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目的 研究6种药物对有机阴离子转运多肽OATP1B1及其基因多态性A388G、T521C转运作用的影响。方法 体外培养稳定高表达OATP1B1和OATP1B1基因多态性A388G、T521C的人胚肾细胞（HEK293）株，高表达空白载体（Mock）的HEK293细胞为空白对照，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各转运体细胞中mRNA表达；放射性标记化合物3Hestrone sulfate作为转运底物、利福平作为阳性抑制剂验证各高表达细胞的转运活性；测定30μmol·L~(-1)的达比加群、辛伐他汀、替格瑞洛、卡培他滨、多西他赛、依那普利对各细胞3H-estrone sulfate摄入活性的抑制作用，并依据selleck抑制剂抑制试验结果，进一步测定辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对转运体细胞的半数抑制浓度（IC50）。结果 HEK293细胞内导入的各种转运体基因都呈现良好的复制表达；OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C对底物3H-estrone 获悉更多sulfate(5μmol·L~(-1))的转运活性分别为Mock细胞的39、49和48倍，30μmol·L~(-1)利福平添加后，可将细胞的转运活endovascular infection性抑制到50%以下；辛伐他汀、替格瑞洛、多西他赛对OATP1B1的抑制作用较强，30μmol·L~(-1)给药的转运活性分别为对照组的（40.09±1.95）%、（33.82±0.61）%、（45.08±0.22）%；辛伐他汀对OATP1B1、OATP1B1/A388G、OATP1B1/T521C的IC50分别为14.2、>100、>100μmol·L~(-1)，替格瑞洛的IC50分别为19.1、68.4、>100μmol·L~(-1)，多西他赛的IC50分别为17.6、22.9、19.3μmol·L~(-1)。结论OATP1B1基因多态性在一定程度上改变了抑制剂对转运体活性的影响程度。

免疫检查点抑制剂（ICI）是一种备受关注的肿瘤免疫治疗手段，可通过阻断免疫检查点信号转导来恢复甚至增强T淋巴细胞的抗肿瘤免疫反应以达到抗肿瘤的治疗目的。PD-L1表达水平或可作为派姆单抗的一线使用标准；较高的肿瘤突变负荷（TMB）增加癌细胞抗原表达，使后者易被免疫细胞监视定位并清除，被PCR Thermocyclers定义为预测ICI疗效的生物标志物；错配修复基因（MMR）与MSI具有高度一致性，在多种实体瘤中具有预后预测作用；肿瘤浸润淋巴细胞联合TNM分期评估非小细胞肺癌患者预后准确性甚至优于病理标准ZD1839体内实验剂量，通过检测炎症因子的基因表达水平评估T细胞炎症基因表达谱可预测ICI的治疗效果；体细胞突变状态与免疫治疗的预后有关；低水平的中性/淋巴细胞比值（NLR）可能是免疫相关不良事件发生的独立预测因素；肠道微生物通过影响TIL水平干预免疫治疗的效果；除此以外还有其他预测因素可供参考。梳理总结预测相关标志物Belumosudil采购，分析其价值性与局限性，可为临床选择适合患者的治疗方案，也可使患者临床获益达到最大。

水中新兴抗生素类污染物是环境工作者关注的重要问题，如何高效去除抗生素及其去除动IACS-010759采购力学是需要重点探讨的研究内容.本文以掺硼金刚石为阳极，着重研究抗生素甲氧苄啶在BDD电极上的电催化降解及动力学行为，分析降解过程中施加电流密度、溶液pH、TMP浓度、支持电解质类型和浓度对降解动力学的影响规律，根据降解过MLN8237 NMR程中的中间产物，提出TMP的可能降解路径.结果表明，高电流密度加快强氧化性活性物种的产生，可促进有机物的降解，但析氧副反应的加剧降低了过程的电流效率；低溶液pH有利于强氧化性活性物种的产生，加快有机物的降解动力学；由于电催化过程受传质控制，有机物的浓度的提高有利于促进降解动力学；由于活性氯的产生，电解质中氯离子的存在可加快有机物的去除，同时支持电解质Na_2SO_4浓度对有机物的矿化影响不大.Regulatory toxicology TMP在BDD电极上的可能的降解路径主要包括羟基化反应、脱甲氧基化反应、裂解和开环反应，最终实现TMP完全矿化为CO_2、NO_3~-和H_2O.

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)通过早幼粒细胞白血病(PML)基因对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响。方法采用慢病毒介导的短发夹核糖核酸干扰技术,观察PML对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、克隆形成和侵袭迁移的影响,进一步观察As_2O_3联合沉默PML表达对MDMK-2206溶解度A-MB-231细胞增殖、克隆形成和侵袭迁移的影响。结果沉默PML的表达可以降低MDA-MB-231细胞的增殖活性,减少细胞的克隆数量,抑制细胞的侵袭转移能力。As_2O_3联合PML沉默可以显著抑制细胞增殖。As_2O_3联合PML沉默组的细胞克隆数最少,细胞迁移数最少。结论沉默PML的Blebbistatin分子量表达可以降低三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,As_2O_3可以增强PML对细胞增殖和侵袭迁移能力的抑制作用,可能作为乳腺癌新的治疗靶点,对三阴性乳腺癌具有潜在biocidal activity的治疗价值。

[目的]探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)对冠心病(CHD)的影响及其作用机制。[方法]通过实时定量PCR检测CHD患者和健康志愿者外周血血样和内皮祖细胞(EPC)中lncRNA HOTAIR、微小RNA-126(miR-126)和Polo样蛋白激酶4(PLK4)的表达水平；噻唑蓝法检测EPCselleck HPLC细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。激光共聚焦显微镜观察细胞自噬情况。miRcode软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-126的相互关系。TargetScan软件和双荧光素酶报告基因实验分析miR-126和PLK4的相互关系。Western blot检测lncRNA HOTAIR通过miR-1non-alcoholic steatohepatitis (NASH)26对EPC细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响。[结果] lncRNA HOTAIR和PLK4在CHD血样和EPC细胞中的表达明显上调(P<0.01),miR-126表达明显下调(P<0.01)。下调lncRNA HOTAIR或PLK4促进ESCH772984核磁PC细胞自噬，抑制CHD进展。上调lncRNA HOTAIR通过miR-126抑制了EPC细胞自噬，促进细胞凋亡。lncRNA HOTAIR通过miR-126激活了EPC内mTOR通路。[结论] HOTAIR/miR-126/PLK4轴介导EPC细胞自噬，通过mTOR信号通路影响CHD。

目的 系统评价养心氏片联合常规西药治疗冠心病(冠状动脉粥样硬化性心脏病)心绞痛患者的有效性。方法 检索中国知网、万方数据库、维普中文科技期刊数据库、PubMed,收集养心氏片联合常规西药(观察组)对比常规西药(对照组)治疗冠心病心绞痛的临床随机对照试验，检索时间为建库至2022年8月，采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。结果 最终纳入23篇文献，包括2 160例患者。Meta分析结果显示，观察组整体疗效(比值比=3.58,95%置信区间：2.53～5.06,Z=7.21,P<0.001)、心绞痛症状疗效(比值比=4.87,95%置信区间：3.35～7.08,selleck激酶抑制剂Z=8.27,P<0.001)、心电图疗效(比值比=3.34,95%置信区间：2.44～4.56,Z=7.56,P<更多0.001)均优于对照组。观察组治疗后N末端B型脑钠肽前体、高敏Corganelle biogenesis反应蛋白水平均低于对照组，一氧化氮水平高于对照组(均P<0.001)。结论 养心氏片联合常规西药治疗冠心病心绞痛患者，可提高整体疗效，改善临床症状。

癌症是威胁人类健康的首要顽疾之一。传统的化学疗法和新型的免疫疗法在癌症治疗let-7 biogenesis领域中占据着重要地位。然而传统的化疗药物和免疫疗法中的免疫刺激药物和小分子抗原在体内治疗中存在选择性差、生物利用度低和系统毒性高等缺点。已有研究表明利用纳米载体将小分子药物或抗原包封起来可以有效提高小分子在体内的选择性、生物利用度和肿瘤治疗效果。本论文以聚(2-噁唑啉)(POx)材料为基础,针对疏水小分子的特殊化学结构,设计高效且普适的载体,用于小分子化疗药物、抗原和小分子免疫佐剂在体内的传输,并对担载药物后的纳米制剂的肿瘤治疗效果进行了评估更多。本论文的研究内容和主要结论如下:(1)以POx为基础,设计合成了含有不同侧基基团的两亲性POx共聚物,利用不同的侧基基团与药物之间的相互作用,提高纳米载体疏水药物的担载效率。根据疏水性的不同,实验选取了紫杉醇、曲尼斯特、塞来昔布、阿霉素等药物用于不同载体的载药量测试。研究结果表明,静电相互作用可以有效提升纳米载体对药物的担载能力,而π-π作用只会提高载体对芳香碳含量高的塞来昔布等药物的担载能力。此外在生物相容性测试中,四种官能化POx纳米载体均未显示出明显的细胞毒性和溶血现象。放置稳定性实验结果显示,大部分载药纳米胶束在室温放置一周后依然可以保持稳定的纳米胶束形态。综上实验结果表明,通过对POx纳米载体进行相对的官能团改性,可以对我们所选择的多种药物进行高效的担载,形成的载药纳米胶束在室温下可以稳定存在,为后续的纳米药物的发展提供了一种新的选择。(2)前一体系实验证明,以聚(2-丁基-2-噁唑啉)为疏水链的POx纳米载体是适紫杉醇(PTX)优选载体,但这种载药胶束载体在体内的循环时间短,无法有效提高PTX在体内的生物利用度。针对这种情况,我们创新性地在POx载体侧基上引入了可以相互交联的碱基,设计合成了一对碱基互补的核交联两亲性POx共聚物用于担载PTX,这种胶束的氢键交联中心可以高效的担载PTX,并且具有核交联结构的载药胶束具有更高的稳定性、更小的胶束尺寸和更高的PTX担载力。在荷瘤小鼠的生物分布实验中,核交联胶束在肿瘤组织的富集量是游离PTX的8.9倍;在肿瘤抑制实验中,核交联载药胶束对两种乳腺癌的肿瘤抑制率均高于80%。综上实验结果表明,具有核交联结构的POx共聚物可以高效担载PTX,且这种核交联载药胶束独特的稳定性可以有效抑制肿瘤的生长,为POx作为医用纳米药物载体提供了理论基础。(3)治疗型肿瘤疫苗可作为一种新型肿瘤免疫疗法为传统治疗方案无法治愈的肿瘤提供了一种理想的选择。但其中使用的抗原和佐剂大多为小分子,无法顺利地通过皮下转运至淋巴结引起适应性免疫应答。针对这一问题,我们以POx为基础,设计合成了含有不同叔胺基团作为侧基的POx纳米疫苗载体,用来同时担载OVA抗原肽以及免疫刺激性佐剂R848。这些以叔胺官能团为侧基的POx载体可以高效担载OVA抗原肽以及R848。体内实验结果证明,以叔胺改性的POx为载体的纳米疫苗可以在淋巴结内高效地富集,且具有高效激活淋巴结内的树突状细胞(DC)和抗原交叉呈递能力。在B16-OVA荷瘤小鼠的抑瘤实验中,以高哌啶改性的POx为载体的纳米疫苗具有最强的肿瘤抑制作用,治疗组中有50%小鼠被完全治愈。综上实验结果证明,我们合成的叔胺改性的POx可以同时担载OVA抗原肽和R848并实现抗原和佐剂的同时递送。这种以POx为载体的纳米疫苗对B16-OVA小鼠黑色素瘤的有效抑制为POx作为纳米疫苗载体应用于Barasertib说明书医疗领域提供了有力的数据支持。

目的肿瘤免疫治疗是通过激活抗肿瘤免疫应答来抑制肿瘤进展进而延长患者生存期的。其中,肿瘤疫苗能够诱导肿瘤特异性免疫反应,是肿瘤免疫治疗中重要的insect biodiversity一部分。但单一的肿瘤特异性抗原(tumor specific antig寻找更多en,TSA)稳定性差、免疫原性低,这导致具有单一 TSA的肿瘤疫苗免疫效率低下,限制了其进一步的临床应用。为此,含有多种抗原的肿瘤疫苗被开发出来用于肿瘤免疫治疗。其中一种策略是利用含有多种TSA的肿瘤细胞裂解物(tumor cell Compound Clysate,TCL)作为肿瘤疫苗的抗原来源。然而,TCL作为肿瘤疫苗的抗原无法诱导强烈的抗肿瘤免疫反应,因为构成TCL的,大多数是非肿瘤相关抗原成分。相比之下,肿瘤细胞膜(cancer cell membrane,CCM)具有高比例、多种类的TSA,可以作为抗原来源用于肿瘤疫苗的制备。此外,CCM还可从实体肿瘤中提取,用于制备个性化的肿瘤疫苗。为了提高肿瘤疫苗的安全性和有效性,生物纳米材料被用作TSA和刺激性免疫佐剂的运载平台。基于上述内容,本课题设计了一种CCM包被的担载免疫刺激性佐剂的纳米粒子,并研究了其作为肿瘤疫苗的作用机制,探索了其在肿瘤预防和治疗中的潜在应用。方法本课题分为两个实验部分:(1)我们设计了一种表面包被CCM,内核为担载咪喹莫特(imiquimod,R837)作为免疫刺激性佐剂的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)纳米粒子的肿瘤疫苗(CCMNP/R837)。CCM来源于RM-1小鼠前列腺癌细胞。我们通过体外表征(粒径、电势、稳定性、药物释放情况等),体外细胞实验(树突状细胞(dendritic cell,DC)内吞、DC体外刺激实验等),体内动物实验(体内淋巴结引流实验、体内免疫刺激实验、体内抑瘤实验等)评价了所得到的肿瘤疫苗对小鼠前列腺癌的预防和治疗效果。(2)在上一个实验的基础上,为了进一步提高免疫刺激性佐剂的运载效率,制备个性化的纳米肿瘤疫苗,我们设计合成了羧基改性的嵌段聚噁唑啉(thioglycolic acid-grafted poly(2-methyl-2-oxazoline)-block-poly(2-butyl-2-oxazoline-co-2-butenyl-2-oxazoline),PMBEOx-COOH),并且将R837担载到PMBEOx-COOH纳米粒子中得到POxTA NP/R837;然后将来源于实体肿瘤的CCM(SCM)包被到 POxTA NP/R837 上以获得 SCM 包被的 POxTA NP/R837(SCNP/R837)。我们通过体外表征(粒径、电势、稳定性等),体外细胞实验(浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)内吞、pDC体外刺激实验等),体内动物实验(体内淋巴结引流实验、体内免疫刺激实验、体内抑瘤实验等)评价了所得到的肿瘤疫苗对小鼠前列腺癌的预防和治疗效果。结果第一部分实验结果表明,我们制备的CCMNP/R837具有典型的双层结构,粒径大小在80nm左右。外层CCM在包被到PLGA纳米粒子上之后,保留了自身蛋白成分,可以作为TSA的来源。体外DC摄取和刺激实验表明其能够明显被DC摄取,并且引起充分的免疫刺激,诱导DC成熟。体内淋巴结引流实验和免疫刺激实验表明,CCMNP/R837在皮下注射后,能够充分引流至淋巴结,并刺激引流淋巴结中的DC成熟,进而诱导下游的抗肿瘤免疫应答。体内抑瘤实验表明,CCMNP/R837作为肿瘤疫苗能够通过刺激DC成熟诱导肿瘤特异性免疫应答有效地抑制肿瘤发展。当其作为抗肿瘤治疗剂与程序性死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1)抗体联合应用时,能够高效地抑制肿瘤进展。组织学结果表明CCMNP/R837能够抑制肿瘤转移。第二部分实验结果表明,我们设计合成的PMBEOx-COOH能够高效地运载R837,SCM在包载到POxTA NP/R837后,能保留自身蛋白成分,所得到的SCNP/R837粒径大小在50nm左右。体外pDC摄取和刺激实验表明,SCNP/R837能够被pDC摄取,并诱导pDC成熟。体内淋巴结引流实验和免疫刺激实验表明,SCNP在皮下注射后,能够引流至淋巴结,并诱导引流淋巴结中的pDC成熟。体内抑瘤实验表明,SCNP作为肿瘤疫苗能够通过刺激pDC成熟,诱导肿瘤组织中细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)和自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)浸润从而有效地抑制肿瘤进展,当其作为治疗剂与PD-1抗体联合应用时,能够提高肿瘤浸润的CTL的肿瘤杀伤效果,有效地抑制肿瘤进展。结论本研究成功制备了以CCM和生物纳米材料为基础的肿瘤疫苗,该肿瘤疫苗能够将TSA和刺激性免疫佐剂运载到抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)并刺激其成熟,进而诱导机体产生抗肿瘤免疫应答。并且通过开发新型生物纳米材料,提高其作为运载平台的运载效率。开发使用SCM,为个性化肿瘤疫苗的设计和制备提供新思路。研究结果证明CCM包被的担载刺激性免疫佐剂的纳米粒子作为肿瘤疫苗具有肿瘤预防的潜力,而且当其作为肿瘤治疗剂与免疫检查点抑制剂联合使用时,具有肿瘤治疗的效果。本研究为新型肿瘤疫苗,特别是个性化肿瘤疫苗的制备和临床应用提供了新思路和一定的理论依据。

【目的】探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)S蛋白的结构和功能，为建立PEDV感染的诊断方法和疫苗开发提供理论依据。【方法】以PEDV经典CV777株为模板，通过PCR扩增获得S、S1基因片段；PCR扩增产物分别克隆pET-30a(+)原核表达载体和pFLAG-IACS-10759生产商CEntinostat说明书MV-3真核表达载体，构建原核表达质粒pET-30a-PEDV-S和真核表达质粒pFLAG-CMV-3-PEDV-S1;将pET-30a-PEDV-S转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达PEDV-S重组蛋白，通过变性、复性、浓缩纯化重组蛋白并进行Western blotting检测；将PEDV-S重组蛋白免疫C57BL小鼠制备多克隆抗体，获得的多克隆抗体经间接免疫荧光试验(IFA)检测特异性，通过间接ELISA法检测多克隆抗体效价；将pFLAG-CMV-3-PEDV-S1转染至HEK293T细胞，以制备的多克隆internet of medical things抗体为一抗，经IFA测定PEDV-S1蛋白的抗原性和多克隆抗体的反应性。【结果】成功克隆出PEDV S和S1基因，构建了可表达PEDV-S重组蛋白的原核表达质粒和在HEK293T细胞中高效表达S1蛋白的真核表达质粒；PEDV-S重组蛋白在IPTG为0.5 mmol/L、16℃诱导8 h条件下可获得最高表达量，主要以包涵体形式存在；Western blotting结果显示，PEDV-S重组蛋白成功表达；ELISA检测结果显示，制备的多克隆抗体效价达1∶3 280 500;IFA结果显示，多克隆抗体有良好的特异性，可特异性识别PEDV-S和PEDV-S1蛋白。【结论】本研究获得了PEDV-S重组蛋白，并成功表达S1蛋白，制备出PEDV-S蛋白多克隆抗体，为研究S蛋白的结构和功能提供了条件，为揭示PEDV致病机制奠定了基础。

目的 探讨冠心病二级预防药物的基因多态性与冠心病患者长期预后的相关性。方法 回顾性纳入冠心病患者128例，将其分为慢性冠脉综合征(CCS)组53例和急性冠脉综合征(ACHIV – human immunodeficiency virusS)组75例，根据生存结局再将其分为存活组116例和死亡组12例。通过电子病历系统查询所有患者的一般资料、临床资料及药物基因分型并分组进行比较。采用Cox单因素回归分析和Cox生存分析评估影响冠心病患者全因死亡的相关因素。结果 死亡组患者年龄高于存活组，Alb水平低于存活组(P<0.05)。Cox单因素回归分析结果显示，年龄、出院心率、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、糖化血红蛋白(HbA1c)均与冠心病患者全因死亡相关；Cox生存分析结果显示，hs-CGDC-0973体内RP、HbA1c均与冠心病患者全因死亡相关(P<0.05)。ACS组患者入院后行冠脉再灌注治疗比例及HbA1c水平均高于CCS组(P<0.05)。Cox单因素回归分析结果显示，出院心率、hs-CRP及HbA1c均与ACS患者全因死亡相关；Cox生存分析结果显示，HbA1c与ACS患者全因死亡相关(P<0.05)。结论 对于良好管理的冠心病患者，未能观察到冠心病二级预防药物的基GSK1349572作用因多态性其长期预后的相关性，炎症和血糖管理在冠心病中的作用值得深入研究。