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目的基于真实世界研究探讨全国名中医庞国明教授纯中医缓解2型糖尿病（Type2DiabetesMellitus，以下简称T2DM）临床特征，为临床实践提供借鉴和参考。方法采集2020年1月-2022年10月开封市中医院庞国明教授工作室就诊的符合T2DM诊断，并采用纯中医“三辨诊疗模式”“序贯三法”治疗方案且达到缓解标准的T2DM患者共计3Enteral immunonutrition0例。采集患者的人口学资料、中医证型及纯中医治疗前、治疗达标停药时、缓解时患者的体质量指数、血生化检验指标，计算纯中医治疗时长，使用稳态模型评估法评估胰岛素抵抗指数和胰岛β细胞功能指数。分析患者的临床特征、中医证型分布，比较纯中医治疗前与治疗达标停药时、缓解时各项指标的差异。结果患者平均年龄50.77±9.77岁；平均病程中位数22（10.5，39）月；平均体质量指数中位数27.75（25.87，28.80）kg/m~(2)，中医证型分布情况：痰浊中阻证频率最高，其次气阴两虚证。与治疗前比较，患者停药时FPG、1hPG、2hPG、3hPG、FGC、1hGC、2hGC、3hGC、HbA1c、FMN、HOMA-IR、BMI、TC水平明显下降，差异有统计学意义，1hCP、HOMA-βF水平较前升高，差异有统计学意义，与治疗前比较，缓解时FPG、1hPG、2hPG、1hGC、2hGC、HbA1c、BMI、3hPG、FGC、3hGC、TC、HOMA-IR水平明显下降，差异有统计学意RAD001分子式义，HOMA-β、1hCP、HDL-C水平较前升高，差异有统计学意义。结论：纯中医缓解T2DM患者以糖尿病病程＜5年，超重或肥胖为主，纯中医治疗时长多集中在3-12月，中医证型以痰浊中阻证为主。纯中医可能通过降低体重，改善胰岛素抵抗Erdafitinib浓度，改善胰岛β细胞功能，降低胰高血糖素等途径实现缓解T2DM。

目的 探讨阿加曲班对大鼠脊髓损伤的修复作用。方法 选取54只雌性Wistar大鼠,使用脊髓损伤打击器制备大鼠脊髓挫伤模型。按随机数字表法分为假手术组(仅咬除T10椎板)、脊髓损伤组和脊髓损伤＋阿加曲班组(阿加曲班组),每组18只。分别在造模前及伤后7,14,21,28,35,42 d利用BBB评分Small biopsy和斜板试验对大鼠后肢运动selleckchem功能进行评估；伤后42 d检测各组大鼠后肢感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP),运用HE染色观察损伤区域脊髓组织形态学变化并比较空洞大小。结果 伤后7 d,阿加曲班组BBB评分[(3.7±0.5)分]及斜板试验[(28.0±2.6)°]较脊髓损伤组[(3.3±0.5)分、(24.3±1.9)°]有明显改善(P0.05)。伤后42 d,阿加曲班组BBB评分[(13.0±0.8)分]及斜板试验[(50.7±2.7)°]达到峰值,且明显优于脊髓损伤组[(9.7±1.3)分、(40.5±2.7)°](P0.05)；而阿加曲班组伤后BBB评分及斜板试验均低于假手术组[(21.0±0.0)分、(60.0±0.0)°Berzosertib体外](P0.05)。伤后42 d,阿加曲班组SEP潜伏期[(25.0±0.9)ms]较脊髓损伤组[(31.5±1.9)ms]明显缩短,波幅[(2.1±0.1)μV]较脊髓损伤组[(0.5±0.1)μV]明显升高(P均0.05)；而潜伏期和波幅较假手术组[(19.5±1.0)ms、(2.8±0.1)μV]延长或降低(P均0.05)。阿加曲班组MEP潜伏期[(11.5±1.0)ms]较脊髓损伤组[(17.5±1.1)ms]明显缩短,波幅[(4.8±0.8)μV]较脊髓损伤组[(2.8±0.7)μV]明显升高(P均0.05)；而潜伏期和波幅较假手术组[(7.5±1.0)ms、(7.5±1.0)μV]延长或降低(P均0.05)。HE染色结果显示,阿加曲班组损伤中心区域空洞面积[(0.35±0.04)mm2]较脊髓损伤组[(0.71±0.05)mm2]明显减小(P0.05)。结论 阿加曲班可修复大鼠脊髓损伤组织,抑制脊髓空洞形成,促进其后肢感觉和运动功能恢复。

【目的】研究喀斯特山区生物絮团系统中池塘不同养殖比例对主养鱼松浦镜鲤肌肉营养成分、消化酶活性、抗氧化指标及血清生化指标的影响，为生物絮团的生产应用提供理论依据和数据支撑。【方法】在池塘生物絮团系统中设置3种不同养殖比例，即松浦镜鲤与鲢鱼、鳙鱼和草鱼按照80:20、75:25、70:30投放鱼苗，养殖190 d时比较不同养殖比例浦镜鲤的肌肉营养成分CX-5461试剂、消化酶活性和抗氧化酶活性。【结果】不同养殖比例间松浦镜鲤肌肉成分差异不显著（P>0.05）。前肠和后肠的消化酶活性不同养殖比例间差异不显著，均以75:25的较高；中肠的消化酶活性中，75:25的蛋白酶活性显著高于70:30，与80:20间差异不显著，其他消化酶活性无显著变化；肝脏抗氧化指标中，丙二醛含量75:25显著高于70:30（P<0.05），与80:20间差异不显著；超氧化物歧化酶活性3个处理间差异不显著，但以75:25的最高。血清生化指标除75:25血清白蛋白含量显著高于7Tofacitinib0:30和80:20外（Artemisia aucheri BiossP<0.05），其他指标间差异不显著。【结论】生物絮团系统中，松浦镜鲤与其他鱼类按照75:25投放时的蛋白酶活性、抗氧化能力、免疫能力高于其他处理。松浦镜鲤与鲢鱼、鳙鱼和草鱼按75:25的投放比例较适宜松浦镜鲤生长。

采用冠突散囊菌固态发酵罗汉果渣，对罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及粗多糖的含量变化以及与其β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶的活性的相关性进行分析，同时研究其发酵过程中抗氧化活性的变化。结果表明，发酵过程中罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及多糖的含量都呈先增加后减少的趋势，分别在第6、8、6和6天达到最大值11.36 mg/g、3.08 mg/g、10.42 mg/g、及8.34 mg/g，是未发酵组的1.42倍、2.37倍、2.53倍及1.90倍。β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性分别在第8、6、8和8天达到最大值57.91 U/g、153.06 U/g、69.42 Belnacasan浓度U/g和85.IP immunoprecipitation30 U/g，总皂苷、总黄酮和粗多糖含量的变化与纤维素酶活性和蛋白酶活性具有显著正相关性，多酚含量变化和β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性具有显著正相关性。发酵过程中，罗汉果渣的抗氧化活性呈先增加后降低的趋势，其DPPH、ABTS自由基清除能力及总还原力分别在第8、8和6天达到最大，且与未发酵组相比具有显著性差异（p<0.05）。因此，冠突散囊菌发酵罗汉果渣能有效提升其功能性成分含量，增强其抗氧化活性，对罗汉果渣selleck合成资源利用的绿色循环和可持续化具有重要意义。

采用冠突散囊菌固态发酵罗汉果渣，对罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及粗多糖的含量变化以及与其β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶的活性的相关性进行分析，同时研究其发酵过程中抗氧化活性的变化。结果表明，发酵过程中罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及多糖的含量都呈先增加后减少的趋势，分别在第6、8、6和6天达到最大值11.36 mg/g、3.08 mg/g、10.42 mg/g、及8.34 mg/g，是未发酵组的1.42倍、2.37倍、2.53倍及1.90倍。β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性分别在第8、6、8和8天达到最大值57.91 U/g、153.06 U/g、69.42 Belnacasan浓度U/g和85.IP immunoprecipitation30 U/g，总皂苷、总黄酮和粗多糖含量的变化与纤维素酶活性和蛋白酶活性具有显著正相关性，多酚含量变化和β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性具有显著正相关性。发酵过程中，罗汉果渣的抗氧化活性呈先增加后降低的趋势，其DPPH、ABTS自由基清除能力及总还原力分别在第8、8和6天达到最大，且与未发酵组相比具有显著性差异（p<0.05）。因此，冠突散囊菌发酵罗汉果渣能有效提升其功能性成分含量，增强其抗氧化活性，对罗汉果渣selleck合成资源利用的绿色循环和可持续化具有重要意义。

目的 探讨组织蛋白酶G(CatG)提高T细胞治疗胶质瘤效果的机制。方法 (1)收集胶质瘤数据库中397例胶质瘤患者的临床资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Pearson相关性分析胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2微球蛋白(β2M) mRNA表达的相关性。(2)从胶质母细胞瘤中分离培养胶质瘤干细胞(GSC)387和GSC3565,分别分化培养获得胶质瘤分化细胞(DGC)387和DGC3565。取GSC387细胞,immune training分为CatG组、CatG抑制物组,分别用0.1 μg/μL重组人类白细胞抗原(HLA)-A*02∶01和HLA-B*15∶01与4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物共培养10 min,应用托马斯亮蓝染色检测细胞HLA-A*02:01和HLA-B*15:01的表达,应用Western blotting检测细胞主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-DR蛋白的表达。(3)取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为4组(CatG组、CatG抑制组、空白抗体1组,空白抗体2组),分别加入4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物、空白抗体1、空白抗体2处理24 h,采用流式细胞仪检测细胞HLA-ABC的表达。(4)取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为CatG组和CatG抑制组,采用荧光素酶实验检测CatG对T、自然杀伤细胞杀伤作用的影响。结果 (1)RepSoxCTSG mRNA高表达组患者的生存率高于CTSG mRNA低表达组,β2M mRNA低表达组患者的生存率高于β2M mRNA高表达组,差异均有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2M mRNA的表达呈负相关关系(r=-9.160,P=0.000)。(2)托马斯亮蓝染色检测显示：与CatG抑制物组比较,CatG组细胞HLA-A*02∶01和HLA-B*15∶01的表达增加。Western blotting检测显示：与CatG抑制物组比较,CatG组细胞MHC-Ⅰ的表达增加,MHC-DR的α和β链降低。(3)流式细胞仪检测显示：CatG组GSC387、GSC3565细胞HLA-ABC的表达高于CatG抑制物组,差异有统计学意义(P0.05)。(4)荧光素酶实验显示：与CatG抑制物组比较,CatG组T细胞对GSC细胞的杀伤比例增加,差异有Dolutegravir价格统计学意义(P0.05)。结论 CatG可提高免疫治疗GSC的效果,其机制为提高细胞表面的MHC-Ⅰ的表达。

目的 探讨组织蛋白酶G(CatG)提高T细胞治疗胶质瘤效果的机制。方法 (1)收集胶质瘤数据库中397例胶质瘤患者的临床资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Pearson相关性分析胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2微球蛋白(β2M) mRNA表达的相关性。(2)从胶质母细胞瘤中分离培养胶质瘤干细胞(GSC)387和GSC3565,分别分化培养获得胶质瘤分化细胞(DGC)387和DGC3565。取GSC387细胞,immune training分为CatG组、CatG抑制物组,分别用0.1 μg/μL重组人类白细胞抗原(HLA)-A*02∶01和HLA-B*15∶01与4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物共培养10 min,应用托马斯亮蓝染色检测细胞HLA-A*02:01和HLA-B*15:01的表达,应用Western blotting检测细胞主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-DR蛋白的表达。(3)取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为4组(CatG组、CatG抑制组、空白抗体1组,空白抗体2组),分别加入4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物、空白抗体1、空白抗体2处理24 h,采用流式细胞仪检测细胞HLA-ABC的表达。(4)取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞,分别分为CatG组和CatG抑制组,采用荧光素酶实验检测CatG对T、自然杀伤细胞杀伤作用的影响。结果 (1)RepSoxCTSG mRNA高表达组患者的生存率高于CTSG mRNA低表达组,β2M mRNA低表达组患者的生存率高于β2M mRNA高表达组,差异均有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2M mRNA的表达呈负相关关系(r=-9.160,P=0.000)。(2)托马斯亮蓝染色检测显示：与CatG抑制物组比较,CatG组细胞HLA-A*02∶01和HLA-B*15∶01的表达增加。Western blotting检测显示：与CatG抑制物组比较,CatG组细胞MHC-Ⅰ的表达增加,MHC-DR的α和β链降低。(3)流式细胞仪检测显示：CatG组GSC387、GSC3565细胞HLA-ABC的表达高于CatG抑制物组,差异有统计学意义(P0.05)。(4)荧光素酶实验显示：与CatG抑制物组比较,CatG组T细胞对GSC细胞的杀伤比例增加,差异有Dolutegravir价格统计学意义(P0.05)。结论 CatG可提高免疫治疗GSC的效果,其机制为提高细胞表面的MHC-Ⅰ的表达。

研究背景腹主动脉瘤(Abdominalaorticaneurysm,AAA)是临床中最常见的动脉瘤类型,是一种复杂而致命的血管疾病。AAA主要发生在肾动脉分叉与髂动脉分叉之间,是一种永久性、不可逆性局部扩张的血管疾病。AAA表现特征是腹主动脉异常扩张至其正常段直径的50%以上,或者扩张超过30 mm。目前多项研究表明,与AAA有关的危险因素包括年龄、性别、吸烟、遗传因素、冠心病、高血压和胆固醇水平等。随着动脉瘤直径的不断增大,破裂出血的风险大大增加,但由于患者在主动脉破裂前无症状且破裂后的风险极高,因此阻断AAA的发生及其进展极为重要。目前,AAA缺乏特异性治疗药物,开放性手术是广泛可用的治疗方法,仍然需要广泛的研究来开发安全的疗法,例如能延缓动脉瘤扩张和破裂的新药。AAA发病过程中包含多种病理表现,如细胞外基质(ECM)降解、免疫细胞浸润、炎症反应、氧化应激、血管平滑肌细胞(VSMC)的凋亡、VSMC表型转换等。细胞外基质成分主要由胶原蛋白、蛋白多糖、弹性蛋白和糖蛋白等大分子物质组成,这些分子通过相互连接和交织形成了复杂的网架结构,维持动脉壁张力并保持一定的弹性。其中MMP2(基质金属蛋白酶2)和MMP9在动脉瘤壁中过表达,在动脉瘤病变中具有高度降解胶原的能力,因此,MMP2和MMP9可能在动脉瘤变性过程中起协同作用。VSMC在血管中的位置使其成为启动内侧变性的理想细胞类型,其从中膜到内膜的迁移涉及高度调节的弹性蛋白降解过程。而肥大细胞则是最近在人类AAA病变中发现的另一种炎症细胞类型,除了促炎细胞因子外,许多由肥大细胞产生的物质或酶被认为更多与AAA的发展有关。另外有研究结果表明,AAA组织中平滑肌细胞的超氧化物水平升高,大量的活性氧(ROS)在细胞内沉积可以激活MMPs,促进ECM降解。现有研究表明,抑制MMPs活性可以抑制AAA的发展,因此MMPs可能是治疗AAA的有效药物靶标。补体C1q/瘤坏死因子相关蛋白9(C1q/TNF-related protein 9,CTRP9)由信号肽,N端的可变区域,56个G-X-Y重复序列的胶原结构和与免疫补体C1q同源的C端球状结构组成。有研究表明,冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者中CTRP9的水平显著降低。随着对CTRP9研究的不断深入,发现C点击此处TRP9还参与到多种疾病的多种病理生理过程,如抗炎、抗氧化应激、抑制血管损伤后小鼠VSMC增殖和内膜形成、调节糖脂代谢和改善内皮细胞功能等。然而,CTRP9在AAA中的作用及其相关机制尚无报道及研究。所以,探究CTRP9在AAA中的作用及相关分子机制,寻找针对AAA的有效新靶点,对于AAA的预防、诊断和治疗具有重要意义。研究目的1.探究CTRP9是否与腹主动脉瘤的形成有关;2.探究CTRP9作用于腹主动脉瘤的病理生理机制;3.探究CTRP9对腹主动脉血管壁中平滑肌细胞的作用及相关机制。研究方法1.构建敲基因小鼠利用CRISPR/Cas9技术在C57BL/6背景的小鼠中获取CTRP9基因敲除小鼠,鉴定基因型后将纯合子与纯合子配对繁殖。2.建立腹主动脉瘤动物模型腹膜内注射1%戊巴比妥麻醉后,沿着腹白线做一个约2厘米的切口。将腹主动脉与周围组织剥离,随后将0.5 mol/LCaCl2浸润的棉签覆盖在腹主动脉上,20分钟后取出棉签,用PBS磷酸盐缓冲液浸润的棉签覆盖于同一位置。10分钟后取出,用1 mL注射器吸取0.9%无菌生理盐水反复冲洗腹腔2～3次,随后用外科线将小鼠腹部肌肉及皮肤依次缝合,关闭切口。对照组则用0.9%无菌生理盐水覆盖于腹主动脉,其余操作与上述操作一致。第一部分:随机选取8～10周龄体重为20～25g的雄性WT小鼠,将其分为对照组和AAA 组。第二部分:随机选取8～10周龄体重为20～25g的雄性WT小鼠和CTRP9-/-小鼠,在WT和CTRP9-/-小鼠中分别构建对照组和AAA组。超声成像及测量主动脉最大直径:实验结束后对第二部分的4组小鼠进行血管超声,获取小鼠腹主动脉血管的B-mode图像。随后取材获取小鼠主动脉及各种组织,并测量小鼠腹主动脉最大直径。3.HE染色、Masson染色和VVG染色染色后观察各组小鼠腹主动脉壁的形态学变化。4.免疫组织化学染色检测各组小鼠腹主动脉组织中的CTRP9、F4/80、α-SMA、Mast cell tryptase、MMP2、MMP9和Collagen Ⅰ的相对含量。5.细胞培养将细胞置于DMEM高糖培养基+10%的胎牛血清+100 U/mL青霉素-链霉素培养基中,在37℃和5%CO2的恒温恒湿培养箱中培养。6.建立细胞模型(1)在 VSMC 中按照浓度梯度(0,100nmol/L,500nmol/L,1 μmol/L,2μmol/L)依次加入炎性刺激Ang Ⅱ刺激24小时;(2)在VSMC细胞中转染siCTRP9后,在相应的孔中加入1 μmol/L的Ang Ⅱ处理24 小时,因此将细胞分为 4 组:siNC,siCTRP9,Ang Ⅱ+siNC,Ang Ⅱ+siCTRP9。在VSMC细胞中转染siCTRP9后,在对应的孔中加入AMPK激动剂AICAR预处理1小时,随后加入1 μmol/L Ang Ⅱ处理24小时。7.DCFH-DA 检测 VSMC 中的 ROS在每个孔内加入250 μL按照1:500比例稀释的DCFH-DA溶液,孵育30分钟后用PBS润洗3次,在手动倒置荧光显微镜下观察ROS。8.明胶酶谱实验检测腹主动脉和VSMC中的MMP2和MMP9的活性。9.Western blot检测腹主动脉和 VSMC 中的 CTRP9、MMP2、MMP9、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、p-AMPK/total AMPK 和 SIRT1 的表达水平。10.统计分析实验所得数据均使用GraphPad Prism 8.0进行统计分析。统计结果均以均数±标准误(mean±SEM)的形式表示。P<0.05时,认为差异具有统计学意义。研究结果1.在小鼠AAA模型中CTRP9的表达明显下降免疫组织化学染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,野生型AAA组腹主动脉中CTRP9的表达显著降低。通过免疫荧光双染色检测可知,与对照组相比,野生型AAA组腹主动脉的平滑肌细胞中CTRP9的含量减少。2.CTRP9敲除加重小鼠AAA的发展CTRP9-/-均为纯合子,验证小鼠体内CTRP9已敲除。通过测量腹主动脉直径及血管超声图像可知,与WT AAA组相比,CTRP9-/-AAA组腹主动脉扩张更明显。3.CTRP9敲除加剧主动脉壁的病理变化HE染色、Masson染色和VVG染色观察各组腹主动脉管壁的形态学变化。结果显示,两组对照组腹主动脉的形态无明显差异,WTAAA组腹主动脉明显扩张,中膜破裂,细胞外基质降解明显,弹性纤维丧失其完整性。与WT AAA组相比,CTRP9-/-AAA组腹主动脉扩张更明显,中膜破裂更严重,细胞外基质降解更加明显,明显破坏了弹性纤维的完整性。4.CTRP9敲除促进巨噬细胞、肥大细胞的浸润,降低VSMC的含量通过免疫组织化学染色可知,与WTAAA组相比,CTRP9-/AAA组腹主动脉F4/80和肥大细胞类胰蛋白酶的相对含量明显增加,而α-SMA的相对含量明显降低。5.CTRP9敲除促进细胞外基质的降解通过免疫组织化学染色可知,与WT AAA组相比,CTRP9-/-AAA组腹主动脉MMP2和MMP9的相对含量明显增加,Collagen Ⅰ的相对含量明显下降。提取小鼠腹主动脉组织蛋白,通过Western blot可知,与WT AAA组相比,CTRP9-/-AAA组促进腹主动脉MMP2和MMP9的蛋白表达水平,降低Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的蛋白表达水平。6.在Ang Ⅱ刺激下VSMC中CTRP9的表达降低CTRP9的蛋白表达水平随着Ang Ⅱ浓度的增加而逐渐降低,其中在1 μmol/L AngⅡ浓度下CTRP9的降低最为显著。7.干扰CTRP9促进VSMC中MMP的表达和活性,降低胶原蛋白的表达干扰CTRP9促进VSMC中MMP2和MMP9的表达,增强MMP2和MMP9活性,降低 Collagen Ⅰ 和 Collagen Ⅲ 的表达。siCTRP9 干扰 VSMC 中的 CTRP9,与 Ang Ⅱ相比,Ang Ⅱ+siCTRP9促进ROS的生成,促进MMP2和MMP9的表达,增强MMP2和MMP9的活性,降低Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达。8.CTRP9通过AMPK/SIRT1信号通路调节MMP的表达在体内,与对照组相比,WT AAA组中磷酸化AMPK和SIRT1蛋白表达水平明显下降,而CTRP9-/-AAA组Genetic reassortment磷酸化AMPK和SIRT1进一步下降。在体外,与AngⅡ相比,Ang Ⅱ+siCTRP9使磷酸化AMPK和SIRT1下降更为显著。加入AICAR后Western blot结果表明,CTRP9通过AMPK/SIRT1信号通路调节MMP2和MMP9的表达。研究结论(1)在野生型小鼠AAA以及炎性刺激下的VSMC中,CTRP9的表达有所下降。(2)体内敲除CTRP9可通过促进炎症反应、平滑肌细胞减少,MMP激活和细胞外基质降解,破坏血管壁平滑肌的收缩特性和完整性来促进AAA的形成。(3)体外干扰CTRP9可促进VSMC中MMP的激活,降低胶原蛋白的生成;(4)CTRP9通过AMPK/SIRT1信号通路调控VSMC中MMP的激活。

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用。以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象，使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD，然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg~(-1))、二甲双胍AY-22989体外(0.067 g·kg~(-1))对小鼠进行8周的治疗。取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析；肝脏组织行HE、Masson染色，肠组织进行HE、AB-PAS染色；利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化；采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(Medial longitudinal archmRNA)的表达水平。结果显示，左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量，降低肝脏指数(P<0.01)，下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG(P<0.01)，增加胰岛Dorsomorphin素敏感性(P<0.01)，并改善葡萄糖耐受(P<0.01)的情况。16S rRNA测序结果表明，左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度，增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lactobacillus、Akkermansia、Bacteroidota的相对丰度，降低了Lachnospiraceae、Firmicutes、Desulfobacterota、Proteobacteria、Desulfovibrionaceae的相对丰度。肠黏膜病理分析显示左归降糖清肝方可增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1 的表达水平(P<0.01)，并促进肠道黏膜的修复，保护肠道绒毛，增加肠黏膜绒毛的高度及杯状细胞的数量(P<0.01)。左归降糖清肝方可通过调节肠道微生物群稳态、促进肠道黏膜屏障的修复改善T2DM合并NAFLD诱导的肠黏膜损伤。

目的探讨巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(card9)在胰腺腺泡细胞Placental histopathological lesions导管组织Colforsin细胞培养转化中的作用。方法构建3条靶向card9的小分子干扰RNA(siRNA-card9), 荧光显微镜下观察转染巨噬细胞的荧光强度, 采用实时定量PCR法检测巨噬细胞card9 mRNA表达量, 筛选巨噬细胞的最佳转染效率。将5×105巨噬细胞和100 μg/ml β葡聚糖体外常规培养12、24 h后, 分成阳性细胞组(巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阴性细胞组, 采用蛋白质免疫印迹法检测各组巨噬细胞card9蛋白表达水平。取1×105巨噬细胞、1×105胰腺腺泡细胞加入Transwell小室上下层共培养120 h后, 分为阳性细胞组(巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组, 取下室的胰腺腺泡细胞, 采用免疫荧光化学染色法检测腺泡细胞导管组织转化标志物CK19蛋白表达。结果 siRNA-card9转染Metabolism抑制剂巨噬细胞24 h荧光强度最强, 浓度为200 nmol/L时抑制效率最高。阳性细胞组、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组、β葡聚糖刺激阴性细胞组培养24 h后, 巨噬细胞card9蛋白表达量分别为0.81±0.05、1.46±0.05、0.42±0.06、0.46±0.06, β葡聚糖刺激阳性细胞组较阳性细胞组显著升高, 差异具有统计学意义(P0.05)。100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光较阳性细胞组明显增强, 且呈β葡聚糖剂量依赖性;而阴性细胞组、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光强度均较阳性细胞组显著降低。结论巨噬细胞card9表达水平升高可诱导腺泡细胞导管组织转化, 提示可能存在card9介导的胰腺癌发病机制。