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目的:探讨过表达水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭能力的影响，分析其对Wnt通路的调控作用。方法:构建和包装pBabe-puro-AQP1逆转录病毒载体，建立稳定过表达AQP1基因的MCF-7细胞。细selleck MLN4924胞免疫oncology prognosis荧光染色法检测外源性AQP1在MCF-7细胞内的定位，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测AQP1 mRNA及蛋白表达变化；采用CCK-8法检测细胞的增殖活性；流式细胞法检测细胞周期；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell法检测细胞的侵袭能力；基因表达谱芯片、Western blot检测转染后Wnt细胞通路相关基因表达改变。结果:稳定过表达AQP1后MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加，差异有统计学意义(P<0.001)。基因表达谱芯片结果显示，过表达AQP1后22个差异表达基因富集于Wnt细胞信号通路，mRNAs表达明显增强(P<0.000 1),Wnt细胞通路关键基因β-catenin及下游靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-Myc蛋白表达也显著增加。结论:AQP1可能通过激获悉更多活Wnt信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。

目的 探讨内源性多肽ECDP2在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜CFTR抑制剂癌细胞迁移侵袭的关系。方法 采用液相质谱检测3对正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中差异表达的多肽组分，分析ECDP2在子宫内膜癌组织中的表达水平。按照氨基酸序列合成ECDP2后，体外实验将子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞分为NC组(无血清培养基处理作阴性对照)和ECDP2不同浓度处理(1、10、100 ng/L)组，采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测ECDP2对子宫内膜癌细胞迁移侵袭能力的影响，We购买Tamoxifenstern blotting检测ECDP2对AKT信号通路、八聚体结合转录因子4(OCT4)蛋白和上皮间质转化(EMT)相关因子水平的影响。结果 子宫内膜癌组织的ECDP2水平低于正常组织(P<0.05)。体外实验结果表明，与NC组相比，ECDP2处理子宫内膜癌细胞后，细胞的迁移能力和侵袭能力明显减弱，且呈浓度梯度依赖性(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，与NC组相比，ELaser-assisted bioprintingCDP2能显著下调子宫内膜癌细胞中AKT(ser473)磷酸化水平以及OCT4、EMT相关蛋白表达水平(P<0.05)。进一步使用AKT激动剂SC79预处理后能部分恢复ECDP2对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭、EMT和干性维持的抑制作用。结论 内源性多肽ECDP2在子宫内膜癌组织中异常低表达，可能在新的稳态系统中通过调控AKT的磷酸化来抑制子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭、EMT和干细胞样特性。

目的 探究直Others抑制剂肠癌根治术后结肠造口感染与患者肠道微环境及外周血分化抗原36(CD36)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路蛋白表达的关系。方法 选取2016年6月—2021年6月武汉理工大学医院收治的284例直肠癌根治术后结肠造口患者为研究对象,根据术后是否并发造口感染分为感染组(n=82)、对照组(n=202),采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者肠道菌群及CD36/mTORC1 mRNA表达。采用多因素Logistic回归分析直肠癌根治术后造口感染的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线探究CD36/mTORC1 mRNA表达对术后造Colforsin细胞培养口感染预测价值。结果 感染组大肠埃希菌、肠球菌数量高于对照组(P<0.05),双歧杆菌、乳酸杆菌数量低于对照组(P<0.05);两组菌群失调分度差异有统计学意义(P<0.05),且感染组Ⅲ度失调比例高于对照组(P<0.05);感染组CD36 mRNA、mTORC1 mRNA水平均高于对照组(P<0.05);菌群失调Ⅲ度、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA是直肠癌根治术后结肠造口感染的影响因素(P<0.05);CD36 mRNA、mTORC1 mRNA预测术后造口感染的ROCMedian sternotomy曲线下面积分别为0.887、0.958。结论 直肠癌根治术后结肠造口患者存在肠道菌群失衡,且可能通过激活外周血CD36/mTORC1信号通路增加患者造口感染风险。

推拉型环丙烷,即同时含有推电子基和拉电子基的环丙烷,具有较低的开环反应能垒,成为应用广泛的三碳合成子。目前用于开环反应研究的推拉型环丙烷多数含有两个偕位受体,而含两个连位受体的推拉型环丙烷的开环反应研究较少。本轮文研究了含连二受体环丙烷的开环反应,基于推电子基团的电性特点,这类推拉型环丙烷表现出两种不同开环方式,分别生成五元环或六元环内酯衍生物。具体包括以下两部分:1.TfOH促进的3-/5-亚烷基丁烯酸内酯的合成研究通过顺式连二受体环丙烷的开环反应,实现了3-和5-亚烷基丁烯酸内酯的便捷合成。在TfOH的作用下,顺式连二受体环丙烷的两个受体协同活化作用产生了高活性的五并三双环氧鎓离子中间体,该反应经历开环、芳基迁移、去质子化等串联反应生成3-和CP-456773生产商5-亚烷MLN8237分子式基丁烯内酯。另一方面,相应的反式环丙烷异构体很难形成这样的中间体,相同条件下不能发生类似反应。2.TfOH促进的推拉型环丙烷扩环法合成多取代2-吡喃酮实现了一种TfOH促进的2-酰基推拉型环丙烷合成多取代2-吡喃酮的简便方法。在该反应中,强给电子芳基稳定环丙烷开环medicine management形成的1,3-偶极中间体,引导推拉型环丙烷的C-C键选择性断裂,经内酯化反应形成2-吡喃酮化合物。

背景结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界第三大恶性肿瘤,目前主要治疗方式为手术结合放化疗,随着药物耐受和复发率的升高,结直肠癌患者的生存期没有明显的改善,因此,寻找新的有效的治疗靶点和方案对于改善患者预后具有重要意义。长链非编码RNAs是一类长度超过200个核苷酸且不能翻译为蛋白质的非编码RNA,主要通过表观遗传调控、转录调控及转录后调控参与多种恶性肿瘤的发生发展。本课题前期研究发现,长链非编码RNA LWTA参与了结直肠癌细胞的增殖和迁移,但作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨长链非编码RNA LWTA在结直肠癌中的作用机制,为寻找结直肠癌治疗新的潜在靶点提供理论依据。目的筛选与结直肠癌演进相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA);明确lncRNA LWTA调控结直肠癌发生发展的分子机制,为临床靶向治疗结直肠癌,改善患者预后提供新Fulvestrant细胞培养的思路。方法1.收集临床结直肠癌和癌旁正常组织,测序分析寻找在结直肠癌中异常表达的lncRNA。2.利用si RNA对筛选出的差异大的3个lncRNA检测对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响。3.利用荧光原位杂交(FISH)方法检测筛选出lncRNA在细胞内的定位。4.RNA pull-down和质谱分析明确lncRNA翻译能力和结合蛋白。5.免疫hepatitis-B virus组化检测lncRNA编码多肽在结直肠癌中的表达及与患者预后之间的关系。6.CCK8和平板克隆实验检测编码多肽对细胞增殖的影响。7.Transwell迁移实验检测编码多肽对细胞迁移的影响。8.编码多肽细胞内结合蛋白的预测和免疫共沉淀(Co-IP)对预测进行验证。结果1.筛选出485个差异lncRNAs,其中255个lncRNAs在结直肠癌组织中表达下调,230个lncRNAs表达上调。2.将3个差异大的lncRNA进行si RNA干扰后,只有lncRNA NONHSAT184602.1能同时引起结直肠癌细胞增殖和迁移相关基因的变化。3.体外细胞培养和结直肠癌组织中NONHSAT184602.1主要分布在细胞浆。4.NONHSAT184602.1含有7个开放阅读框(ORF1-7),其中ORF3表达最强,并且可以编码多肽,我们将NONHSAT184602.1命名为具有翻译能力的长链非编码RNA(lncRNA with translation abilit,LWTA)。5.ORF3编码多肽在结直肠癌组织中显著高表达且与病人的不良预后相关。6.CCK8增殖实验和平板克隆实验显示,高表达ORF3可以明显增加细胞的增殖速率。7.Transwell迁移实验显示,高表达ORF3可以明显的增加结直肠癌细胞的迁移能力。8.数据库分析和Co-IP验证结果显示,ORF3编码多肽可以与RAB11A和14-3-3γ蛋白形成复合体,我们将ORF3编码多肽命名为RAB11A与14-3-3γ支架蛋白(scaffolding proteins of RAB11A and 14-3-3γ,SPRY)。结论lncRNA NONHSAT184602.1(LWTA)在结直肠癌组织中高表达,促进细胞的增殖与迁移,LWselleckchem Imidazole ketone erastinTA主要通过编码多肽SPRY,结合RAB11A与14-3-3γ蛋白发挥其调控结直肠癌细胞生物学功能的作用。

目的 探讨微小RNA-584-5p(miR-584-5p)对乳腺癌细胞生物学行为（增殖、迁移和侵袭）的影响及其作用机制。方法 选择人正常乳腺上皮细胞MCF10A及乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3和MCF-7；取对数生长期的MCF-7细胞，应用Lipofectamine TM 2000转染试剂盒对其进行转染，并分为7组：空白组（未转染的MCF-7细胞）、模拟物-阴性对照组（mimic-negative control,mimic-NC,mimic-NC组；转染mimic-NC）、miR-584-5p mimic组（转染miR-584-5p mimic）、pcDNA组[转染过表达基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的pcDNA3.1质粒阴性对照（pcDNA3.1）]、MMP-14组[转染过表达MMP-14的pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-MMP-14）]、mimicNC+MMP-14组（共转染mimic-NC和pcDNA3.1-MMP-14）及miR-584-5p mimic+MMP-14组（共转染miR-584-5p mimic和pcDNA3.1-MMP-14）。荧光定量PCR法检测MCF10A、MDA-MB-231、SK-BR-3和MCF-7细胞中的miR-584-5p表达水平以及各组MCF-7细胞中miR-584-5p及MMP-14 mRNA表达水平；蛋白印迹法检测各组MCF-7细胞中MMP-14蛋白表达；采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、划痕实验和TranLY-188011swell实验分别检测各组MCF-7细胞的增殖、迁移及侵袭情况；采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-584-5p与MMP-14的靶向关系。结果 与人正常乳腺上皮细胞MCF10A比较，乳腺癌MDA-MB-231、SK-BR-3和MCF-7细胞中miR-584-5p表达水平均降低（P<0.05），且MCF-7细胞中miRMedical pluralism-584-5p表达水平最低。与空白组和mimic-NCElexacaftor配制组比较，miR-584-5p mimic组MCF-7细胞的miR-584-5p表达水平升高，MMP-14 mRNA和蛋白表达水平、增殖活力、划痕愈合率和侵袭细胞数降低或减少（P<0.05）；与空白组和pcDNA组比较，MMP-14组MCF-7细胞的MMP-14 mRNA和蛋白表达水平、增殖活力、划痕愈合率及侵袭细胞数增高或增多（P<0.05）；与MMP-14组及mimic-NC+MMP-14组比较，miR-584-5p mimic+MMP-14组MCF-7细胞的miR-584-5p表达水平升高，MMP-14 mRNA和蛋白表达水平、增殖活力、划痕愈合率和侵袭细胞数降低或减少（P<0.05）;miR-584-5p mimic+MMP-14组MCF-7细胞的MMP-14 mRNA和蛋白表达水平、增殖活力、划痕愈合率及侵袭细胞数高于或多于miR-584-5p mimic组（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示miR-584-5p可靶向作用于MMP-14启动子区。结论 miR-584-5p可靶向调控MMP-14的表达；过表达miR-584-5p通过下调MMP-14抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探究磁共振(MRI) T2WI信号特征、表观弥散系数(ADC)值对乳腺癌患者人类表皮生长因子受体2(cerbB-2)及，增殖细胞核抗原(Ki-67)表达的相关性。方法:选取我院2017年6月至2021年4月收治乳腺癌患者117例，所有患者均行常规MRI影像检查、标本免疫组织化学染色检测，记录MRI影像检查所得T2WI信号特征、ADC值与免疫组织化学检测cerbB-2、Ki-67阳性情况，分析其相Brain biopsy关性。结果:结果显示cerbB-2表达阳性、阴性时ADC值分别为(0.81±0.11)、(0.90±0.15),cerbB-2阳性表达T2WI多为高信号，ADC值明显升高(P <0.05)。Ki-67表达阳性、阴性时T2WI信号及ADC值存在明显差异，阳性表达T2WI多为高信号，ADC值明显降低(P<0.05)。T2WI高信号、ADC值升高为cerbB-2阳性影响因素，且两者与其呈正相关性(r=0.372、r=0.310,P<0.001、P=0.001); T2WI高信号、ADC值降低为Ki-67阳性影响因素，T2WI信号与Ki-67正相关，ADC值与其呈负相关(r=0.274、r=-0.476,P=0.003、P <0.001)。结论:本文抛开乳腺癌临床常用超声及钼靶X线检查手段，以MRI检查为主要突破点，探讨T2WI信号、ADC值与机体生物因子相关系。多数研究分析MRI检查结果以ADC值与为重点，忽视T2WI信号在评估乳腺癌与机体生物因子间AMG510试剂作用。本文通过将ADC值、T2WI信号与生物因子结合，为寻找乳腺癌治疗新靶点提供支撑。乳腺癌患者MRI检查多伴有高T2WIselleck化学信号、ADC值降低特征。T2WI信号、ADC值与患者cerbB-2及Ki-67表达存在一定联系，cerbB-2及Ki-67可为后续乳腺癌治疗提供参考价值。

目的 研究银杏黄酮对川崎病小鼠冠状动脉损伤和核因子-κB(NF-κB)信号的影响。方法 实验分成对照组、模型组、实验低剂量组(100 mg·kg~(-1)银杏黄酮)、实验高剂量组(200 mg·kg~(-1)银杏黄酮)、阿司匹林组(45.5 mg·kg~(-1)阿司匹林)。取小鼠冠状动脉，用苏木精-伊红(HE)染色评价炎症细胞数目，用酶联购买Pidnarulex免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量，用蛋白质印迹法检测自噬体吞噬蛋白(Beclin-1)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p65蛋白表达。结果 对照组、模型组、实验低剂量组、实验高剂量组、阿司匹林组冠状动脉组织中炎症细胞数目分别为(1 054.62±148.49),(3 451.87±461.27),(2 647.51±322.48),(1GW4869浓度 950.48±291.82),(2 028.33±195.46)cell·mm~(-2);IL-6含量分别为(60.84±5.17),(105.62±11.42),(92.10±7.13),(79.23±6.54),(72.91±7.84)pg·mL~(-1);TNF-α含量分别为(82.17±7.25),(99.12±6.33),(93.21±4.69),(86.05±8.25),(87.28±7.11)pg·mL~(-1);IL-1β含量分别为(79.24±6.33),(93.25±7.15),(85.47±8.14),(77.93±6.12),(80.56±7.84)pg·mL~(-1);Beclin-1蛋白表达水平分别为0.32±Microbial dysbiosis0.04,0.20±0.02,0.23±0.03,0.26±0.02,0.25±0.03;LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平分别为2.16±0.22,1.13±0.16,1.35±0.12,1.50±0.14,1.62±0.17;Bax蛋白表达水平分别为0.36±0.05,0.65±0.07,0.52±0.05,0.42±0.06,0.43±0.07;Bcl-2蛋白表达水平分别为0.66±0.06,0.40±0.05,0.45±0.03,0.49±0.04,0.51±0.06;p65蛋白表达水平分别为0.46±0.06,0.95±0.08,0.78±0.10,0.65±0.08,0.56±0.07,上述指标，对照组和模型组相比，差异均有统计学意义(均P<0.05);实验低剂量组、实验高剂量组、阿司匹林组与模型组相比，差异均有统计学意义(均P<0.05);实验高剂量组与实验低剂量组相比，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 银杏黄酮改善川崎病小鼠冠状动脉炎症损伤，提高细胞自噬水平，减少细胞凋亡，机制可能与抑制NF-κB信号有关。

目的 探索微小RNA-22(miR-22)对妊娠糖尿病(GDM)患者糖代谢的影响。方法 收集2018-01至2019-01在武警广东总队医院就诊的75例妊娠糖尿病孕妇组的胎盘组织作为观察组(GDM组),PORCN抑制剂75例正常妊娠孕妇作为对照组(HC组)。培养人绒毛膜HTR8/Svneo细胞建立细胞模型，检测胎盘绒毛组织和细胞的miRperson-centred medicine-22表达。用人工合成的miR-22类似物和抑制物(反义寡核苷酸)转染HTR8/Svneo细胞，葡萄糖氧化酶法检测体外细胞摄取葡萄糖能力，Western blot检测细胞胰岛素信号通路上的PI3K、AKT、IRS、萄糖转运体4(GLUT4)的表达。设计构建含目的基因野生型和突变型的质粒，双荧光素酶报告基因系统分析miR-22与selleckchem BYL719靶基因的关系。结果 GDM胎盘组织和高糖组细胞中miR-22表达均明显低于对照组(P<0.05),miR-22表达与胰岛素抵抗指数呈负相关。GDM组织的IRS、PI3K、AKT、Glut4蛋白表达水平明显低于对照组；miR-22表达时，HTR8/Svneo细胞摄糖升高，Glut4表达升高，miR-22表达抑制时，细胞摄糖减少，GLUT4表达下降；miR-22过表达或抑制时，IRS、PI3K、AKT表达明显降低。双荧光素酶报告基因系统实验显示SLC2A4基因(编码GLUT4)是miR-22调节靶点。结论 发生胰岛素耐受时，胎盘绒毛组织和细胞miR-22表达下降，miR-22过表达可以提高体外细胞摄取糖水平，miR-22可能通过调节GLUT4而参与GDM的发病机制。

食物过敏是指人们摄入某些食物后机体产生的一种不良反应。全世界约2.2亿人群受到食物过敏的困扰,尤其是儿童过敏问题更为突出,食物过敏已成为严重影响人们身体健康的公共营养卫生问题。目前,依靠正确的商品过敏原标签来避免食用致敏食品是保护过敏患者最为有效的方法,因此商品过敏原标签正确与否至关重要。为保护过敏消费者、验证食品过敏原标签的准确性,亟需一种高通量、高灵敏度的可用于检测不同食品过敏原的方法。鉴于此,本文开发了一种能够同时识别和量化多种过敏原食品中特征性酶解肽段的液相串联质谱方法,并对市售商品的过敏原标签的准确性进行了鉴别,以期为后续过敏原掺假鉴别方法的开发提供数据支撑和参考。研究内容主要包括:第一部分基于液相串联高分辨质谱selleck 3-Methyladenine(LC-Q Orbitrap)结合蛋白组学等技Lethal infection术建立了牛奶、花生、鸡蛋和大豆中主要致敏蛋白的识别与鉴定方法。四种食物中过敏蛋白经提取、烷基化和酶解之后,形成的肽段由LC-Q Orbitrap进样分析;采集的数据用蛋白鉴定软件PEAKS Studio 8.5及在线数据库NCBI和Uniprot进行肽段和蛋白质的识别与匹BMN 673溶解度配。结果分别从牛奶中、花生、鸡蛋和大豆中识别和鉴定出了30、35、25和52种蛋白质;其中主要致敏蛋白质种类分别为:牛奶中Bos d 4、Bos d5、、Bos d 6、Bos d 9、Bos d 10、Bos d 11和Bos d 13等;花生中Ara h 1、Ara h2、Ara h 3和Ara h 6等;鸡蛋中Gal d 1、Gal d 2、Gal d 3、Gal d 4、Gal d 5、Gal d 6和Gal d 10等;大豆中Gly m 5、Gly m 6和Gly m 7等。此外,本研究对四种食物中主要蛋白质的相对丰度进行了统计,明确了致敏蛋白的在总蛋白中的丰度水平。试验结果表明主要致敏原Bos d 9、Ara h 1、Gal d 2和Gly m 6分别适合作为牛奶、花生、鸡蛋和大豆的分析对象,适用于后续液相串联质谱的定量分析。第二部分基于LC-Q Orbitrap开展了牛奶、花生、鸡蛋和大豆中主要过敏原的定量研究。从肽段的特异性、在质谱上的响应值和稳定性等方面进行考察,分别从牛奶、花生、鸡蛋和大豆中筛选出其特征性肽段HQGLPQEVLNENLLR(Bos d 9)、GTGNLELVAVR(Ara h 1)、GGLEPINFQTAADQAR(Gal d 2)和VLIVPQNFVVAAR(Gly m 6)以及其它辅助定性肽段用于液相串联质谱的定量分析。样本经脱脂,蛋白质的提取、烷基化、酶解和肽段的净化之后,由液相串联高分辨质谱采用平行反应检测(PRM)方式进样分析。同时对质谱数据采集时的离子源参数、最大离子注入时间与相应碰撞能量等均作系统性的优化。以特征肽段的响应强度与过敏原含量建立线性关系,外标法定量,测出致敏蛋白浓度。此外对建立的方法进行了系统性的方法学验证,评估了方法的灵敏度、准确性、精密度和稳定性。结果表明建立的方法对饼干基质中的牛奶、鸡蛋过敏原的LOD为1 mg/kg,LOQ为2.5 mg/kg;对花生、大豆过敏原的LOD为2.5 mg/kg,LOQ为10 mg/kg。回收率在82.83%～105.58%之间,日内变异系数在2.6%～7.5%之间,日间变异系数在3.4%～7.1%之间,相关数据均符合要求范围。此外,该方法成功应用于12种市售饼干中4种过敏原的检测分析,结果发现4种商品过敏原标签标记缺失,佐证了正确标识过敏原标签的迫切性。