目的:CAR-T细胞治疗对肿瘤的治疗有重要的意义,并已在血液系统肿瘤中取得较好疗效,但是CAR-T细胞治疗在实体肿瘤中进展较慢。CEA是一种敏感的胃肠肿瘤生物标志物,在结直肠癌组织和血清中广泛表达,多数正常成人CEA表达量较低。IL36y是IL-1家族的重要成员,它能激活肿瘤微环境中的抗原递呈细胞和T细胞,发挥强大的抗肿瘤CD8+T细胞反应,这为手术、放化疗效果欠佳的结直肠癌患者提供了新的思路。本研究旨在构建IL36γ.CEA-CAR-T细胞,并探讨建立IL36γ.CEA-CAR-T细胞治疗技术的可行性,旨为论证IL36γ.CEA-CAR-T在结直肠肿瘤中临床应用价值提供理论依据。方法:利用GEPIA网站在线分析TCGA数据库中结直肠肿瘤患者CEA、IL36R表达;应用TCGA数据库分析IL36γ与结直肠肿瘤患者预后的关系。通过慢病毒转染技术构建IL36γ.CEA-CAR-T细胞,分别采用qRT-PCR和流式细胞术验证IL36γ.CEA-CAR-T的转染效率。通过流式细胞学技术验证结直肠肿瘤细胞株SW480、LOVO、RKO的CEA表达。在肿瘤细胞存在的情况下,使用荧光染料Far-Red标记CAR-T细胞,流式细胞技术检测CAR-T细胞增殖能力。利用LDH释放实验、流式荧光染料标记、NOG小鼠移植瘤实验,检测IL36y.CEA-CAR-T、CEA-CAR-T和对照T细胞之间对结直肠癌细胞株SW480、LOVO的抗肿瘤效应差异。结果:TCGA公共数据库分析结果表明,与正常组织或癌旁组织相比,CEA、IL36R在结直肠癌组织中的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.01);高表达IL36γ的结直肠肿瘤与低表达IL36γ结直肠癌患者相比,生存期显著延长,差异有统计学意义(P<0.05);通过慢病毒转染技术成功构建了 IL36γ.CEA-CAR-T细胞,并通过qRT-PCR和流式细胞术验证了 T细胞表面稳定表达IL36γ.CEA-CAR;通过流式细胞术检测了结直肠癌细胞株中CEA的表达,结果表明:SW480的CEA表达量高于LOVO细胞,而RKO细胞几乎不表达CEA。增殖实验结果表明在LOVO细胞存在下,IL36γ.CEA-CAR-T细胞的增殖能力强于CEA-CAR寻找更多-T细胞。LDH体外杀伤实验证实IL36γ.CEA-CAR-T细胞的抗肿瘤效应显著高于CEA-CAR-T细胞,差异有统计学意义(P<0.001)。流式实验同样表明,IL36γ.CEA-CAR-T细胞的抗肿瘤效应显著高于CEA-CAR-T细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。体内实验证实IL36γ.CEA-CAR-T细medical mycology胞的抗肿瘤效应显著高于CEA-CAR-T细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CEA、IL36R在结直肠癌组织中的表达显RSL3著上调,高表达IL36y的结直肠肿瘤患者的生存期显著延长,IL36γ可以增强CEA-CAR-T细胞的体内外抗肿瘤效果。