尺寸约为100 nm左右。元素分析表明,Se成功掺杂到BP中。AFM结果证明,在掺Se后BP纳米片的尺寸相较于不掺Se,尺寸更加稳定在100 nm左右,二维纳米薄片的厚度没有发生改变,表明Se的引入能够稳定活泼的BP纳米片。从XRD晶体结构中看到,制备出的Se@BP二维纳米薄片具有与BP相似的晶体结构,表明Se掺杂不会改变黑磷纳米片稳定的层间结构。进一步的XPS实验表明,Se掺杂提高BP稳定性可能是由于,Se提供的电子空位与黑磷表面孤对电子发生氧化作用,BP中的P网络得以稳定。2、细胞层面对Se@BPNSs@RM-1的抗肿瘤活性进行了评价。结果表明,Se@BPNSs@RM-1可抑制肿瘤细胞的增殖活力,通过划痕试验、细胞侵袭实验,对前列腺癌细胞在各种给药方式下的转移能力进行了考察。结果表明,Se@BPNSs@RM-1能够抑制前列腺癌细胞的侵袭能力。另一方面借助流式细胞术,对前列腺癌细胞在各种给药方式下的死亡情况进行了考察,发现具有生物活性的Se@BPNSs@RM-1纳米片也表现出良好的抗侵袭活性。总的来说,Se@BPNSs@RM-1可有效抑制肿瘤细胞的增殖,并可以提高CRT以及HMGB1的含量,为后续动物实验的免疫治疗提供一定的指导意义。3、动物实验采用前列腺癌小鼠单侧瘤模型,对Se@BPNSs@RM-1的体内抗肿瘤活性进行了评价。借助小动物活体成像仪发现生物细胞膜包裹的硒掺杂黑磷复合物可以提高药物在荷瘤小鼠瘤体内的积累,有助于提高药物的靶向治疗作用。此外我们对肿瘤体内的Treg细胞以及淋巴结中的Treg和DC细胞进行了检测,发现Se@BPNSs@RM-1联合Anti-PD1以及激光组的Treg细胞表达量最低且DC细胞含量最高,这说明联合PD-1检查点阻断剂,能够进一步增敏其抗肿瘤活性,激发机体的免疫应答能够力。结论:1、成功设计合成并制备出Se@BPNSs@RM-1,并对其进行了一系列的表征实验已证实光热材料的成selleck产品功制备;2、Se@BPNSs@RM-1能够提高前列腺癌细胞活性氧水平,从而诱导肿瘤细胞的死亡,并释放一定量的CRT以及HMGB1,同时其ATP的活性也有所增强。借助流式细胞术,对前列腺癌细胞在各种给药方式下的DNA含量进行了考察。Se@BPNSs@RM-1可将前列腺癌细胞抑制在G0/G1期;3、动物实验结果表明,Se@BPNSs@RM-1可显著抑制肿瘤细胞的增殖,联合PD-1检查点阻断剂,能够进一步增敏其抗肿瘤活性,实现光热联合免疫治疗的作用;

目的:观察附桂疏调生血方对急性白血病化疗后骨髓抑制的临床疗效和安全性,探讨急性白血病化疗后骨髓抑制的中医病因病机,分析附桂疏调生血方促进骨髓造血功能恢复的作用机制,为急性白血病化疗后骨髓抑制提供诊疗思路。方法:本课题以肝郁脾肾阳虚型急性白血病患者为主要研究对象,六十名符合入选标准的患者,随机分配:治疗组三十人,对照组三十人。治疗组化疗结束后予常规治疗+附桂疏调生血方(颗粒剂型)口服,中药7天为一疗程,molecular oncology以3个疗程共21天为观察期。对照组:仅常规治疗。观察两组治疗第0天、7天、14天、21天血常规变化(WBC、N、Hb、PLT)评估骨髓抑制程度,监测两组治疗前后外周血清G-CSF及免疫细胞CD3+、CD4+的变化情况,记录治疗周期内两组患者输注成分血(悬浮红细胞、血小板)数量、升细胞药物(重组人粒细胞刺激因更多子、白介素-11)的数量,通过主要中医症状评分、卡氏评分进行临床疗效判定及生存质量评估,观察治疗前后两组生化凝血指标(ALT、AST、BUN、APTT、PT、FIB),各项生命体征变化评估安全性,记录不良反应。所得数据用SPSSAU软件进行统计分析。结果:1.血常规:治疗第0天,两组患者的WBC、N、PLT、Hb差异无统计学意义P>0.05;治疗第7天,两组出现重度骨髓抑制,但治疗组骨髓抑制程度较对照组轻。第14天、第21天两组患者WBC、N、PLT、Hb较前上升,治疗组上升幅度更明显(P<0.05)。2.免疫细胞CD3+、CD4+:治疗组CD3+、CD4+提高更明显,具有显著统计学差异(P<0.01)。3.外周血清G-CSF变化:治疗组G-CSF水平明显高于对照组(P<0.05),具有统计学差异。4.输血频次:治疗组输注悬浮红细胞、单采血小板数量少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.升细胞药物使用情况:两组患者升细胞药物(粒细胞刺激因子、白介素-11)使用数量对比,治疗组升细胞药物使用数量少于对照组(P<0.05),具有统计学差异。6.中医证候评分:治疗组能明显改善中医证候,评分优于对照组(P<0.05)。7.KPS评分:治疗组能明显提高生存质量,评分优于对照组(P<0.05)。8.安全性指标:两组患者治疗前后的各项安全指标均在可控范围内(P>0.05),无严重不良反应。结论:1.肝郁脾肾阳虚证型是急性白血病化疗后骨髓抑制的基本证型之一,附桂疏调生血方能促进化疗后骨髓造血功能的恢复,其机制可能是该方能够影响骨髓造血微环境中正性调控因子G-CSF及免疫细胞CD3~+CD4~+的水平有关。2.附桂疏调生血方的应用可明显减少急性白血病化疗后骨髓抑制期悬浮红细胞、机采血小板的输注,减少升细胞ABT-199体内实验剂量药物(重组人粒细胞刺激因子、白介素-11)的使用数量;3.附桂疏调生血方能够提高AL化疗患者的机体免疫力,提高临床疗效,改善生活质量,起到明显增效减毒作用,并且安全可靠,值得临床推广。

以青稞麸皮为原料，采用微获悉更多波超声联用提取青稞β-葡聚糖，并对其提取效果、理化性质及结构特性进行探究。在相同升温速率下，微波增强了α-淀粉酶活性。青稞β-葡聚糖提取效果与超声的功率和时间有关。提取青稞βPine tree derived biomass-葡聚糖的超声功率为600 W，时间为30 min，微波加热60 °C，时间30 min，β-葡聚糖得率最大可达6.30%。理化性质结果显示，随着超声处理时间的延长，青稞β-葡聚糖溶解度和起泡能力分别增加了24.57%和44.84%，但浊度和乳化能力显著降低，分别降低41.67 FTU和39.33%（P<0.05）。粒径分布结果显示，随着超声处www.selleck.cn/products/azd6738理时间的延长，提取的青稞β-葡聚糖相对分子质量减小，超声改变了β-葡聚糖的流变行为，溶液黏度降低并出现剪切稀化现象；红外光谱结果显示，超声处理未改变β-葡聚糖的官能团，但改变了糖苷键。微观结果显示，超声处理使青稞β-葡聚糖结构变得更加松散，有利于提高青稞β-葡聚糖提取效果。综上所述，微波超声联用提取的青稞β-葡聚糖为其开发新食品类型和功能性产品提供一定的参考。

目的：探讨皮内针周期选穴联合中药外敷对乳腺增生症（HMselleck LY294002G）的临床疗效。方法：选取HMG患者132例，利用随机数字表法分为观察组和对照组各66例。两组均予中药外购买SAG敷，对照组加用固定穴位皮内针治peroxisome biogenesis disorders疗，观察组皮内针治疗在对照组基础上加周期（经前期、经后期、经间期）选穴治疗，两组疗程均为3个月经周期。观察治疗前后两组患者B超下乳腺腺体厚度变化，比较两组治疗前后同一月经周期节点的乳房疼痛评分、肿块情况评分、全身伴随症状评分，统计治疗有效率，评估疗效。结果：治疗后两组患者的乳腺腺体厚度、乳房疼痛评分、肿块情况及全身伴随症状评分较治疗前均有好转（P<0.05），观察组乳腺腺体厚度小于对照组（P<0.05），乳房疼痛评分、肿块情况评分及全身伴随症状评分均较对照组低（P<0.05）；观察组总有效率95.45%，对照组74.24%，观察组疗效优于对照组（P<0.05）。结论：皮内针周期选穴治疗联合中药外敷可明显缓解HMG患者乳房疼痛，减小肿块，改善全身伴随症状，具有较好的临床疗效。

为筛选适于本土种植的红色酿酒葡萄品种，2020年对黄河故道产区8个欧亚种红色酿酒葡萄引进种和参照品种(赤霞珠)成熟期果实品质指标(理化指标、酚类物质含量、抗氧化活性和颜色指标)、2021年对筛选品种以及河南郑州和河北怀来赤霞珠葡萄所酿制葡萄酒酿酒特性指标(活性物质含量和感官质量)分别进行检测分析。结果表明，黑多内葡萄果粒小PR-171分子量、皮果比高，果汁可溶性固Staurosporine核磁形物含量适中、颜色指标表现佳，果皮总酚、总类黄酮、缩合单宁和总黄烷醇含量以及DPPH自由基、ABTS阳离子自由基清除率和铜离子还原力均处于最高水平；次年小容器酿造试验，黑多内葡萄酒各项酿酒特性指标均优于本土赤霞珠葡萄酒，与河北怀来赤霞珠葡萄酒相校viral hepatic inflammation，整体可比且总类黄酮、总黄烷醇含量和铜离子还原力更高，感官质量更优。因此，黑多内适于在黄河故道产区推广种植并用于酿造优质红葡萄酒。

目的：探究低分子量肝素钙联合利伐沙班治疗急性肺血栓栓塞症（APE）的临床效果，并观察其对凝血纤溶和血小板活化的影响。方法：选择2019年1月—2023年1月在石狮市医院呼吸与JQ1 MW危重症医学科治疗的100例APE患者作为研究，应用随机数表法将患者分为对照组（低分子量肝素钙联合华法林）及观察组（低分子量肝素钙联合利伐沙班），各50例。对比两组临床疗效、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、N末端脑钠肽前体（NT-proBEnterohepatic circulationNP）]、血管内皮功能[可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、内皮素1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)]、凝血纤溶指标[蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、D-二聚体（D-D）]、血小板活化指标[血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)、P-选择素（P-selectin）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管性血友病因子（vWF）]。结果：对照组治疗总有效率低于观察组，差异有统计Navitoclax说明书学意义（P<0.05）。两组治疗前炎症因子水平、血管内皮功能、凝血纤溶指标、血小板活化指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；观察组治疗后TNF-α、hs-CRP、NT-proBNP、sICAM-1、ET-1、TXB2、PS、PC、D-D、GPⅡb/Ⅲa、P-selectin、AngⅡ、vWF水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：低分子量肝素钙联合利伐沙班治疗APE，可减轻炎症反应，改善血管内皮、凝血纤溶功能，降低血小板活化因子水平，效果显著。

研究目的:骨质疏松症是脊髓损伤后的常见并发症之一,大量骨质流失导致脆性骨折的高发,严重影响着患者的生活质量。通过对脊髓损伤后骨质疏松症的相关文献进行研究,将导致骨量变化的相关因素进行综述,为后续设计运动训练方案改善脊髓损伤患者骨密度提供一定的参考,实现改善患者生活质量的康复目标,更好的实现”体医融合”。研究方法:使用文献资料法和文献分析法对CNKI、万方、维普、PubMed、WebofScience等数据库中脊髓损伤后骨质疏松症的相关文献进行分析总结。研究结果:脊髓损伤患者的骨折率是一般人的两倍,骨折后合并其他并发症感染的风险增加,不利于脊髓损伤患者的康复。根据文献分析结果得知,脊髓损伤后发生的骨质疏松是由多种因素共同诱发的,主要因素包括机械刺激的改变、神经血管调节的改变和激素水平的变化。脊髓损伤后,由于运动功能和行走能力的丧失导致的机械刺激的消除,被认为是影响脊髓损伤后骨质流失的重要因素。损伤后,肌肉失神经支配,收缩能力的下降,产生负荷力大幅度丢失,使得骨所受的机械刺激减少,极大的导致了骨的去矿化。机械负荷的缺乏使得成骨细胞形成受到抑制,骨吸收Vorinostat说明书的增加导致骨的脱矿化。检测发现,脊髓损伤后骨吸收标志物显著增长,且幅度明显高于骨形成标志物。破骨细胞供应过剩,成骨细胞供应不足,平衡被打破,可能是影响SCI后骨质疏松的关键因素,而机械加载可以改善骨的大小和形状,并通过提高组织密度来增强骨组织。骨吸收的增加以及骨钙的流失,使血钙浓度增高,同时肠道对钙的吸收减HNF3 hepatocyte nuclear factor 3少,导致患者出现高钙血症和高钙尿症。神经系统病变引起神经血管变化以及骨组织神经支配紊乱影响着脊髓损伤患者的骨矿物质含量。骨骼周围充满血管和神经,包括存在在骨膜、骨髓等结构中存在的交感神经和感觉神经,这些神经在骨小梁区域与血管共同形成密集的平行网络,脊髓损伤后骨骼失神经支配,显示出骨沉积的矿化减少以及吸收增加。在将交感神经切除的动物模型中,出现非承重骨的骨质流失,这提示交感神经对骨骼重塑具有重要作用。由中枢神经系统分泌的神经肽(如血管活性肠肽(VIP)及神经肽Y(NPY)等)分布于骨髓、骨膜、骨组织内,与血管伴行,在骨骼系统中,成骨细胞和破骨细胞存在这些神经肽的受体,这些神经肽影响着成骨细胞和破骨细胞的活性,继而使得骨矿物质含量发生改变。脊髓损伤后神经通路中断,骨血流变化表现为髓内压高和腿部动静脉分流,导致静脉瘀滞和骨代谢不良,骨密度流失。骨代谢受到多种激素的直接或间接调控影响,如甲状腺激素、维生素D3、瘦素、生长激素(HGH)、性激素等。脊髓损伤后由于神经通路的改变,骨骼周围血管发生继发性改变,使得骨骼周围这些激素的含量发生变化,继而对骨代谢产生一定量的影响。脊髓损伤患者不仅会经历几种合成代谢和生长激素—尤其是性激素—的下降,而且还会出现免疫功能障碍,自然杀伤细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞功能被抑制。损伤过后下肢活动量的减少,减少了下肢骨间隙液体运动,导致前列腺素、生长因子等流动减少,使得骨生成减少,吸收增多。维生素D能够促MCC950 IC50进肠道钙吸收,使新形成的骨组织矿化,影响肌肉骨骼健康。由于肾结石的高发,使得脊髓损伤患者在饮食上限制钙摄入,这会导致维生素D的不足,再加上光照时间减少或服用抗惊厥或其他药物导致维生素D代谢加速,使体内维生素D的缺乏。VD与钙的不足刺激甲状腺素(PTH)的释放,导致骨吸收增强,加速了骨质流失。研究结论:多种因素共同导致了脊髓损伤后骨质疏松症的发生,机械刺激的减少是其中最主要的因素但不是唯一的因素,神经血管的变化和激素的改变影响着脊髓损伤患者的全身骨密度。骨量的丢失在下肢更为明显,在进行位置转移甚至康复训练时容易引发脆性骨折。骨折过后延迟愈合、自主神经功能障碍、骨髓炎等等并发问题会进一步恶化下肢功能,影响患者功能的康复。所以,应在脊髓损伤后的早期重视骨质流失这一问题。以机械刺激的引入、药物等方式进行治疗。机械刺激的引入可以选择一些体育锻炼的方式,有研究指出太极能够改善女性骨质疏松症,可以考虑将这类有氧运动与康复训练相结合,改善骨质疏松。

由细胞分泌的趋化因子通过在组织中形成浓度梯度,以控制免疫细胞的定向迁移。在体液免疫反应和炎症反应中对免疫细胞的募集起关键作用。但趋化因子如何在组织中形成浓度梯度至今仍存在很大争议。目前主流研究认为,趋化因子通过分子扩散形成浓度梯度,但其稳定性欠佳,不足以支撑免疫细胞的定向迁移;且大部分趋化因子由于与细胞膜表面的糖胺聚糖相互作用而被锚定,不能在组织中形成自由分子,因而无法通过分子扩散形成浓度梯度。本课题以研究趋化因子如何在体内形成稳定的浓度梯度来行使趋化功能为目的,证明了趋化因子CCL5与细胞表面的糖胺聚糖发生共更多相分离,形成稳定的浓度梯度,介导免疫细胞的定向迁移,提出了全新的基于趋化因子相分离体系的源-汇模型,阐明了一种趋化因子浓度梯度形成的新机制,为介导免疫细胞的定向迁移提供了新的思路。本文通过分子生物学技术构建pET-bacteriochlorophyll biosynthesis28a-CCL5以及CL 318952 molecular weightpET-28a-CCL5-EGFP和相关突变质粒,并表达纯化得到有活性的CCL5、CCL5-EGFP以及相关突变蛋白。通过共聚焦显微镜、酶标仪、荧光漂白恢复和Transwell趋化实验等实验,揭示了CCL5通过其~(44)RKNR~(47)结构域与肝素以静电相互作用为驱动力发生液液相分离,并增强其趋化能力。体外扩散实验证明,由弱相互作用驱动的CCL5的扩散,使其趋化能力增强。此外,在可模拟组织内CCL5释放的源-汇模型中,CCL5可在组织中与细胞表面糖胺聚糖共相分离的形式形成稳定的浓度梯度,同时能够显示出强大的趋化功能。总之,本课题揭示了CCL5通过与糖胺聚糖共相分离,使其在组织内形成稳定浓度梯度,并增强其趋化功能的分子机制,提出了基于相分离的源-汇模型,为趋化因子在组织内的功能提供了新的视角,回答了趋化因子在组织内如何行使功能的问题。

目的：探讨华良姜素通过调节自噬对PDGF-BB诱导下血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法：利用25ng/mLPDGF-BB刺激人血管平滑肌细胞（HA-VSMCs）诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移。实验分为对照组（NC），PDGF-BB组（模型组），PDGF-BB+华良姜素（10、20、40μmol/L）组，DMSO组。采用CFG-4592CK8实验检测HA-VSMCs增殖活力，Transwell实验检测HA-VSMCs迁移能力，免疫印记实验（westernblotting）检测自噬效应uro-genital infections蛋白p62、LC3、雷帕霉素机械靶蛋白（mTOR）以及磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平的变化。结果：PDGF-BB处理后，HA-VSMCs增殖和迁移能力显著上调（P＜0.001），华良姜素显著抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMCs的增殖和迁移，且随浓度的上升抑制能力越明显（P＜0.05，P＜0.01）；与PDGF-BB组比较，40μmol/L华良姜素处理后，LC3-I以及mTOR蛋白表达水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ、p62与p mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05，P＜0.01），同时发现在40μm购买AG-221ol/L华良姜黄与AMP-kinase抑制剂compound C的干预下，对PDGF-BB诱导的HA-VSMCs AMPK/mTOR信号通路的影响一致。结论：华良姜素可抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMCs的增殖和迁移，其作用机制可能是通过上调AMPK/mTOR信号通路，抑制自噬实现。