akt receptor

目的 探讨表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系A549和PC9增殖。方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549、PC9,将处于对数增殖期的细胞分为对照组、新城疫病毒感染组(NDV)、重组新城疫病毒感染Long medicines组(rL-RVG)、铁死亡诱导剂组(Erastin)和重组新城疫病毒联合铁死亡诱导剂组(rL-RVG+Erastin)。病毒及药C59物感染细胞24 h后，光学显微镜下观察细胞形态，CCK-8法检测细胞增殖能力，划痕试验检测细胞迁移能力，细胞毒性检测试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量，流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量，Western blot检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、GPX4的表达。结果 与对照组相比，NDV组、rL-RVG组、Erastin组细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显降低(P均<0.001),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P<0.01),p53蛋白表达明显增加(P<0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P<0.001)。rL-RVG组与NDV组相比上述结果更明显(P<0.05),rL-RVG+Erastin组与rL-RVG组和EraLaduviglusib小鼠stin组相比细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显减少(P<0.05),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P<0.05),P53蛋白表达明显增加(P<0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论 rL-RVG可以发挥类似Erastin抑制肿瘤细胞增殖的作用，且其效果远远强于NDV。这为rL-RVG诱导的细胞死亡提供了新的见解，并强调了病毒在治疗肿瘤中的关键作用。

研究背景及目的:心肌炎是一种严重且可能危及生命的疾病,它会导致扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)、严重的心力衰竭(Heart Failure,HF)和心源性猝死,临床工作中迫切需要有效的治疗药物。心肌炎的特征是心脏内的复杂炎症反应,病毒感染作为常见病因会引发心脏特异性自身免疫反应,导致自身免疫性心肌炎(Autoimmune myocarditis,AM)。临床上约21%的急性心肌炎患者会发展为DCM,持续的心肌免疫损伤是DCM发生发展的关键要素,免疫损伤机制的阐明并阻断其进展具有重要的临床价值。AM的发病机制非常复杂,目前仍未完全阐明其发病机制,临床上没有形成统一有效的治疗方案。已有研究提示铁死亡参与调控心肌梗死、心力衰竭、心肌缺血再灌注、心肌纤维化的病理过程,铁死亡是否参与AM的发病过程,尚未见文献报道。既往研究提示泛素-蛋白酶体系统可参与调控胰腺癌、缺血再灌注、肿瘤干细胞的铁死亡过程。泛素连接酶E2E2(Ubiquitin-conjugating enzyme E2E2,UBE2E2)作为泛素-蛋白酶体系统家族的一员,是否参与调控AM的铁死亡水平,尚未见文献报道。本研究将通过构建实验性自身免疫性心肌炎(Experimental autoimmune myocarditis,EAM)体内外模型,揭示AM是否存在铁死亡现象以及UBE2E2是否参与调控AM的铁死亡水平,探究点击此处UBE2E2调控铁死亡改善AM心肌损伤的分子机制,为临床治疗AM提供潜在的靶点。材料与方法:一、UBE2E2、铁死亡在EAM体内外模型中的作用1、体内实验(1)采用猪心肌肌球蛋白构建EAM体内模型,将Balb/c小鼠随机分为模型组(n=8)、对照组(n=8)。(2)心脏苏木素-伊红染色(Hematoxylin-eosin,HE)评估心肌损害情况。(3)实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测UBE2E2在EAM模型小鼠心肌组织中的信使核糖核酸(Messenger ribonucleic acid,m RNA)的表达,检测心肌组织中铁死亡相关标记物的m RNA表达,如谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(Acyl-Co A synthetase long-chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链1(Ferritin heavy chain,FTH1)、环氧化酶2(Cyclooxygenases-2,COX2)。(4)蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测心肌组织中UBE2E2的蛋白表达,检测心肌组织中铁死亡相关标记物如GPX4、FTH1、COX2、ACSL4的蛋白表达。(5)酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中的炎性因子如肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis fact,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平以及心肌组织中亚铁离子水平。2、体外实验(1)采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)构建EAM体外模型,分为:对照组、模型组。(2)Western blot和q RT-PCR检测心肌细胞中UBE2E2、铁死亡相关蛋白及m RNA表达,如GPX4、FTH1、COX2、ACSL4。(3)ELISA检测心肌细胞内亚铁离子及心肌细胞上清中TNF-α、IL-1β的水平。二、过表达UBE2E2在EAM体内外模型中的作用1、体内实验(1)采用猪心肌肌球蛋白构建EAM小鼠模型,将Balb/c小鼠随机分为4组:对照组(n=8)、模型组(n=8)、模型+过表达空载组(n=8)、模型+UBE2E2过表达组(n=8),其中模型+过表达空载组、模型+UBE2E2过表达组通过腺病毒过表达。(2)心脏HE染色评估心脏损害情况。(3)超声心动图检测各组中小鼠左心室收缩期后壁(Posterior wall-systolic,PW-s)、左心室缩短分数(Fractional shortening,FS)、左心室舒张期后壁(Posterior wall-diastolic,PW-d)、左心室射血分数(Ejection fraction,EF)等指标评估UBE2E2过表达对小鼠心脏结构和功能的影响。(4)Western blot和q RT-PCR检测铁死亡相关蛋白及m RNA表达,如UBE2E2、GPX4、FTH1、COX2、ACSL4、HMGB1。(5)ELISA检测血清中心肌损伤标记物血清肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的水平;检测炎性因子TNF-α、IL-1β的水平;检测心力衰竭标记物脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide,BNP)的水平;检测抗心肌肌球蛋白抗体(Anti-cardiac myosin antibody,AMA)的水平;检测心肌组织中亚铁离子水平。2、体外实验(1)采用LPS构建心肌炎细胞模型,具体分组为正常对照组、模型组、模型+过表达空载组、模型+UBE2E2过表达组。(2)细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK8)检测各组心肌细胞增殖变化。(3)流式细胞实验检测各组心肌细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)变化。(4)线粒体膜电位免疫荧光法(JC-1法)检测线粒体膜电位。(5)透射电镜检测线粒体形态变化。(6)Western blot和q RT-PCR检测铁死亡相关蛋白及m RNA的表达,如UBE2E2、GPX4、FTH1、COX2、ACSL4、HMGB1。(7)ELISA检测心肌细胞内亚铁离子,心肌细胞上清中TNF-α、IL-1β的水平。三、探究UBE2E2抑制心肌细胞铁死亡的分子机制1、采用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)及蛋白质谱技术分析UBE2E2与HGMB1的相互作用关系。2、通过CO-IP实验分析HGMB1、泛素化Ubiquitin的蛋白表达水平。3、将小鼠心肌细胞HL-1分为对照组、对照组+MG-132处理组、UBE2E2过表达组、UBE2E2过表达+MG-132处理组,按上述分组转染UBE2E2过表达质粒及相应空载质粒到细胞中,之后采用5u M的MG-132处理细胞,24h后,Western blot检测各组细胞中目的蛋白HMGB1的表达情况。结果:一、UBE2E2、铁死亡在EAM体内外模型中的作用1、体内实验(1)HE染色:对照组小鼠的心肌纤维排列整齐,无明显病变现象;模型组小鼠HE染色提示:心肌组织中炎症细胞浸润增加,心肌细胞出现坏死崩解及水肿变性,部分心肌断裂,出现心肌纤维化。(2)QRT-PCR/Western blot:与正常对照组相比,模型组小鼠心肌组织中UBE2E2 m RNA和蛋白表达显著下调(p<0.05),明确UBE2E2在EAM中低表达。(3)QRT-PCR/Western blot:与正常对照组相比,模型组小鼠心肌组织中铁死亡负向调控因子GPX4、FTH1的m RNA和蛋白表达显著下调(p<0.05),而铁死亡的正向调控因子COX2、ACSL4的m RNA和蛋白表达显著上调(p<0.05)。(4)ELISA:与正常对照组相比,模型组小鼠心肌组织中的亚铁离子水平升高(p<0.05),血清中的TNF-α、IL-1β水平升高(p<0.05)。2、体外实验(1)Western blot和q RT-PCR:与正常细胞组相比,模型组心肌细胞GPX4、FTH1、UBE2E2蛋白及m RNA表达下调(p<0.05),COX2、ACSL4蛋白及m RNA表达上调(p<0.05)。(2)ELISA:与正常细胞组相比,模型组心肌细胞内亚铁离子,细胞上清中TNF-α、IL-1β的水平升高(p<0.05)。二、过表达UBE2E2在EAM体内外模型中的作用1、体内实验(1)HE染色:对照组心肌纤维排列整齐,无明显病变现象;模型组心肌纤维排列紊乱,心肌细胞损伤,胞质溶解,淡染;过表达空载组肌纤维排列紊乱,炎性细胞浸润,存在纤维化现象;与模型组相比较,UBE2E2过表达组肌纤维结构有所改善,炎性浸润现象明显好转。(2)心脏彩超:与正常对照组小鼠相比,模型组中小鼠的左心室PW-s、PW-d、EF和FS都有显著性下降(p<0.05);与模型组小鼠相比,UBE2E2过表达组小鼠的左心室EF、FS、PW-s及PW-d都有显著性上升(p<0.05)。(3)Western blot和q RT-PCR:与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠心肌组织中UBE2E2、GPX4、FTH1蛋白及m RNA低表达(p<0.05),HMGB1、COX2、ACBarasertibSL4蛋白及m RNA高表达(p<0.05);与模型组小鼠相比,模型+UBE2E2过表达组UBE2E2、GPX4、FTH1蛋白及m RNA高表达(p<0.05),HMGB1、COX2、ACSL4蛋白及m RNA低表达(p<0.05Probiotic bacteria)。(4)ELISA结果:与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠中亚铁离子、CK-MB、AST、TNF-α、IL-1β、BNP、AMA水平升高(p<0.05);与模型组小鼠相比,UBE2E2过表达组小鼠中亚铁离子、CK-MB、AST、TNF-α、IL-1β、BNP、AMA水平降低(p<0.05)。2、体外实验(1)CCK8:与正常对照组相比,模型组中心肌细胞增殖活力下降(p<0.05);与模型组相比,UBE2E2过表达组细胞增殖活力上升(p<0.05)。(2)流式检测:与正常对照组相比,模型组心肌细胞ROS水平显著上升(p<0.05);与模型组相比,UBE2E2过表达组心肌细胞中ROS水平显著下降(p<0.05)。(3)JC-1法检测线粒体膜电位:与正常对照组相比,模型组心肌细胞线粒体膜电位水平下降(p<0.05);与模型组相比,UBE2E2过表达组心肌细胞线粒体膜电位水平上升(p<0.05)。(4)透射电镜:对照组线粒体结构清晰,线粒体嵴完整,数量较多;较对照组,模型组线粒体数量减少,线粒体形态变小,嵴断裂甚至消失;过表达空载组与模型组无明显差异,线粒体减少,存在线粒体嵴断裂消失;UBE2E2过表达组线粒体数量较模型组增多,形态趋于正常,线粒体嵴清晰可见。(5)Western blot和q RT-PCR:与对照组相比,模型组心肌细胞中UBE2E2、GPX4、FTH1蛋白及m RNA低表达(p<0.05),HMGB1、COX2、ACSL4蛋白及m RNA高表达(p<0.05);与模型组心肌细胞相比,模型+UBE2E2过表达组UBE2E2、GPX4、FTH1蛋白及m RNA高表达(p<0.05),HMGB1、COX2、ACSL4蛋白及m RNA低表达(p<0.05)。(6)ELISA:与正常细胞组相比,模型组中亚铁离子、TNF-α、IL-1β的水平升高(p<0.05);与模型组相比,模型+UBE2E2过表达组中亚铁离子、TNF-α、IL-1β的水平下降(p<0.05)。三、探究UBE2E2抑制心肌细胞铁死亡的分子机制1、质谱手段筛选出UBE2E2蛋白下拉的产物,经分析后发现,UBE2E2可以靶向结合高迁移率族蛋白B1(High mobility group box1,HMGB1)。2、与对照组相比,UBE2E2过表达组Input中HGMB-1的蛋白表达量下调,泛素化Ubiquitin表达上调。Co-IP中检测结果显示,UBE2E2过表达后,HGMB1的表达量下调、泛素化Ubiquitin表达上调。3、与对照组相比,对照组+MG132处理组细胞中HMGB1蛋白表达更高(p<0.05),UBE2E2过表达组细胞中HMGB1蛋白表达更低(p<0.05);与UBE2E2过表达组相比,UBE2E2过表达+MG132处理组中HMGB1蛋白表达更高(p<0.05)。结论:1、EAM存在铁死亡现象。2、UBE2E2可以靶向结合HMGB1。3、UBE2E2过表达可以通过泛素化来降解HMGB1,调控铁死亡相关蛋白表达,抑制心肌细胞的铁死亡进程,减轻心肌免疫损伤,延缓心脏舒缩功能障碍,从而对EAM的心肌细胞产生保护作用。

目的：探究替罗非班桥接双联抗血小板聚集应用于急性脑梗死患者的效果。方法：选取20GSK J421年9月至2022年9月期间收治的90例急性脑梗死患者，根据随机数字表法分为对照组和观察组各45例。对照组接受阿司匹林肠溶片和氯吡格雷治疗，观察组先静脉泵入替罗非班治疗48 h，后过渡为阿司匹林肠溶片和氯吡格雷双联治疗，对比两组神经功能[脑特异性蛋白（S100-β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、视锥蛋白样蛋白-1(VILIP-1)]，预后[改良Rankin量表（m RS）评分、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、日常生活活动能力量表（ADL）评分]和不良事件发生情况（颅内出血、全身性出血和3个月内死亡发生情况）。结果：治疗后，观察组NIBarasertib抑制剂HSS评分、m RS评分与S100-β、NSE、VILIP-1水平均低于对照组，SDF-1水平、ADL评分均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：急性脑梗死患者经替biomedical materials罗非班桥接双联抗血小板聚集治疗，可有效改善其日常生活能力和神经功能，提高预后效果，安全性高。

目的：获悉更多观察补阳还五汤对糖尿病肾病（DKD）小鼠铁死亡的影响，探讨补阳还五汤对DKD小鼠肾脏的保护作用及机制。方法：将73只C57BL/6小鼠随机分为造模组63只和正常组10只，造模组小鼠高糖高脂饲料喂养6周后，连续5 d以50 mg·kg-1腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型，后继续高糖高脂饲料喂养8周，当小鼠出现尿蛋白阳性则DKD模型制备成功。随机将DKD小鼠分为模型组10只、罗格列酮组（7.05×10-4 g·kg-1）9只、补阳还五汤低剂量组（3.21 g·kg-1）9只、中剂量组（6.41 g·kg-1）10只、高剂量组（12.82 g·kg-1）10只灌胃，正常组与模型组予等体积生理盐水灌胃，每日1次，连续8周。给molecular immunogene药结束后检测小鼠空腹血糖（FBG）、24 h尿蛋白（24 h-UTP），计算肾重指数（KI）；苏木素-伊红（HE）染色、高碘酸希夫（PAS）染色及马松（Masson）染色观察小鼠肾组织病理学改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肾组织长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链（FTH-1）、转铁蛋白受体-1(TFR-1)蛋CX-5461白表达；测定谷胱甘肽（GSH）活性、丙二醛（MDA）及4-羟基壬烯醛（4-HNE）含量；荧光探针标记法检测小鼠肾组织活性氧簇（ROS）表达水平。结果：与正常组比较，模型组小鼠KI、FBG、24 h-UTP显著升高，肾小球内系膜增生，基底膜增厚，肾小球周围可见糖原颗粒沉积，FTH-1表达降低、TFR-1表达增加，ROS表达增加，MDA、4-HNE升高，GSH活性降低，ACSL4表达增加，SLC7A11、GPX4表达减少（P<0.01）；与模型组比较，补阳还五汤及罗格列酮组KI、24 h-UTP降低，FBG有下降趋势，但差异无统计学意义，肾组织病理学损伤可见不同程度改善，FTH-1表达升高、TFR-1表达减少，ROS表达减少，MDA、4-HNE含量降低，GSH活性升高，ACSL4表达减少，SLC7A11、GPX4表达增加（P<0.05,P<0.01）。结论：补阳还五汤可减轻DKD小鼠肾组织病理损伤，其机制与调控铁死亡有关。

“食药两用物质”是一类既可作为食物,又可作为药物的物质。随着人们生活水平的提高和健康养生观念的不断深入,这类物质已得到了广泛的使用。但长期以来,人们主要是依靠经验来利用这类物质,对其缺乏系统的安全性评价,导致一些食药两用物质在长期使用或大剂量使用后引发毒副作用的事件日益增多。如白果,一次性摄入过多会导致人体中毒甚至死亡,儿童更需慎食、少食;夏枯草,其性寒、味苦,脾胃虚弱者应慎食、少食,临床上曾报道人们因使用夏枯草而出现“过敏性休克”、皮肤瘙痒等不良反应,并且发现长期或大量使用时会导致机体的免疫功能异常;栀子,过量食用具有一定的脏器毒性,尤以肝毒性最为显著。目前,食药两用物质的安全性评估研究较为缺乏,特别是其中的内源性组分对生物主要脏器的影响还很不明了。基于此,本文选择几种常见的食药两用物质白果、夏枯草和栀子中的一些内源性组分(包括吡哆醇、迷迭香酸和京尼平genetics and genomics)为研究对象,从动物层面,系统的探究这些内源性组分对动物主要脏器(包括肝脏、肾脏和心脏)的影响,明确其毒性作用靶器官以及毒效剂量,为指导人们合理使用白果、夏枯草和栀子提供科学依据。主要研究成果及结论如下:1.选择白果中内源性组分吡哆醇为研究对象,以SPF级SD大鼠为实验动物,开展其急性经口毒性和亚慢性毒性评价。急性经口毒性实验中,给药组雌雄大鼠一次性灌胃5000 mg·kg~(-1)吡哆醇,对照组雌雄大鼠灌胃相同体积的玉米油。结果发现雌雄大鼠均无死亡现象,吡哆醇对雌雄大鼠的LD_(50)均大于5000 mg·kg~(-1);病理组织切片分析结果表明,给药组雌雄大鼠的心脏几乎没有受到影响,肾脏受到轻微的影响,肝脏肝细AZD9291化学结构胞中央静脉重度扩张、充血,肝细胞点状坏死。在28天经口毒性实验中,对大鼠分别灌胃低、中、高不同剂量的吡哆醇(3.15、15.8和31.5 mg·kg~(-1)),对照组灌胃相同体积的纯净水。结果表明,与对照组相比,中、高剂量组雌雄大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量显著升高(P<0.05或PDNA Damage/DNA Repair抑制剂<0.01),高剂量组雌性大鼠血清中总胆红素含量(T-bil)显著升高(P<0.05);病理组织切片分析发现,中、高剂量组雌雄大鼠肝脏存在一定的损伤,出现肝细胞点状坏死等;氧化应激能力分析发现,中剂量组雌雄大鼠肝脏中丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),高剂量组雌雄大鼠肝脏中诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)含量显著升高(P<0.01)。以上研究结果综合表明,15.8 mg·kg~(-1)、31.5 mg·kg~(-1)剂量的吡哆醇灌胃大鼠28天,会对大鼠的肝脏造成一定的损伤。2.选择夏枯草中内源性组分迷迭香酸为研究对象,探究其生物效应。以SPF级SD大鼠为实验动物,开展其急性经口毒性和亚慢性毒性评价。急性经口毒性实验中,给药组雌雄大鼠一次性灌胃5000 mg·kg~(-1)迷迭香酸,对照组雌雄大鼠灌胃相同体积的玉米油。结果发现雌雄大鼠均无死亡现象,迷迭香酸对雌雄大鼠的LD_(50)均大于5000 mg·kg~(-1);病理组织切片分析结果表明,给药组雌雄大鼠的心脏和肾脏受到轻微影响,给药组雄性大鼠肝细胞轻度空泡变性,小胆管周围中等量淋巴细胞浸润,给药组雌性大鼠肝血窦明显扩张、充血,部分区肝细胞脂肪变性。28天经口毒性实验中,对大鼠分别灌胃低、中、高不同剂量的迷迭香酸(3.13、169.27和338.54 mg·kg~(-1)),对照组灌胃相同体积的纯净水。结果表明,与对照组雌雄大鼠对比,中、高剂量组雌雄大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量均显著升高(P<0.05或P<0.01),中、高剂量组雄性大鼠血清中总胆红素含量(T-bil)显著升高(P<0.05);病理组织切片分析发现,中、高剂量组雌雄大鼠的肝脏肝细胞出现可见点状坏死;氧化应激能力分析发现,中、高剂量组雌雄大鼠肝脏中丙二醛(MDA)含量显著高于对照组雌雄大鼠(P<0.05或P<0.01),高剂量组雄性大鼠肝脏中诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)含量显著升高(P<0.01)。以上研究结果综合表明,169.27 mg·kg~(-1)、338.54 mg·kg~(-1)剂量的迷迭香酸灌胃大鼠28天,会对大鼠的肝脏造成一定的损伤。3.选择栀子中内源性组分京尼平为研究对象,以SPF级SD大鼠为实验动物,开展其急性经口毒性和亚慢性毒性评价。急性经口毒性实验中,采用霍恩氏法一次性经口灌胃不同剂量的京尼平,得到京尼平对雄性大鼠的LD_(50)为430 mg·kg~(-1),对雌性大鼠的LD_(50)为584 mg·kg~(-1);病理组织切片分析结果表明,各给药组雌雄大鼠的心脏和肾脏受到一定影响,100 mg·kg~(-1)剂量京尼平单次灌胃导致雄性大鼠肝细胞可见点状坏死,464 mg·kg~(-1)剂量京尼平单次灌胃造成雌性大鼠肝血窦重度扩张、充血,且其损伤程度均与剂量呈正相关。28天经口毒性实验中,对大鼠分别灌胃低、中、高不同剂量的京尼平(3.125、12.5和50 mg·kg~(-1)),对照组灌胃相同体积的纯净水。结果表明,与对照组雌雄大鼠对比,中、高剂量组雌雄大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);病理组织切片分析发现,中、高剂量组雌雄大鼠的肝脏出现肝细胞点状坏死;氧化应激能力分析发现,中、高剂量组雌雄大鼠肝脏中i NOS含量显著高于对照组雌雄大鼠(P<0.05),高剂量组雄性大鼠肝脏中MDA含量显著升高(P<0.05),中、高剂量组雄性大鼠肝脏中T-AOC含量显著升高(P<0.05)。以上研究结果综合表明,12.5mg·kg~(-1)、50 mg·kg~(-1)剂量的京尼平灌胃大鼠28天,会对大鼠的肝脏造成较严重的损伤。4.基于气相色谱-质谱联用技术,对不同剂量(3.125、12.5和50 mg·kg~(-1))京尼平暴露大鼠28天的尿液进行代谢组学研究。每周收集两次各组大鼠的尿液,尿液样品经脲酶处理后,用甲醇:乙腈=2:1(V:V)进行提取,经硅烷化试剂N,O-双甲氧基三氟乙酰胺+1%三甲基氯硅烷(BSTFA+1%TMCS)衍生后,进行测定。应用主成分分析和随机森林算法,对数据进行聚类分析并筛选显著差异代谢物。结果表明,对照组雌雄大鼠和给药组雌雄大鼠的尿液样本点可较好地分开,说明对照组和给药组大鼠的尿液代谢物存在差异,其中磷酸盐、乙醇酸、苯甲酸和甘氨酸差异显著。

光合作用同化物分配供给是果实和种子发育的主要限制因子，增加蔗糖分配转运到果实和种子是增产优质的潜在策略。SWEET(sugar will eventually be exported transporter)是近年来被鉴定较多的一类糖转运蛋白，该蛋白质通过从源叶运Immune and metabolism输营养物质调控库组织发育，参与植物生长发育以及生物和非生物胁迫反应。SWEET蛋白定位于膜结构，属于MtN3家族，通常包含7个跨膜结构域，其中ICI 46474包含2个MtN3/saliva结构域。随着染色体加倍、片段复制和串联复制等，SWEET基因在物种中得到扩张。SWEET4和SWEET39基因是作物驯化改良过程中选择的关键基因；SWEET9蛋白是蜜腺特异性糖转运蛋白，参与植物蜜腺的进化；SWEET16和SWEET17蛋白参与植物根系生长发育；SWEET11和SWEET15蛋白参与植物种子胚乳填充。本文系统综述了SWEET蛋白的结构、数量、分类、亚细胞定位、成员扩张与进化，分析了SWEET蛋白在叶、茎、根系发育，selleck合成花药发育，花蜜分泌，种子填充和果实发育等植物生长发育中的功能作用，强调了SWEET蛋白在作物改良中的应用，说明增强源库强度对作物产量提高的可持续性具有重要意义。

目的 探究姜黄素(Cur)调控过氧化物酶6(Prdx6)蛋白表达在抑制Chuman microbiome28/I2人正常软骨细胞系铁死亡中的作用及可能机制。方法 番红固绿和HE染色观察骨关节炎(OA)大鼠膝关节病理学改变。免疫组化和Western blot法分析检测Prdx6、GPX4蛋白在OGefitinib-based PROTAC 3说明书A软骨组织中的表达。用不同浓度Cur处理C28/I2软骨细胞系，噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞毒性。流式细胞术检测软骨细胞中脂质活性氧(ROS)的产生，总谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒检测软骨细胞中GSH含量。Western blot法检测软骨细胞中Prdx6和铁死亡相关蛋白的表达。分子对接技术探究Cur分子与Prdx6蛋白之间的相互作用。结果 OA发病进程中，OA大鼠和OA患者出现软骨损伤、软骨细胞数量减少等病理学改变。与正常人相比，OA患者软骨组织中Prdx6、GPX4蛋白表达降低。进一步研究显示20μmol/L Cur可以抑制铁死亡诱导剂(Erastin)诱导的C28/I2软骨细胞系铁死亡，提高细胞活力，降低细胞毒性，抑制脂质ROS的产生，提高细胞内GSH含量，并增加Prdx6、SLC7A11、FTH、 GPX4蛋白表达，降低ACSL4蛋白表达。此外，Cur分子与Prdx6蛋白分子对接过程中存在范德华力和π键相互作用。结论 姜黄素可能通过上调Prdx6蛋白表达抑制Er点击此处astin诱导的C28/I2软骨细胞系铁死亡。

盐胁迫是影响玉米生产的一种重要的非生物胁迫。玉米是盐敏感作物,与土壤改良相比,培育耐盐玉米品种是一种较为有效的方法。挖掘玉米耐盐基因并解析其作用机制,将为改良玉米耐盐性奠定基础。本实验室前期定位到一个玉米耐盐候选基因CCR(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)类似基因 GRMZM2G110881,命名为 ZmCCR-like5,并在水稻中进行了转基因功能的初步验证。本研究在此基础上利用玉米突变体和过表达转基因材料对该基因的功能进行进一步验证,并且对该基因的耐盐性调控分子机制进行初步探究。主要结果如下:1.以玉米zmzccr-like5UFMu突变体以及相对应野生型(WT)为材料进行ZmCCR-like5基因耐盐功能验证:在盐胁迫条件下,WT相对于zmccr-like5UFMu表现出较好的耐盐性,盐处理后WT的苗高、地上部生物量以及SOD(超氧化物歧化酶)、POD(过氧化物酶)含量显著高于zmccr-like5UFMu。丙二醛(MDA)含量和Na+含量显著低于zmccr-like5UFMu。结果表明ZmCCR-like5基因突变后玉米耐盐性降低。2.以转基因玉米为材料进行ZmCCR-like5基因耐盐功能验证:利用pBCXUN-ZmCCR-like5载体构建以B104为遗传背景的过表达转基因玉米材料,加代后经过表达量筛选获得3个表达量较高的T3代株系。在盐胁迫条件下,形态分析和生理指标结果显示ZmCCR-like5OE转基因株系的苗高、地上部生物量以及SOD含量显著高于野生型WT(B104)、丙二醛含量和Na+含量显著低于野生型。上述结果表明过表达ZmCCR-like5基因能够增强植株的耐盐性。3.ZmselleckchemCCR-like5组织特异性表达表明该基因在根、茎、雄穗和苞叶中表达量较高,在籽粒中的表selleck Trichostatin A达量较低。盐诱导不同天数的表达量分析表明该基因随着盐处理天数的增加,表达量呈增加-降低-增加趋势,表明该基因受盐诱导表达。亚细胞定位结果发现ZmCCR-like5蛋白定位在细胞质膜和细胞核中。4.WT和突变体叶片、茎杆中木质素含量测定表明,WT中木质素含量较zmccr-like5UFMu高,ZmCCR-like5基因的表达量与木质素含量结果一致。树脂切片吖啶黄染色分析发现木质素积累在WT中的表皮及维管束鞘部位荧光强度较强,积累的木质素较多。为了进一步研究ZmCCR-like5耐盐的分子机制,对蛋白进行了体外纯化,用于后续蛋白稳Autoimmune kidney disease定性及酶活测定。

近年来,陶瓷膜因具有机械强度高、渗透性好、热稳定性强、耐酸碱腐蚀、寿命长等独特性能,在染料截留、气体分离等领域中有着广泛的应用。氧化铝超滤膜通常采用传统醇铝法制备,该方法具有原料成本高、工艺复杂、反应时间长、生产周期长等缺点,不利于氧化铝超滤膜的低成本、快速和规模化制备。本文直接利用工业拟薄水铝石(Al OOH·x H_2O)为原料,以硝酸为胶溶剂,采用溶胶-凝胶法在室温下制备了Al OOH溶胶,通过浸渍-提拉法分别在氧化铝多孔陶瓷和氧化铝多孔陶瓷微滤膜上涂膜,在干燥、煅烧后得MS-275生产商到了微观形貌完整不开裂、孔径大小均匀的γ-Al_2O_3超滤膜。利用旋转粘度计、纳米粒度分析仪、扫描电子显微镜、全自动比表面积及孔隙度分析仪、溶质截留法对溶胶和超滤膜的性能进行了分析,主要研究结果如下:(1)当酸铝比在0.2～0.25之间、固相含量在4%～8%之间时,拟薄水铝石完全胶溶,所得溶胶粘度适中且稳定性好,有利于涂膜液的制备。当酸铝比为0.2、固相含量为8%时,溶胶平均粒径约为Berzosertib核磁74 nm。(2)详细分析了Al OOH溶胶的胶溶机理,证明了Al OOH溶胶胶粒表面存在大量羟基,硝酸中的H~+与胶粒表面的羟基结合使溶胶胶粒带正电,NO_3~-在外围使胶粒形成了双电层结构,随着过量硝酸的加入,溶胶粒子紧密结合并聚集,形成了网状三维结构。(3)当涂膜液体系中PVA含量在1.25%～1.5%之间、固相含量在2%～4%之间时,可以制得光滑、完整且不开裂的γ-Al_2O_3超滤膜层。当PVA含量在1.25%～1.5%之间变化时,膜的厚度由3μm降低到1.8μm,膜的切割分子量MWCO为14.4～41.3 k Da之间,膜的平均孔径为6.98～11.34 nm,以氧化铝多孔陶瓷为基体的超滤膜的纯水通量为9.45～10.33 L·m~(-2)·h~(-1)·bar~(-1);当固相含量在3%～4%之间时,膜的厚度随固相含量的增加而变厚,膜的切割分子量(MWCO)为43.4～53.2 k Da,膜的平均孔径随着固相含量的增加而降低,但变化不大,为11.59～12.74 nm。在此条件下,以氧化铝微滤膜为基体制备的γ-Al_2O_3超滤膜的纯水通量为18.07～28.83 L·m~(-2)·h~(-1)·bar~(-1)。(4)γ-Al_2O_3超滤膜对刚果红染料可有效截留,达到分离效果。实验结果表明,过滤120 min后膜的截留效果依然优异,且膜对刚果红溶液的过滤通量最高可达20.37 L·m~(-2)·h~(-1)·bar~(-1);循环使用4次后,膜对刚果红染料的截留率仍在95%以上,过滤通量为13.58L·m~(-Hepatitis B chronic2)·h~(-1)·bar~(-1),效果依然显著,表明该超滤膜具有良好的再生性。

探讨痛泻要方对慢性应激结肠癌肿瘤中树突状细胞（DCs）抗癌免疫的影响及其可能的分子机制。将70只SPF级BABL/C雄性小鼠，随机分成空白（CK）组，结肠癌（CRC）组，模型 (model) 组，米非司酮阳性（MIFE）组、痛泻要方低（TXYF-L）、中（TXYF-M）、高（TXYF-H）剂量组。首先除CK组及CRC组外，其余组进行慢性束缚应激干selleck化学预7 d后，通过行为学检测强迫游泳及悬尾实验观察慢性应激模型是否构建成功，若模型成功，则药物干预组分别给予MIFE及TXYF各剂量药物干预，14 d后除了CK组其余组均进行结肠癌皮下瘤接种，构建慢性应激结肠癌模型。待整个实验周期结Colforsin束后，采集小鼠血清、肿瘤组织，用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠外周血中皮质酮（CORT）、五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）的含量；用苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠肿瘤组织病理形态变化；采用流式细胞术检测小鼠瘤体组织中DC成熟相关分子及T淋巴细胞亚群（CD4~(+)、CD8~(+)）含量；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠瘤体组织中聚（ADP-核糖）糖水解酶（PARG）、聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）、核因子-κB（NF-κB）p65、磷酸化核因子κB p65（phospo NF-κB p65）蛋白表达。结果表明，较mooverwhelming post-splenectomy infectiondel组，MIFE组及TXYF各组血清中5-HT、NE上升，CORT降低；MIFE组及TXYF各组小鼠肿瘤质量降低，但差异无统计学意义；MIFE组及TXYF各组肿瘤组织中CD80、CD86、MHC Ⅱ分子及CD4~(+ )T、CD8~(+) T细胞含量升高；MIFE组及TXYF各组肿瘤组织中PARG、PARP1、NF-κB、phospho NF-κB蛋白表达量降低。综上，痛泻要方可能通过调节PARG /PARP1/NF-κB表达促进DC抗癌免疫功能发挥，阻延慢性应激下结肠癌进展。