akt receptor

为探索酚类提取物及VX-661浓度其复配物的协同增效作用，以桑葚和甘蔗糖蜜多酚作为研究对象，分R428供应商别测定其总酚、黄酮含量及酚类组成，基于单一提取物的总酚含量按一定配比制得复配物，评价抗氧化活性。结果表明，桑葚游离多酚（MFP）占桑葚总酚含量的90.3%，为677.62 mg没食子酸当量（Gallic Acid Equivalent,GAE）/100 g，黄酮含量为736.65 mg芦丁当量（Rutinum Equivalent,RE）/100 g，共检测出原儿茶酸、3,4-二羟基苯丙酸、咖啡酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和芦丁8种多酚物质，其中矢车菊素3-O-葡萄糖苷含量占92.6%。甘蔗糖蜜多酚（SMP）总酚含量为339.69 mg GAE/100 g，总黄酮含量为314.61 mg RE/100 g，主要单体包括没食子arsenic biogeochemical cycle酸、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、芦丁和表儿茶素9种多酚物质。在0～10 mg/mL的浓度范围内SMP、MFP及其复配物具有良好的抗氧化活性且呈现量效关系。同时，两种复配物的抗氧化活性优于SMP和MFP，其中中效原理计算复配物DPPH自由基清除能力的0.25 IC50、0.5 IC50、0.75 IC50、1 IC50、1.25 IC50、1.5 IC50的联合作用指数CI分别为0.73、0.85、0.94、0.91、0.89和0.90，均小于1，表明桑葚和甘蔗糖蜜多酚复配物具有协同抗氧化作用。

研究背景呼吸道病毒感染是引起儿童急性呼吸道感染最常见的原因。人腺病毒是引起全球5岁以下儿童急性呼吸道感染的重要病原体,其中HAdV-3和HAdV-7是最常见的基因型。与HAdV-3相比,HAdV-7感染患者的病毒血症发生率更高,且与重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征、多脏器功能衰竭的发生有关。这表tissue blot-immunoassay明病毒血症与疾病的严重程度和死亡直接相关。因此,研究HAdV-7引起病毒血症的分子机制,对限制病毒的全身性扩散和多器官功能衰竭具有重要的意义。肺泡-毛细血管屏障在抵御病原体入侵中发挥重要作用。因屏障的极性导致子代病毒释放具有方向性。病毒顶端释放倾向于引起局部感染,而基底端或双向释放更容易引起病毒血症,进而感染其他脏器。我们前期研究发现HAdV-7和HAdV-3感染肺泡上皮细胞后,新形成的子代病毒从肺泡上皮细胞的顶端释放,表明HAdV-7可能是通过其他途径穿过屏障进入血液系统,引起病毒血症。肺泡上皮细胞间连接结构维持着屏障功能的完整性。细胞间紧密连接损伤导致屏障功能破坏和通透性增加,促进传染性病原体、外源性毒素和内源性产物进入血液系统,从而引起多器官功能衰竭。因此,HAdV-7和HAdV-3感染肺泡上皮细胞破坏紧密连接的差异可能是HAdV-7感染更易引起病毒血症的原因之一。研究目的比较HAdV-7和HAdV-3感染极化肺泡上皮细胞后的感染率、复制能力、屏障功能完整性、细胞间紧密连接蛋白的差异,阐明HAdV-7感染更易引起病毒血症的机制。研究方法1、用I型鼠尾胶原(12.12μg/孔)包被transwell上室,将肺泡上皮细胞(5×104/孔)接种于上室,构建极化肺泡上皮细胞模型。培养第三天,加入地塞米松(1μM/孔),每天换液并测定TEER和下室FITC-葡聚糖荧光强度。2、用10TCID50/cell的HAdV-3、HAdV-7分别感染极化肺泡上皮细胞,通过间接免疫荧光检测第0、1、2、3天病毒Hexon蛋白的表达,使用Image-J计算第1、2、3天不同感染组肺泡上皮细胞感染率(细胞感染率=Hexon阳性细胞数/DAPI染色下细胞总数× 100%);收集第0、1、2、3天感染上清通过50%组织细胞感染量(TCID50)测定病毒滴度。3、实验分为病毒组(HAdV-3、HAdV-7)、灭活病毒组(56℃水浴30min灭活的HAdV-3、HAdV-7)和阴性对照组(1640基础培养基),10TCID50/cell的HAdV-3、HAdV-7和灭活的HAdV-3、HAdV-7selleckchem Smoothened Agonist分别感染极化肺泡上皮细胞屏障,测定每组感染后第0、1、2、3天的跨膜电阻(TEER)和FITC-葡聚糖的荧光强度,比较不同感染组屏障的完整性及通透性。4、实验分为病毒组(10TCID50/cell的HAdV-0、HAdV-7)和阴性对照组(1640基础培养基),通过间接免疫荧光检测感染后第0、1、2、3天claudin 4、occludin、JAM-A蛋白的表达,通过Image-J计算各个蛋白的平均荧光强度(平均荧光强度=该视野荧光强度总和/该视野面积),比较不同感染组紧密连接蛋白的变化情况。5、采用GraphPadNSC125066 Prism 6.01软件对数据进行统计分析,变量结果采用均数±标准差(x±SD)表示,多个组(≥3)间比较差异采用多因素方差分析,两个组间比较差异采用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。研究结果1、HAdV-7、HAdV-3感染极化肺泡上皮细胞后均可检测到病毒Hexon蛋白的表达,表明两种病毒均能感染肺泡上皮细胞;HAdV-7感染后第1、2、3天的细胞感染率高于HAdV-3感染,其中第3天的感染率(3.62±0.51)%显著高于HAdV-3(1.97±0.15)%(P<0.05);HAdV-7 感染后第 1 天(1×102.42±0.07TCID50/ml)、第2 天(1×104.00±0.25TCID50/ml)、第 3 天(1×10 4.33±0.14TCID50/ml)上清的病毒滴度显著高于 HAdV-3 感染后第 1 天(1×101.92±0.14TCID50/ml)、第 2 天(1×103.33±0.14TCID50/ml)、第 3 天(1×103.92±0.14TCID50/ml)(P<0.05)。2、灭活的HAdV-3、HAdV-7感染极化肺泡上皮细胞后TEER下降程度与下室FITC-葡聚糖的荧光强度与阴性对照组未见明显差异。HAdV-7感染后第1天TEER 下降程度为(16.10±0.52)%、第 2 天为(50.83±1.53)%、第 3 天为(72.85±0.35)%,其中第1、2、3天下降程度均显著高于阴性对照组(P<0.01);HAdV-3感染后第1天TEER下降程度为(14.18±0.53)%、第2天为(34.40±1.24)%,第3天为(60.98±0.73)%,其中第2、3天下降程度显著高于阴性对照组(P<0.01);HAdV-7感染后第2、3天TEER的下降程度显著高于HAdV-3感染(P<0.01)。HAdV-7感染后下室FITC-葡聚糖的荧光强度在第2天(1949.67±52.91)、第3天(3145.33±25.30)显著高于阴性对照组(P<0.01);HAdV-3感染后下室FITC-葡聚糖的荧光强度在第2天(1716.17±36.94)、第3天(1940.00±23.19)天显著高于阴性对照组(P<0.01);HAdV-7感染后第2、3天FITC-葡聚糖的荧光强度显著高于HAdV-3感染(P<0.01),表明HAdV-7感染能引起更严重的屏障损伤。3、HAdV-7和HAdV-3感染极化肺泡上皮细胞后第2、3天claudin 4、JAM-A、occludin蛋白的平均荧光强度与阴性对照组相比均降低(P<0.05)。HAdV-7感染后第2、3天claudin 4的平均荧光强度显著低于JAM-A、occludin(P<0.05),而HAdV-3感染后第2、3天claudin 4的平均荧光强度与JAM-A、occludin相比未见明显差异。表明HAdV-7感染肺泡上皮细胞后紧密连接蛋白中以claudin 4受损为主。研究结论HAdV-7感染极化肺泡上皮细胞后感染率及复制能力均高于HAdV-3,并且引起肺泡上皮细胞屏障更严重的损伤,HAdV-7感染极化肺泡上皮细胞后紧密连接蛋白claudin 4、JAM-A、occludin表达降低,尤其是claudin 4。claudin 4蛋白可能在HAdV-7感染引起病毒血症中起关键作用。

现代工业生产的塑料产品在极大地便利了人们日常生活的同时,也带来了严重的环境污染问题。塑料在自然环境中降解缓慢,会持久对环境产生影响。塑料垃圾在环境中经过长时间的光照、侵蚀、风化等作用下分解成小碎片或颗粒——微塑料。微塑料作为一种新兴污染物,近些年开始走进了人们的视野。水体中的微塑料极易通过食物链进入人体,对人类的生命健康造成潜在威胁。因此,水环境中微塑料的去除是刻不容缓的。目前,以光催化为代表的的高级氧化技术已被证明可有效去除有机污染物,使其成为解决微塑料污染问题的可行方法。它可以产生羟基自由基(~·OH)和超氧自由基(~·O_2~-)等强氧化性自由基将微塑料彻底矿化为H_2O和CO_2,实现对微塑料的彻底去除。但是现有的光催化技术对微塑料降解有限,催化剂带隙大,光生电子和空穴极易复合,且多在紫外光下进行降解等问题,阻碍了进一步的应用。因此,探索性能更加优异且能在可见光Cicindela dorsalis media下进行降解的高效光催化剂,是未来光催化技术的发展方向。层状双氢氧化物(Layered double hydroxides,LDHs),又称水滑石。本研究利用其热稳定性高、主板阳离子可调等优势,制备了多种复合光催化材料,并首次应用于聚苯乙烯(PS)和聚乙烯(PVP-16分子式E)微塑料的降解,主要研究内容和结论获悉更多如下:(1)制备了分别以镁铝水滑石和锌铝水滑石为载体,TiO_2为负载物质的TiO_2@MgAl-LDH和TiO_2@Zn Al-LDH负载体系光催化剂。表征结果证明TiO_2@MgAl-LDH的结晶度更高,带隙更小,拥有更好的光催化活性。在紫外光下分别对水中不同粒径的聚苯乙烯(PS)和聚乙烯(PE)进行光催化降解时,TiO_2@MgAl-LDH比TiO_2@Zn Al-LDH的降解效果更好。pH=7,催化剂投加量=1 g/L,光照时间为200 h时,TiO_2@MgAl-LDH对较小粒径的PS3和PE3微塑料的降解率可以达到78.6%和63.8%,MgAl-LDH与TiO_2产生的异质结抑制了空穴与光生电子的复合,有效提高了光催化活性,使降解率远高于空白对照组的39.6%和33.8%。且微塑料的粒径越小,降解效果越好。(2)通过调控金属阳离子种类,利用共沉淀法制备了四元镁铝基水滑石复合光催化材料CuMgAlTi-RLDH,其对可见光有较强的响应,范围也较广。在可见光下对水中的PS和PE微塑料进行光催化降解时,发现在可见光照射300 h和200 h后,PS和PE微塑料的平均粒径比初始粒径分别减少了54.2%和33.7%。引入的新金属元素铜和钛增加了激发电子的复合位点,抑制了光生电子与空穴的复合,从而提高了催化剂的光催化活性。(3)降解实验完成后,通过分析反应前后微塑料的物理化学变化特征以及降解过程中生成的中间物质,并通过自由基淬灭实验揭示了微塑料在光催化反应体系中的降解机理:FTIR、SEM、GC-MS和显微镜证实了微塑料在降解过程中,聚合物的表面最先受到催化剂产生的活性物质(~·OH和~·O_2~-)的攻击,并随着降解时间的延长,微塑料的聚合物分子链断裂,从大分子量的高聚物转化为小分子量的低聚物,并产生酮、醛、酯等含氧中间体。可挥发性中间产物的损失致使塑料表面产生褶皱、裂缝和空腔,微塑料从大颗粒物质破裂成小颗粒物质甚至被降解为溶解性有机物,直至被降解成CO_2和H_2O。

目的 探讨输卵管妊娠患者采用腹腔镜切开取胚术治疗后发生持续异位妊娠(PEP)的相关因素。方selleck NMR法 选取2015年1月-2018年3月本院实施腹腔镜切开取胚术治疗的输卵管异位妊娠患者作为研究对象，其中32例患Decitabine试剂者出现术后PEP(PEP组)、140例患者术后未出现PEP(非PEP组);统计分析两组患者的年龄、停经时间、术前血清β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、妊娠部位、孕囊直径、剥离黄体、是否发生破裂、术中是否使用甲氨喋吟(MTX)、是否出现滋养叶细胞增生等指标，并采用Logistic回归分析影响PEP发的危险因素。结果 经分析，PEP组和非PEP组患者的年龄、停经时间、妊娠部位、剥离黄体、是否发生破裂组间比较差异不具有统计学意义(P>0.05);两组的术前血清β-HCG、孕囊直径、术中是否使用MTX、是否出现滋养叶细胞增生发生率差异具有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析，术前血清β-HCG、孕囊直径较小、出现滋养叶细胞增生是发生PEP的独立性危险因素(P<0.05),术中使用MTX可降低PEP发生率，是保护性因素(P<0.05)。结论 术前血清β-HCG增高、孕囊直径较小、出现滋养叶细胞增生可能会增加腹腔镜切开取胚术后PEPpersistent infection的发生率，术中使用MTX可降低PEP发生发生分风险。

传统的Kemp消除反应可以通过氢氧点击此处化钾和三烷基胺等碱性物质,催化底物苯并异恶唑开环生成产物2-氰基苯酚.三十年来, Kemp消除反应一直被用作模式反应来设计或定向进化新型生物酶催化剂,从而揭示未知的酶催化机制的复杂性,增强对酶催化机制的理解.目前科研人员使用不同的蛋白作为骨架设计能够高效催化Kemp消除反应的人工酶.例如HilvAZD2281 MWert及Mayo等基于人工酶HG3.17,设计获得了Kemp消除酶,可以催化5-硝基苯并异恶唑生成产物2-氰基-4-硝基苯酚.通过17轮定向进化获得的最终突变体展现出与天然酶相近的催化活性(k_(cat)/K_m=230000 L mol~(-1) s~(-1); k_(cat)=700 s~prostate biopsy(-1)).该研究不仅表明蛋白质工程可以进化出高效的生物酶,量子力学/分子力学(QM/MM)分析还揭示了突变体催化活性提高的分子机制.与酸碱催化的Kemp消除反应不同,最近Korendovych等报道以肌红蛋白作为骨架基于氧化还原机制的Kemp消除反应,通过开发一种独特的基于核磁共振(NMR)的蛋白质定向进化技术,快速鉴定出热点氨基酸位点并获得了高催化活性的人工酶突变体,其同样达到了天然酶的催化活性.此前我们研究(Nat. Commun., 2017, 8, 14876)发现,与传统的酸碱催化机制完全不同,细胞色素P450-BM3能够通过氧化还原的机制催化Kemp消除反应.本文继续以P450-BM3为蛋白骨架,对其进一步改进以提高催化活性.以P450-BM3突变体F87G (k_(cat)=3.0s~(-1))为模板,借助双密码子(酪氨酸和赖氨酸, Y-K)饱和突变策略,对其活性中心的六个关键氨基酸位点进行组合突变,经过筛选获得了活性大幅度提高的三突变体F87G/L75Y/T438K (k_(cat)=27.4s~(-1)).为进一步解析其催化活性提高的分子机制,首先对该突变体与底物复合物的晶体结构进行了解析,结果发现底物在突变体活性口袋的构象与野生型P450-BM3完全不同,底物的硝基指向了Heme辅基.对其进行了QM/MM计算研究,发现Heme-Fe(II)首先将电子转移到底物并与硝基配位,随后,有效促进了底物N-O键还原裂解,并使生成的中间产物Heme-Fe(III)-NO_2和苯氧基阴离子更稳定,最后,通过键的旋转和质子转移生成产物2-氰基-4-硝基苯酚.由此可见,同一P450酶的不同突变体能够以两种不同的底物结合模式以及氧化还原机制来催化Kemp消除反应.综上,本文获得了P450酶催化Kemp消除反应构效关系和催化机制新的认识,为进一步改造该酶提高其催化活性提供借鉴.

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)是一种具有高营养价值和多种功能特性的牛乳清蛋白,但其也是牛乳中的一种主要过敏原,严重阻碍了BLG在食品工业领域的应用。因此,如何消减BLG的致敏性是目前食品安全领域研究的难点和热点。基于此,本文以BLG为研究对象,选用阿魏酸和葡萄糖先后对其进行共价修饰,制备阿魏酸联合葡萄糖共价修饰的BLG,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、圆二色谱、红外光谱、内源荧光和紫外吸收光谱等方法对其结构进行表征;采用ELISA和细胞等实验对其致敏性进行评估,进一步构建BALB/c小鼠模型探究阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG对小鼠过敏反应、肠道菌群以及血清代谢物的影响,探究阿魏酸联合葡萄糖降低BLG致敏性的分子机制,得出以下结论:(1)阿魏酸联合葡萄糖共价修饰BLG后,SDS-PAGE蛋白条带向上迁移,而游离氨基、色氨酸、巯基含量显著降低,其二级结构和构象结构发生改变;与单一的阿魏酸、葡萄糖修饰比较,阿魏酸联合葡萄糖修饰降低了BLG的Ig E结合能力、KU812细胞中His和IL-6的分泌水平以及RBL-2H3细胞的脱颗粒、IL-4和TNF-α释放水平。因此,阿魏酸联合葡萄糖会改变BLG的表位结构,显著降低其致敏性;(2)阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG对敏化后的BALB/c小鼠进行激发后,小鼠的过敏症状评分、直肠温度波动性、肝脏、胸腺指数均有所降低,血清中的特异性Ig E、Ig G、Ig G1、组胺及m MCP-1含量也显著降低,同时缓解小鼠十二指肠、脾脏的免疫损伤程度以及调节脾脏、肠系膜淋巴细胞的体外抗原再刺激能力。结果表明阿魏酸GDC-0973价格联合葡萄糖修饰的BLG能降低小鼠的过敏风险;(3)BLG能诱导BALB/c小鼠发生过敏反应,同时破坏小鼠肠道菌群的多样性和结构组成,减少肠道菌群代谢产物短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)的含量,而阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG增加了Lactobacillaceae、Rikenellaceae、Lachnospiraceae、Marinifilaceae、Bacteroidaceae等科水平菌群的相对丰度,降低了Staphylococcaceae、Corynebacteriaceae的相对丰度,在属水平上增加了Lactobacillus、Alistipes、Odoribacter、Bacteroides菌属的相对丰度;与Control组相比,BLG组血清非靶代谢中富集了Prostaglandin D2、12(S)-Hp ETE、PGJ2、12(R)-HETE、Prostaglandin F2a、15-deoxy-delta-12,14-PGJ2、Hepoxilin B3 7种花生四烯酸代谢途径的代谢物,在色氨酸代谢途径中富集了N-Acetylserotonin、4-(2-Aminophenyl)-2和4-dioxobutanoic acid代谢物,而阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG对花生四烯酸代谢途径只富集了Prostaglandin F2a,色氨酸代谢通路则富集了3-Hydroxyanthranilic medication safetyacid、Indoleacetic acid、Kynurenic Acid、4-(2-Amino-3-hydroxyphenyl)-2,4TGF-beta/Smad抑制剂-dioxobutanoic acid、L-Tryptophan、Xanthurenic Acid 8种代谢物,表明阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG对花生四烯酸代谢途径激活程度较低,显著激活了色氨酸代谢通路途径。因此,阿魏酸联合葡萄糖修饰的BLG通过改善小鼠的肠道菌群以及调节花生四烯酸、色氨酸代谢途径来缓解其过敏风险。

目的：探究穴位贴敷联合补肾活血法对复发性流产病人的有效性分析。方法：选取复发性流产CL13900作用病人90例，将其随机分为西药组(A组)、西药+中药组(B组)、西药+中医综合治疗组(C组),每组30例。A组：口服阿司匹林；B组：口服阿司匹林同时给予补肾活血中药；C组在B组的基础上应用穴位贴敷；均至孕12周。观察3组病人治疗前后临床疗效、血清人绒毛促性腺激素(hCG)、孕酮(P)、抗心磷脂抗体(ACA)、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(Anti-β2-GPⅠ)及B超情况等。结果：治疗后，3组疗效差异有统计学意pathological biomarkers义(P<0.05);C组疗效高于A、B组(P<0.05～P<0.01)。治疗后，3组病人hCG与P较同组治疗前明显升高(P<0.0Lapatinib作用1),C组明显高于A、B组(P<0.01)。治疗后，B、C组病人ACA及Anti-β2-GPI阳性率均较同组治疗前降低(P<0.05),A组与治疗前比较降低程度差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，3组ACA和Anti-β2-GPI阳性率比较，差异均有统计学意义(P>0.05),其中C组低于A组和B组(P<0.05)。治疗后，3组血小板功能均有所改善，D-二聚体(D-D)水平明显低于治疗前(P<0.01),C组D-D水平明显低于A、B组(P<0.01),B组明显低于A组(P<0.01)。结论：穴位贴敷联合补肾活血法对复发性流产病人治疗具有显著疗效，可有效改善病人激素水平及血小板功能，提高病人治愈率，值得在临床应用。

目的:本研究通过转录组测序技术(transcriptome sequencing technology,RNA-Seq)分析小鼠成釉细胞LS8转染Eda1质粒后Eda信号通路下游关键分子差异表达,探讨突变Eda1通过调节FBJ鼠科骨肉瘤病毒癌基因同源物B(FBJ osteosarcoma oncogene B,Fosb)影响牙源性上皮细胞增殖、迁移等生物学行为导致先天缺牙的致病机制。方法:1.分组:本实验分为野生型对照组、空载体空白对照组和4个突变实验组:野生型Eda1组(Eda1-Wt)、单纯突变型Eda1组(NSTA-A259E)、单纯突变型Eda1组(NSTA-S374R)、综合征突变型Eda1组(STA-H252L)、综合征突变型组Eda1(STA-A349V)和空载体对照组(p CMV-CEGFP,NC),并分别将6组质粒瞬时转染LS8细胞。2.细胞转染突变Eda1质粒,转录组表达量变化的研究:利用RNASeq筛查野生型、单纯型、综合征型Eda1在LS8细胞中瞬时转染后的基因差异表达,寻找Eda1下游差异表达显著的相关信号分子。3.利用Q-PCR(实时荧光PF-03084014临床试验定量聚合酶链反应)检测差异表达基因RNA的表达水平以及利用Western blot(蛋白质印迹法)检测差异表达基因的蛋白质表达水平。结果:1.RNA-Seq结果:1.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)比较,突变组Fos、Fosb、Jun、Junb基因差异表达具有显著性。1.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)比较,突变组的细胞增殖、细胞迁移、细胞分化等生物学过程显著下调。1.3与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,突变组TNF、MAPK、Toll样受体、破骨细胞分化、WNT、细胞凋亡等信号通路显著下调。1.4利用String数据库对上述差异基因Impending pathological fractures构建PPI网络,得到9个hub基因:Jun、Fos、Egr1、Dusp1、Fosb、Nr4A1、Btg2、Ier2、Junb。2.Q-PCR结果:2.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,综合征型突变组、单纯型突变组Fos m RNA未见显著性差异。2.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA25www.selleck.cn/products/Gefitinib9E)Jun m RNA表达下降27.4%(p<0.05),单纯型突变Eda1组(NSTAS374R)Jun m RNA表达下降50.4%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Jun m RNA表达下降39.6%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Jun m RNA表达下降53.1%(p<0.01)。2.3与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA259E)Fosb m RNA表达下降34.7%(p<0.01),单纯型突变组Eda1(NSTA-S374R)Fosb m RNA表达下降43.7%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Fosb m RNA表达下降62%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Fosb m RNA表达下降78.7%(p<0.01)。2.4与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变组和综合征型突变Eda1组Junb m RNA表达未见显著性差异。3.Western blot结果:3.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA259E)Fosb蛋白表达量下降33.8%(p<0.05),单纯型突变Eda1组(NSTA-S374R)Fosb蛋白表达量下降44%(p<0.05),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Fosb蛋白表达量下降50.2%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Fosb蛋白表达量下降39.8%(p<0.05)。3.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,综合征型、单纯型突变组Jun蛋白未见显著性差异。结论:1.Eda信号通路下游关键表达差异相关分子为Fosb、Fos、Jun、Junb。2.突变Eda调控Eda信号通路下游信号分子Fosb m RNA和蛋白的表达,从而进一步调控牙源性细胞的增殖、迁移等生物学行为。

研究目的:通过大样本图块分析建立基于深度学习(Deep Learning,DL)的人工智能(Artificial Intelligence,AI)模型,探讨其在非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)病理图像预测罕见驱动基因突变中的可行性。研究方法:收集组织学诊断为NSCLC,且PCR检测明确存在ALK、HER-2Talazoparib体内实验剂量、KRAS、RET、MET或ROS-1状态的共152患者(ALK40例,KRAS12例,HER-2、RET、MET和ROS-1各20例),以及明确不存在突变的阴性病例20例。通过数字化扫描获取全玻片数字病理图像(Whole-Slide Images,WSI),标注肿瘤细胞并在400x视野下分割为224×224大小后,然后随机分为训练组和测试组。通过训练组中带有癌细胞区域的图像区块(Papathologic outcomestch)对以卷积神经网络(Convolutional Neural Networks,CNN)架构的AI模型进行训练和微调,建立智能病理检测模型。然后对测试组病例中Patch进行验证。利用损失函数及受试者工作特征曲线评估模型在Patch级别的准确率和曲线下面积。结果:基于非小细胞肺癌肿瘤细胞特征构建的罕见驱动基因突变的智能病理预测模型在测试集中Patch水平的准确率分别为ALK(99.98%)、KRAS(98.89%)、HER-2(99.56%)、RET(99.20%)、MET(99.05%)和ROS-1(99.54%)且各队列训练集AUC值均大于0.99。研究结论:联合AI,构建基于肿瘤细胞预测ALK、HER-2、KRAS、RET、MET、ROS-1的病理预测模型,在Patch级别中具有较好的准确性和可行性,准确率均达到99%左右,其中ALK的准确率最高达Y-27632纯度到99.98%,证明该技术具有可行性,预测结果具有临床指导意义。

目的：从沉默信息调节因子1（SIRT1）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路介导自噬角度，探讨白藜芦醇对大鼠膝关节骨性关节炎（KOA）软骨细胞凋亡的影响。方法：50只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇组、白藜芦醇+SIRT1抑制剂组、自噬激活剂组，每组10只。除对照组外其余大鼠均通过注射弗氏完全佐剂造模法复制KOA大鼠模型，白藜芦醇组、白藜芦醇+AMPK抑制剂组、自噬激活剂组分别使用10 μmol/kg白藜芦醇、10 μmol/kg白藜芦醇+10mg/kg EX527、2mg/kg雷帕霉素进行干预，4周后，观察大鼠Lequesne MG膝关节级别；测定大鼠膝关节液中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）水平；HE染色与TUNEL染色观测大鼠膝关节软骨组织形态及凋亡情况；透射电子显微镜观察大鼠软骨细胞自噬情况；Western blot法检测SIRT1、p-AMPK、AMPK、LC3、beclin-1蛋白表达。结果：与对照组相比，模型组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度加重（P＜0.05）；与模型组相比，白GSK126研究购买藜芦醇组、自噬激活剂组局部反应、步态反应、关节活动、关节肿胀程度减轻（P＜0.05）。与对照组相比，模型组大鼠软骨组织细胞排列紊乱，粗糙，存在纤维化变性、边缘丘状隆起，细胞器减少，可见空泡变性，自噬小体数目增多，膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率、Beclin-1和LC3-B/LC3-AInfectious diarrhea升高（P＜0.05），软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK降低（P＜0.05）；与模型组相比，白藜芦醇组、自噬激活剂组大鼠软骨组织细胞排列紊乱、边缘丘状隆起等现象有改善，自噬小体数目增多，膝关节液IL-6、TNF-β水平、软骨细胞凋亡率降低（P＜0.05），软骨组织SIRT1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1和LC3-B/LC3-A水平升高（P＜0.05）；SIRT1抑制剂可逆转白藜芦醇组对大鼠软骨细胞的保护作用。结论：白藜芦Regorafenib醇可能是通过激活SIRT1/AMPK通路介导的自噬KOA大鼠软骨细胞凋亡，SIRT1抑制剂可逆转此过程。