akt receptor

目的:探讨舞动疗愈护理在青少年抑郁障碍患者康复过程中的应用。方法:选取2021年12月～2CL 318952核磁023年2月在芜湖市第四人民医院治疗的青少年抑郁障碍患者90例为研究对象，分为观察组和寻找更多常规组各45例。常规组使用精神科常规护理，观察组在常规组的基础上增加12次舞动疗愈护理，采用简易应对方式问卷、匹兹堡睡眠质量指数量表、汉密尔顿抑郁量表-24(HAMD-24)、汉密尔顿焦虑量表-14(HAMA-14),分别于基线期及干预后进行评估。比较两组治疗前后评分，评价舞动疗愈的干预效果，评估两组患者的应对方式、睡眠质量、抑郁情绪和焦虑情绪。结果:两组患者干预后积极应对评分均提升，消极应对评分均下降(P<0.05);观察组干预前后积极应对评分上升幅度优于常规组(P<0.05)。两组患者干预后抑郁和焦虑情绪评分均下降(P<0.05);观察组干预前后抑郁情绪评分下降幅度优于常规组(P<0.05)。两组患者干预后PSQI得分均下降(P<0.05);且观察组干预前后PSQI得分下降幅度优于常规组(P<Cadmium phytoremediation0.05)。结论:舞动疗愈护理应用于青少年抑郁障碍的患者，可缓解青少年患者的负性情绪，改善患者的应对方式，提高患者的睡眠质量，有助于青少年患者回归社会。

目的 探讨糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇GSK126体内实验剂量(HDL-C)检测在2型糖尿病肾病(DN)中的应用价值。方法 选取2019年1月到2022年7月安徽省第二人民医院收治的196例2型糖尿病(T2DM)患者作为研究对象，按照是否合并DN分为合并组(n=74)和未合并组(n=122)。比较两组的一般资料以及HbA1c、LDL-C、HDL-C水平，采用Logistic多因素回归分析DN的独立影响因素因素，并采用受试者工作(ROC)曲线评估HbA1c、LDL-C、HDL-C在DN中的诊断价值。结果 未合并组的吸烟率、总胆固醇、LDL-C以及HbA1c水平明显低于合并组，且HDL-C水平明显高于合并组，差异均具有统计学意义(χ~2=19.646,t=5.selleck NMR299、9.576、2.872、7.356,P<0.05)。多因素Logistic多因素回归分析结果显示，吸烟史、LDL-C、HDL-C、HbA1c水平均为DN的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，HbA1c、LDL-C、HDL-C以及联合检测预测DN的AUC为0.741、0.730、0.685、0.887，优于单一诊断(P<0.05)。结论 HbA1c、LDL-C、HDL-C对DN均具有较高的诊断价值，且3者联合检测的诊断价值较高multiplex biological networks，可以为临床诊断DN提供参考。

目的:观察加味当归补血汤(MDBT)对糖尿病肾病(DKD)大鼠单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)活性的影响，探讨其治疗DKD的可能机制。方法:52只SD雄性大鼠随机分为正常组(CON)8只和造模组44只。后Smoothened Agonist随机将40只成模大鼠分为模型组(MOD)、厄贝沙坦组(IRB)、加味当归补血汤高剂量组(MDBTH)、加味当归补血汤中剂量组(MDBTM)、加味当归补血汤低剂量组(MDBTL),8只/组。药物组灌相应药物，CON组予等体积生理盐水，1次/d,持续20周。检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 h-UTP)水平、血清锰超氧化物歧化酶(MnSOD)及丙二醛(MDA)活性；观察大鼠肾组织electrodiagnostic medicine病理变化；免疫组化法(IHC)及Western blot法检测肾组织磷酸化AMPK (p-AMPK)、PGC-1α蛋白表达。结果:与CON组比较，MOD组24 h-UTP及血清MDA水平显著升高，MnSOD活性显著降低(P<0.01);病理表现为肾小管和肾小囊严重分离，肾小球内基底膜均匀性增厚，球内糖原沉积；肾组织中p-AMPK、PGC-1α蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与MOD组比较，MDBTH与IRB组24 h-SB431542浓度UTP及血清MDA水平显著下降，MnSOD活性显著提高(P<0.01);肾组织病理表现明显改善；p-AMPK、PGC-1α在肾组织的表达显著增加(P<0.01)。结论:加味当归补血汤可能通过激活AMPK及PGC-1α的表达改善DKD大鼠氧化应激，降低肾脏病理损害程度，减少蛋白尿，从而有效保护肾脏，缓解DKD进展。

目的考察纳米金(GNPs)对声敏剂联合超声抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是否具有促进作用以及影响因素。方法本实验通过柠檬酸还原法,以柠檬酸三钠为还原剂,将氯酸金还原,制备GNPs,再将环丙沙星(CIP)负载于GNPs中,得到了一种纳米复合物CIP:GNPs。进一Food biopreservation步通过采用紫外-可见分光光度法和粒径检测分别对GNPs载药前、载药后进行表征,确定了GNPs成功制备并成功载药。并对GNPs的载药能力以及CIP:GNPs的释放能力进行了考察。其次,采用菌落计数法分别考察了超声联合CIP:GNPs、CIP、GNPs以及无超声CIP:GNPs、CIP、GNPs对Hp的抑制作用,并以抑菌率为指标进一步考察了体系中药物浓度、超声时间和超声功率三种影响因素对抑菌效果的影响,所收集的数据经统计学分析判断差异是否具有统计学意义。另外借助扫描电镜观察细胞形态学改变,考察了空白组、经超声处理组,以及对比CIP:GNPs联合超声前后对细胞物理损伤程度的影响,进一步考察GNPs对CIP联合超声的LY2157299体外抑制Hp的促进作用。结果通过制备的产物进行粒径检测表征,本文制备的GNPs的平均粒径约21.25 nm,载药后的GNPs平均粒径约为28.96 nm,并通过紫外-可见分光光度法进行表征,所得GNPs在约523nm处出现最大吸收峰,载药后的GNPs在约650 nm出现新吸收峰,进一步验证了GNPs的制备以及载药成功。本文所制备GNPs载药率最高约为9.7%,当CIP:GNPs以自然方式释购买PLX5622放,约有30.1%的CIP从CIP:GNPs中释放出来,在施加超声后,2 min后CIP释放比例约为79%。以抑菌率为指标,通过菌落计数法以及统计学分析发现,CIP:GNPs联合超声的抑菌效果优于CIP联合超声以及GNPs联合超声的效果,且抑菌率差异具有统计学意义,说明GNPs可以促进CIP联合超声对Hp的抑菌效果。并且,在一定范围内,抑菌效果随着体系中药物浓度、超声时间、超声功率增加而增加,且抑菌率差异具有统计学意义。最后通过扫描电镜进行细胞形态学进一步考察了物理损伤程度,发现未经处理的Hp空白组菌体呈弯曲杆状形态,具有完整的细胞壁;Hp经超声处理后,可以看到菌体发生轻微变形,但无明显损伤作用;Hp经CIP:GNPs处理后独处理后菌体发生变形,细胞表面出现裂痕;而CIP:GNPs联合超声组的抑菌效果在实验中对细胞破坏效果最为显著,可看到细胞膜片段化,胞质流失,细胞的完整程度遭到破坏,对细菌杀伤效果显著优于其他组,进一步证实了GNPs可以促进CIP联合超声的抑菌效果。结论在一定条件下,GNPs可以促进声敏剂CIP介导的声动力抗菌化学疗法(Sonodynamic antimicrobial chemotherapy,SACT)对Hp的抑菌效果,并且在一定范围内的体系中药物浓度、超声时间及功率对抑菌效果皆可产生影响,这一结果为抗Hp的临床治疗方式提供新思路。

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，探究马来酸依那普利片对阿霉素导致的心MC3小鼠力衰竭大鼠的治疗作用及其机制。方法 从40只雄性SD大鼠中随机选取11只作为正常组(等量0.9%NaCl),剩余29只用腹腔注射3 mg·kg~(-1)·w~(-1)阿霉素制备心力衰竭模型。造模成功后随机分为模型组15只和实验组14只。实验组灌胃给予1.8 mg·kg~(-1)·d~(-1)马来酸依那普利混悬液；正常组和模型组均灌胃给予等量0.9%NaCl。8周后，对各组大鼠行心脏彩超，记录各组左心室射血分数(LVEF),用酶联免疫吸附试验法检测血清心肌损伤指标水平，用实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白质印迹法检测MAPK信号通路相关mRNA和蛋白的表达水平。结果 正常组、模型组和实验组的LVEF值分别为(77.85±3.34)%、(41.39±2.87)%和(60.10±6.53)%,血清脑钠肽含量分别为(219.30±10.59)、(333.90±61.19)和(260.00±16.10)pg·mL~(-1),Mapk8ip2相对表达水平分别为1.00±0.01、2.60±0.12和2.00±0.08,Mapk8ip3相对表达水平分别为1.00±0.00、6.77±1.04和3.66±0.54,Mapk1相对表达水平分别为1.00±0.00、4.40±0.14和2.71±0.24,Mapk3相对表达水平分别为1.00±0.01、7.83±0.34和2.71±0.24,P38-MAPK蛋白相对表达水平分别为1.00±0.05、1.14±0.02和1.02±0.03,细胞外调节蛋白激酶1/2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.07、1.49±0selleck Adavosertib.03和1.16±0.10,c-Jun氨基reconstructive medicine末端激酶1/2蛋白相对表达水平分别为1.00±0.03、1.65±0.19和1.14±0.01;模型组的上述指标与实验组和正常组比较，在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 马来酸依那普利片对心力衰竭大鼠有治疗作用，其机制可能是通过调控MAPK信号通路来实现的。

目的 评估CYP3A4*1G多态性对行腹腔镜结肠癌根治术患者芬太尼剂量的影响。方法 选取2018年7月—2020年4月复旦大学附属中山医院行芬太尼麻醉腹腔镜结肠癌根治术的患者101例，检测其CYP3A4*1Gp53 immunohistochemistry基因型。采用多重线性回归分析探讨CYP3A4*1G多态性与芬太尼剂量之间的关系。结果 多重线性回归分析结果显示，年龄、术中芬太尼剂量和CYP3A4*1G、CYP3A5*3、OPRM1 A118G多态性是麻醉后复苏观察室(PACU)芬太尼剂量的影响因素(P<0.05)。校正年龄、性别、体重、身高、术中芬太尼用量、手术时间和OPRM1 A118G、CYP3A5*3、COMT V158M多态性后，CYP3A4*1G野生型(*1*1型)患者PACU芬太尼剂量较CYP3A4*1G突变型[*1*1G型(杂合型)和*1G*1G(纯合型)]患者增加13.99μg [β=-13.99,95%可信区间(CI)为-6.78～-1.20,P=0.035],CYP3A4*1G多态性与术后24 h镇痛泵自控静脉镇痛(PCIA)芬太尼剂量无关(β=-7.79,95%CI为-33.70～-18.11,P=0.557)，与术后48 h PCIA芬太尼剂量也无关(β=-10.28,95%CI为-22.70～2.15,P=0.108)。与CYP3A4*1G野生型(*1*1型)患者Pidnarulex说明书比较，CYP3A4*1G突变型[*1*1G型(杂合型)和*1G*1G(纯合型)]患selleckchem MC3者PACU和术后24 h PCIA芬太尼剂量显著降低(P<0.05)。结论 CYP3A4*1G多态性是PACU芬太尼剂量的独立影响因素。相对于野生型患者，突变型患者消耗较少剂量芬太尼即可获得相似的麻醉效果。

奶业是畜牧业最重要的经济产业之一,乳腺炎是奶牛生产中最常发生的疾病,奶牛乳腺炎的发生严重影响奶牛生产中的乳品质和乳产量。造成乳腺炎的原因有病原体感染、环境管理和奶牛个体原因等,通常以病原体感染为最易发病诱因,以大肠杆菌为首的多种革兰氏阴性菌是乳腺炎的致病菌,革兰氏阴性菌外壁的脂多糖(LPS)是一种细胞内毒素,会导致炎症的产生。持续长期的炎症反应会使乳腺小叶受到损伤、炎性细胞浸润、乳腺上皮细胞增生和乳腺淋巴结肿大,情况严重时会导致乳腺组织坏死和萎缩,直至泌乳功能丧失。同时,乳汁中会出现絮状沉淀和异味,并伴随着乳汁中体细胞含量增多,导致奶牛产奶量降低、乳品质变差和治疗成Communications media本提升,甚至过早淘汰母牛,造成巨大的经济损失。治疗奶牛乳腺炎的有效手段是使用抗生素,但由于近年抗生素的过度使用产生大量负面影响,使用天然无害的抗生素替代物成为了研究的热点和公众关注的焦点。天然提取物大蒜素(Allicin)是大蒜中含硫有机化合物,具有多种药理学作用,例如抗氧化、抗菌和抗癌等,也有研究证明其具有抗炎的作用。因此,本研究旨在探讨大蒜素对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症的影响及机Dorsomorphin制。本研究利用LPS对奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)进行处理,用以构建奶牛乳腺炎的体外炎症模型,通过外源性添加大蒜素的方式,来探究大蒜素对LPS引起的细胞炎症的保护作用及作用机制,此外,本研究还利用小鼠构建了体内乳腺炎模型,探究大蒜素对小鼠乳腺炎的影响。通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和苏木精&伊红染色(H&E)等方法研究大蒜素对乳腺炎症反应的影响。结果表明:1.用10μg/m L的LPS处理奶牛乳腺上皮细胞,细胞活力不会发生变化,并且10μg/m L的LPS会提高细胞中炎性细胞因子的水平,RT-q PCR检测显示肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)的m RNA表达量显著上升,说明成功构建了奶牛乳腺上皮细胞炎症模型。2.在奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中添加2.5μM大蒜素,可以显著抑制因LPS诱导而提高的炎性细胞因子水平,RT-q PCR检测结果显示,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达量以及Nod样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体活化程度都因添加大蒜素而显著降低。3.为了进一步探究大蒜素发挥抗炎作用的机制,本实验研究了大蒜素对LPS激活的TNSC125066价格LR4-NF-κB信号通路的影响。大蒜素降低了Toll样受体4(TLR4)的m RNA表达和蛋白水平,并抑制了核因子kappa B p65(NF-κB p65)、核因子kappa B抑制蛋白α(IκB-α)的磷酸化。说明大蒜素通过抑制LPS诱导的TLR4-NF-κB信号通路的激活和NLRP3炎性小体的活化,来减少炎性细胞因子的产生。4.在小鼠乳腺炎模型中,大蒜素可以缓解LPS造成的乳腺组织病理学损伤,说明大蒜素在体内具有缓解炎症的作用,同时大蒜素通过降低乳腺中髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性及炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的产生来发挥抗炎作用。综上所述,本研究发现大蒜素通过抑制TLR4-NF-κB通路和NLRP3炎性小体的活化,从而保护MAC-T细胞免受LPS诱导的炎症反应的影响,并且大蒜素对LPS诱导的小鼠乳腺炎也具有缓解作用。综合体外和体内的实验结果说明,大蒜素能够有效抵御LPS对乳腺造成的损伤,为大蒜素成为替代抗生素治疗奶牛乳腺炎的潜在药物提供理论支持。

目的:研究雷公藤方雾化对干眼患者眼部症状及体征的改善,客观评价雷公藤方的临床疗效与安全性,并观察其对干眼患者泪液中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平的影响,研究其抗炎作用,并初步探讨其发挥作用的机制,为干眼的治疗提供一种安全有效的中医治疗方法。方法:本研究是前瞻性研究,在临床流行病学、循证医学、药品临床试验管理规范原则指导下,采用随机、对照、双盲、单中心研究方法评价雷公藤方联合人工泪液治疗干眼的临床有效性与安全性,以及研究其对干眼患者泪液中炎性因子的调控作用。纳入符合纳排标准的干眼患者44例(44只眼),共完成40例。入组后将患者按随机数字表法随机分为试验组与对照组,试验组使用雷公藤方(雷公藤6g,薄荷6g,水煎selleck产品200ml)雾化熏蒸治疗3次/周,时间为20 min/次,连用4周;对照组使用安慰剂药液(按原药方20:1比例稀释制成)熏蒸治疗3次/周,时间为20 min/次,连用4周。合并用药:两组患者治疗期间均予0.1%玻璃酸钠眼液点患眼3次/日,治疗期间停用其他眼液及相关治疗。在治疗前后进行相关检查,主要观测指标包括以下内容:在眼部症状方面,根据眼表疾病指数(Ocular Surface Disease Index,OSDI)量表评分结果来体现干眼患者眼部症状严重程度以及治疗对眼部症状改善效果的;在眼部体征方面,运用泪液分泌实验(Schirmer Ⅰ Test,SIT)、泪河高度来判断biogas technology泪液分泌情况,运用泪膜破裂时间(Tear Film Break-up Time,BUT)来评估泪膜稳定性,运用眼红指数、眼红评分来展现眼部炎症反应的程度,观察角膜荧光素染色(FLS)评分以评估干眼患者的角膜上皮损害情况,通过睑板腺分级判断睑板腺的功能。在细胞分子水平层面,通过采集两组患者治疗前后的泪液,检测泪液中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平变化以观察雷公藤方雾化对干眼患者眼表炎症反应的作用。安全性指标:本研究给药方式为局部雾化,安全性指标主要观察眼部有无刺激性反应。于每次治疗后以裂隙灯检查结膜有无充血、角膜上皮有无损伤、眼睑有无红斑、皮疹等。结果:1.临床疗效对比:经过治疗,试验组的OSDI评分、SIT、FLS评分、FBUT、NIBUT、平均BUT、眼红指数、睑板腺分级、泪河高度较治疗前均有显著改善,同时,对照组的OSDI评分、FBUT、NIBUT、平均BUT、眼红指数、泪河高度较治疗前亦有一定程度的改善,但对治疗后的试验组与对照组进行上述指标的组间比较,结果示两组间差异均有统计学差异,这说明两组均对患者的OSDI评分、FBUT、NIBUT、平均BUT、眼红指数、泪河高度有改善作用,但试验组的疗效显著优于对照组。用OSDI评分改善的有效率来评价两组临床疗效,结果示试验组总有效率为90%,对照组总有效率为20%,试验组的治疗效果显著优于对照组。2.炎性因子变化对比:经过治疗,试验组患者泪液中的IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平较治疗前均显著降低,而对照组的上述炎性因子水平较治疗前无明显变化,治疗后两组之间的IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平均有显著差异,说明雷公藤方雾化能有效下调干眼患者泪液中的炎性因子水平,对眼表炎症反应起到抑制作用。3.安全性观察:参与试验的患者均未出现眼部刺激性反应,未出现过敏、皮肤红斑、角膜上皮损伤、结膜异常充血、眼压升高BMN 673作用等不良反应,安全性较高。结论:1.雷公藤方雾化联合人工泪液治疗干眼是安全、有效的,其对干眼患者的临床症状有显著的改善作用,并且能够促进干眼患者泪液的分泌,还有助于干眼患者泪膜的稳定性形成,帮助恢复睑板腺的功能,对眼表炎症反应有显著抑制作用。2.雷公藤方能显著下调干眼患者泪液中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平,其治疗干眼的作用机制可能与抑制眼表炎症反应有关。

目的 阐明栀子大黄汤（ZZDHT）通过改善肝脏中性粒细胞的氧化应激治疗酒精性肝病（ALD）的作用。方法 （1）运用网络药理学方法筛选ZZDHT的化学成分及其对应的作用靶点，分析其治疗ALD的潜在靶点和相关功能通路。（2）使用非靶代谢组学技术检测ZZDHT在小鼠血清和肝脏中代谢物变化情况，配制两倍中剂量浓度的ZZDHT予以灌胃，分别于灌胃后6个时间点（10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h）取小鼠血清和肝组织，混合进行后续质谱分析（用药组，18只）。对照组（18只）予以等量生理盐水灌胃。使用超高液相色谱技术，快速分离和鉴定ZZDHT在血清和肝组织中的代谢物，对ZZDHT有效成分进行验证。（3）8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机均分为对照组、模型组、ZZDHT低剂量[ZZDHT(L)]组、ZZDHT中剂量[ZZDHT(M)]组、ZZDHT高剂量[ZZDHT(H)]组（每组10只），除对照组外，其余各组建立ALD小鼠模型（NIAAA模型小鼠），用药组在造模的同时分别进行ZZDHT低、中、高剂量的灌胃，对照组和模型组使用等量生理盐水灌胃。检测血清ALT、AST和TG的表达水平；PCR测得肝脏相关炎性、氧化应激和中性粒细胞指标基因表达水平；ELISA法测定血清中炎症和氧化应激相关指标；SOD、GSH-Px、MDA检测肝脏氧化应激水平；通过HE染色、MPO染色以及油红染色观察小鼠肝组织损伤、中性粒细胞浸润及脂质沉积情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-PLX-4720化学结构t检验。结果 （1non-primary infection）通过筛选共得到ZZDHT的53个有效活性成分，227个Pexidartinib作用靶点基因，ALD的靶点基因共8 685个，两者共同的靶点基因222个。核心通路包括interleukin-6 signaling、TNF signaling pathway等。（2）非靶代谢分析得出ZZDHT在小鼠肝脏中代谢物有225个，在血清中代谢物有227个，共同代谢物有126个。分析得到肝脏代谢物核心通路有glycerolipid metabolism、inflammatory mediator regulation of TRP channels等，血清代谢物核心通路有AMPK signaling pathway、Oxidative phosphorylation等，均与氧化应激和炎症相关通路有关。（3）与模型组相比，ZZDHT(L)、ZZDHT(M)、ZZDHT(H)组小鼠血清ALT、AST和TG水平均明显降低（P值均<0.05）,ZZDHT(M)组小鼠肝组织Ly6g、Ncf1、Ncf2、IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA、4-HNE、Gp91、P22水平均明显降低（P值均<0.05）,SOD水平明显升高（P<0.05）,ZZDHT(M)组小鼠血清4-HNE水平明显降低、GSH-Px水平明显升高（P值均<0.05）。ZZDHT(M)组小鼠肝脏中脂肪沉积和中性粒细胞浸润均明显改善（P值均<0.05）。结论 ZZDHT可显著改善NIAAA模型小鼠的氧化应激和炎症反应。

研究目的:研究表明,肥胖和2型糖尿病患者发生认知功能减退及痴呆的风险显著增加,中枢胰岛素抵抗可能在其中发挥重Adezmapimod作用要作用。然而,现阶段对于中枢胰岛素抵抗引起认知障碍的机制尚不清楚。GLP-1受体激动剂作为一种新型降糖药,在2型糖尿病患者认知功能上的获益逐渐受到关注,然而对于其神经保护作用的具体机制仍需进一步探索。线粒体质量控制系统是维持线粒体稳态的重要环节,对于神经元功能的维持也至关重要。因此,本研究在体内及体外建立中枢胰岛素抵抗模型,并应用GLP-1受体激动剂艾塞那肽干预,观察中枢胰岛素抵抗对认知障碍、神经元功能的影响以及艾塞那肽在该过程中的保护作用及潜在机制,探讨线粒体质量控制系统的作用。研究方法:(1)中枢胰岛素抵抗小鼠模型建立及艾塞那肽干预:6周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组(Control组)、高脂组(High fat diet,HFD组)、艾塞那肽组(Exenatide,EXE组)。Control组给予低脂饲料,其余两组给予高脂饲料。每4周行口服葡萄糖耐量试验(Oral glucose tolerance test,OGTT)检查。饲养16周后,EXE组给予艾塞那肽腹部皮下注射,其余两组给予生理盐水作为对照。继续饲养4周后处死小鼠,分别检测血糖、血脂以及胰岛素水平;体外胰岛素刺激后利用Western blot检测皮质及海马胰岛素信号通路相关蛋白的表达情况。(2)小鼠空间记忆障碍及脑组织损伤评估:利用Morris水迷宫实验评估小鼠空间记忆能力;通过HE染色以及尼氏染色观察皮质及海马结构改变;通过Western blot以及脑切片免疫荧光检测皮质及海马突触可塑性相关蛋白表达以评估突触功能。(3)小鼠脑组织线粒体结构、氧化应激水平及线粒体质量控制系统检测:通过透射电镜观察小鼠皮质及海马线粒体结构;脑切片荧光探针检测ROS生成含量;试剂盒检测皮质及海马氧化指标H_2O_2、MDA以及抗氧化指标CAT、SOD水平;Western blot以及免疫组化检测皮质及海马线粒体质量控制系统相关蛋白的表达情况;脑切片免疫荧光观察线粒体自噬情况。(4)体外实验验证:建立神经元和星形胶质细胞共培养体系,模拟体内微环境;给予0.1m M的棕榈酸建立胰岛素抵抗模型并给予艾塞那肽干预,通过Western blot检测胰岛素信号通路相关蛋白表达以明确中枢胰岛素抵抗情况;免疫荧光观察神经元形态;Western blot检测神经元突触可塑性相关蛋白表达;试剂盒检测氧化应激水平;Western blot检测线粒体质量控制系统相关蛋白表达;荧光染色观察线粒体形态。(5)调控SIRT1/PGC-1α通路观察对中枢胰岛素抵抗引起线粒体稳态失衡以及神经元损伤的影响:在体内及体外建立中枢胰岛素抵抗模型,通过Western blot检测SIRT1、PGC-1α蛋白的表达;免疫共沉淀检测PGC-1α乙酰化水平;体外免疫荧光检测神经元PGC-1α核转位情况。体外神经元中过表达SIRT1,通过Western blot检测线粒体质量控制系统相关蛋白的表达情况;试剂盒检测氧化应激水平;免疫荧光检测神经元形态;Western blot检测神经元突触可塑性相关蛋白表达。(6)调控SIRT1/PGC-1α通路对艾塞那肽恢复线粒体稳态、改善神经元损伤的影响:在体内及体外建立中枢胰岛素抵抗模型并给予艾塞那肽干预,通过Western blot及免疫共沉淀检测SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达;体外免疫荧光检测PGC-1α核转位情况。体外神经元中敲低SIRT1,通过Western blot检测线粒体质量控制系统相关蛋白的表达;试剂盒检测氧化应激水平;免疫荧光检测神经元形态;Western blot检测神经元突触可塑性相关蛋白表达。研究结果:(1)HFD组小鼠呈现体型肥胖、空腹血糖升高、血脂紊乱及外周胰岛素抵抗等表型;此外,皮质及海马胰岛素通路相关蛋白表达降低提示高脂饮食可以诱导中枢胰岛素抵抗。艾塞那肽干预可以减轻小鼠肥胖程度,改善血糖、血脂及外周胰岛素抵抗情况,增加皮质及海马胰岛素通路相关蛋白表达以改善中枢胰岛素抵抗。(2)中枢胰岛素抵抗引起小鼠出现空间记忆障碍;皮质及海马组织神经细胞形态异常且数量少,神经元尼氏体含量减少;组织内突触可塑性相关蛋白表达下降提示突触功能受损。艾塞那肽干预后小鼠空间记忆障碍得到显著改善,神经细胞形态及突触功能有所恢复。(3)中枢胰岛素抵抗导致小鼠皮质及海马线粒体形态结构损伤;ROS含量增加,氧化指标H_2O_2、MDA增加,抗氧化指标CAT、SOD减少,提示氧化应激水平增加;线粒体融合相关蛋白MFN2表达降低,线粒体分裂相关蛋白DRP1(Ser616)表达增高;线粒体生物合成相关蛋白NRF1表达下降;Pink1、Parkin蛋白表达降低,P62以及LC3蛋白表达增加,免疫荧光显示线粒体与自噬体共定位系数增加,自噬体与溶酶体共定位系数减少。艾塞那肽干预后小鼠皮质及海马线粒体结构损伤及功能障碍均得到显著缓解。(4)体外共培养体系中加入0.1m M棕榈酸作用24小时后神经元发生胰岛素抵抗,表现为神经元形态异常,突触功能受损,氧化应激水平增加,线粒体质量控制系统失调,线粒体形态发生碎片化。艾塞那肽干预可减轻神经元胰岛素抵抗程度,改善神经元形态及突触功能,减轻氧化应激,改善线粒体质量控制系统以恢复线粒体稳态。(5)中枢胰岛素抵抗可抑制SIRT1/PGC-1α通路进而引起线粒体稳态失衡以及神经元损伤;体外过表达SIRT1可改善SIRT1/PGC-1α通路的抑制状态,恢复线粒体稳态,抑制氧化应激,改善神经元形态及突触功能。艾塞Infection horizon那肽干预可缓解中枢胰岛素抵抗对SIRT1/PGC-1α通路的抑制作用,从而改善神经元线粒体稳态及突触功能。研究结论:(1)中枢胰岛素抵抗可以引起学习记忆能力下降及认知功能障碍,GLP-1受体激动剂艾塞那肽可以缓解胰岛素抵抗水平及改善认知功能;(2)线粒体稳态失衡及线粒体质量控制体系受损在中枢胰岛素抵抗引起线粒体功能障碍并加速神经元损伤过程中发挥重要作用;IACS-010759抑制剂(3)中枢胰岛素抵抗通过抑制SIRT1/PGC-1α通路介导了线粒体稳态失衡,最终引起神经元损伤及突触功能障碍;(4)艾塞那肽通过SIRT1/PGC-1α通路以调控线粒体稳态改善神经元损伤。