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目的探讨连结素(Titin)抗体检测在重症肌无力(MG)并发胸腺瘤患者诊断中的价值。方法选取2013年1月~2014年11PLX-4720说明书月石家庄市第一人民医院收治的MG患者56例,其中并发胸腺瘤患者(MGT)36例,不伴胸腺瘤MG组(NTMG)56例,其他疾病患者(OND)30例,健康对照组(HC)50例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对重症肌无力患者、其他疾病患者和健康对照组进行Titin抗体检测并进行比较。结果 Titin抗体在MGT组、NTMG组、OND组和HC组的阳性率分别为88.9%,10.7%,6.7%和2.0%。MGT组的Titin抗体阳性率较NTMG组、OND组和HC组均显著升高(x~2=52.1,41.1,63.2,均P=0.000),而NTMG组、OND组和HC组间比较差异无统计学意义(x~2=0.051,P=0.821,x~2=1.993,P=0.158)。Titin抗体诊断MG并发胸腺瘤患者的敏感度为8Puromycin试剂8.9%,特异度为89.3%。按照C)sserman临床分型,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ及Ⅳ型MG患者的Titin抗体阳性率分别为11.8%,47.6%,83.3%和100%。Titin抗体阳性率与MG患者临床分型具有统计学意义(x~2=9.09,P=0.028)。结论 Titin抗体是MG并发胸腺瘤特异和敏感的medical entity recognition血清学诊断指标。Titin抗体阳性率越高,可提示重症肌无力患者病情越严重。

外泌体(exosomes,Exo)是一类具有生物学活性的,由绝大多数细胞分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)。Exo携带供体细胞的分子生物学信息,参与细胞通讯及多种生理病PLX3397 molecular weight理过程的调节。在临床上具有药物治疗,疾病诊断,药物递送的应用前景。但是外泌体在临床应用上面临规模化生产困难的问题。另一方面,外泌体的供体细胞类型影响外泌体的生物学功能。不同供体细胞来源的外泌体,在临床上具有不同的应用潜力。在外泌体作为治疗性药物方面,神经干细胞来源的外泌体(neural stem cell-derived exosomes,NSC-Exo)对多种神经系统疾病的治疗具有独特的优势。NSC-Exo携带与神经干细胞(neural stem cells,NSCs)相关的特异性蛋白质,脂质和核酸。另一方面,Exo不具备复制扩增能力,可以规避干细胞治疗过程中的成瘤性风险。但是,NSC-Exo规模化生产主要面临两大挑战,诱导多能干细胞来源的NSCs(induced pluripotent stem cell-derived NSCs,iNSCs)异质性高,以及iNSCs具有容易向神经元或胶质细胞分化的潜力。在外泌体作为药物载体方面,牛奶来源的外泌体(milk-derived exosomes,milk-Exo)具有来源丰富,免疫原性低,耐受胃肠道消化并能够穿过肠道屏障进入血液循环的特点。因此,与细胞上清来源的外泌体相比,milk-Exo在口服递送药物方面更具潜力,特别是治疗需要反复多次给药的慢性疾病,如二型糖尿病(type 2diabetes milletus,T2DM)。由于牛奶中含有大量蛋白质和脂肪,相比于纯化细胞上清来源的外泌体,规模化制备药用级别的牛奶外泌体更加具有挑战性。另一方面,大分子药物如利拉鲁肽(liraglutide,LRT),由于缺少内在静电力,难以通过电转的方法实现外泌体装载。因此,为了满足临床上对神经系统疾病和T2DM疾病治疗的需求,本课题针对iNSC-Exo及milk-Exo临床应用面临的特殊性及共通性问题,提出可能性解决办法。本课题研究内容分为两大部分:1)以人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)作为NSCs的供体细胞,在hiPSCs中过表达一种对NSCs的增殖和干性起到主要调控作用的孤核受体蛋白—TLX,实现hiPSCs~(TLX)向iNSCs~(TLX)分化。利用TLX作为NSCs干性维持及增殖调控的内在信号调控器,维持iNSCs~(TLX)干性稳定,同时解决iNSCs无法长期扩增问题。此外,建立iNSC~(TLX)-Exo规模化分离纯化工艺,为其在神经系统疾病中的治疗潜力提供新见解。2)将上述iNSC~(TLX)-Exo规模化制备工艺拓展应用于milk-Exo的生产,并制备装载利拉鲁肽的牛奶外泌体(LRT-loaded milk exosomes,LRT-Exo)。针对不同口服给药途径进行药代动力学及药效动力学研究,建立LRT-Exo口服治疗T2DM的方法。第一部分内容研究方法与结果:(1)利用慢病毒感染方式,获得过表达TLX全长蛋白(TLX full-length protein,TLX-FL,1-385 aa)或TLX截短体蛋白(TLX truncated protein,TLX-TP,182-385 aa)的hiPSCs。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR),RAN测序(RNA-sequencing,RNA-Seq),流式细胞术(flow cytometry,FCM),westerNSC 119875临床试验n blot(WB)方法,证明细胞株构建成功。(2)利用FCM,RNA-Seq,qPCR,WB,免疫荧光(immunofluorescence,IF)方法,证明TLX作为内在驱动力,调节SMAD及Wnt信号通路,使hiPSCs向iNSCs自驱动分化,将分化周期从14天或21天缩短到6天,获得Sox2~+/Nestin~+,Vimentin~+/Musashi-1~+阳性率均大于90%的iNSCs~(TLX-FL/TP)。(3)利用RNA-Seq,FCM,qPCR,WB,核定鉴定,电生理,IF方法,证明TLX-TP对iNSCs细胞的促进增殖和维持干性的调控能力明显优于TLX-FL,iNSCs ~(TLX-TP)细胞能以1:15的扩增速率维持至少45代细胞稳定传代,同时仍具备定向分化为运动神经和多巴胺神经元的潜力。(4)建立基于切向流超滤(tangential flow filtration,TFF)结合多模式色谱法(multi-modal chromatography,MM)和密度梯度离心法(density gradient ultracentrifugation,DGUC)的可放大的外泌体纯化工艺。利用纳米流式(nano flow cytometry,nanoFCM),WB,透射电镜(transmission electron microscopy,TEM),蛋白组定量分析,RNA-seq,以及大鼠原代混合胶质细胞炎症模型及大鼠原代胶质细胞-神经元细胞共培养模型,对iNSC~(TLX)-Exo进行表征评价。结果表明iNSC~(TLX)-Exo纯度接近90%,并且具有显著抑制大鼠原代胶质细胞的炎症反应的能力,及保护大鼠原代神经元的作用。第二部分内容研究方法与结果:(5)利用上述的纯化工艺,对1 M Na_3PO_4沉淀处理后的牛奶进行外泌体提取。通过nanoFCM,分子排阻-高效液相色谱分析(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC),WB,TEM方法表征。结果显示,milk-Exo纯度高达97%,并且可实现每10L牛奶中提取(1.37±0autophagosome biogenesis.55)×10~(14)颗粒外泌体。(6)分别尝试舌下,灌胃,肠溶胶囊三种不同的给药途径,利用nanoFCM检测啮齿动物血液中被PKH67标记的milk-Exo颗粒浓度,通过与尾静脉给药后最大血药浓度进行归一化,得到各个口服给药途径的相对生物利用度。结果显示,舌下给药途径的相对生物利用度(约为10%)明显高于其他途径给药的相对生物利用度(灌胃组约为0.6%,肠溶胶囊组为0%)。(7)利用超声和共孵育方法装载药物实现milk-Exo对多肽药物的装载。通过酶联免疫吸附反应(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测,载药量为每1×10~8颗粒外泌体装载(6.013±0.163)ng LRT;装载利拉鲁肽的牛奶外泌体(liraglutide-loaded milk exosomes,LRT-Exo)仍能刺激luciferase-GLP-1R-CHO细胞释放luciferase,说明超声不破坏LRT蛋白活性。(8)在db/db糖尿病小鼠模型中对LRT-Exo进行药代动力学和药效动力学分析,舌下给药6×10~(13)particles/kg LRT-Exo,显著降低小鼠随机血糖和空腹血糖,药效与尾静脉注射6×10~(12)particles/kg LRT-Exo组相当。并且小鼠血液中LRT血药浓度能维持至少24h稳定。结论:(1)建立了一套可扩大制备的基于切向流超滤结合多模式色谱法和密度梯度离心法的外泌体纯化工艺。该方法对外泌体的纯化效率高,产率高,样品纯度高,重复性好;并且同时适用于细胞来源与牛奶来源的外泌体的纯化。(2)hiPSCs过表达TLX,可获得低异质性可长期稳定传代的iNSCs~(TLX),为NSC-Exo规模化制备解决供体细胞问题。(3)解决milk-Exo装载多肽药物问题。并开发milk-Exo舌下给药方法,显著提高LRT-Exo口服生物利用度,降低db/db糖尿病小鼠血糖,加速milk-Exo口服递送多肽药物临床应用的转化。

目的 分析瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗冠心病患者的效果及安全性。方法 100例冠心病患者,随机分为对照组和研究组,各50例。对照组患者给予阿托伐他汀治疗,研究组给予瑞舒伐他汀。比PF-6463922价格较两组患者治疗前后纽约心脏病协会(NYHA)分级、血脂监测指标[总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂immunochemistry assay蛋白胆固醇(HDL-C)]、动脉粥样硬化相关指标[颈动脉内膜中层厚度(IMT)、超敏C反应蛋白、胱抑素C]及治疗效果、不良反应发生情况。结果 治疗后,研究组TC(4.34±0.14)mmol/L、LDL-C(2.73±0.21)mmol/L、TG(1.54±0.51)mmol/L及NYHA分级(1.12±0.15)级均低于对照组的(5.67±0.14)mmol/L、(3.81±0.65)mmol/L、(2.01±0.65)mmol/L、(2.74±0.22)级,HDL-C(1.85±0.34)mmol/L高于对照组的(1.54±0.42)mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组IMT(0.91±0.12)mm小于对照组的(1.47±0.35)mm,超敏C反应蛋白(4.56±1.34)mg/L、胱抑素C(1.53±0.15)mg/L均低于对照组的(8.51±1.89)、(1.71±0.22)mg/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组总有效率96.00%高于对照组的80.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组不良反应发生率Adezmapimod分子式2.00%低于对照组的14.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 瑞舒伐他汀治疗冠心病的临床效果优于阿托伐他汀,可改善患者心功能,调节血脂,逆转动脉粥样硬化,安全性更高,值得推广。

随着全球气候变暖，干旱胁迫成为限制番茄等蔬菜作物安全生产的重要因素之一。前期研究发现嫁接贵州本土半野生番茄GZ-01砧木其可以提高植株的耐旱性。为探究野生番茄GZ-01增强植株耐旱性的分子机理，以半野生番茄Gmarine biotoxinZ-01砧木和红Wnt-C59说明书果番茄为试验材料，结合形态生理学和分子生物学，比较嫁接番茄和自嫁接番茄植株对干旱胁迫的响应。结果表明，干旱胁迫下，与自嫁接植株R/R相比，GZ-01/R嫁接植株细胞膜的损伤显著降低，植株的抗氧化能力、干物质累积量、CO2同化率和水分利用率显著提高，离体叶片失水率显著降低，下气孔闭合比率显著提高，脱落酸（ABA）合成相关基因表达量和ABA含量显著提高。嫁接植株GZ-01/R可能通过调控ABA的合成来影响气孔开闭，调控叶片失水率，提高植株水分利用率，从而影响植株此网站对干旱胁迫的响应。本研究为开发利用贵州本土半野生番茄资源奠定了基础，为增强干旱胁迫和分子调控网络途径提供了理论支撑。

目的：分析胺碘酮联合美托洛尔对老年冠心病并发心律失常的治疗效果及对心率的影响。方法：纳入2021年1～12月西安灞桥纺织医院收治的老年冠心确认细节病并发心律失常患者80例，随寻找更多机数表法分为对照组和试验组，各40例。对照组采用胺碘酮治疗，试验组采用胺碘酮联合美托洛尔治疗。比较两组治疗情况。结果：试验组治疗总有效率为95.00%，对照组为77.50%，试验组高于对照组（P<0.05）；试验组不良反应率与对照组无明显区别（P>0.05）。治疗前两组患者左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室射血分数（LVEF）、心率（HR）、短阵室性心动过速和室性期前收缩次数组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后两组LVESD、LVEED、Hscreen mediaR、短阵室性心动过速和室性期前收缩次数均较治疗前降低，LVEF较治疗前升高（P<0.05），且组间比较试验组LVESD、LVEED、HR、短阵室性心动过速和室性期前收缩次数低于对照组，LVEF高于对照组（P<0.05）。结论：在老年冠心病合并心律失常患者治疗中，胺碘酮联合美托洛尔治疗能够促进患者心功能改善，缓解心律失常问题，疗效显著，且不增加不良反应，安全可靠，值得推荐。

目的 探讨加味柴胡疏肝散(JWCH)对酒精性肝病(ALD)的保护作用及其机制。方法 40只小鼠，随机分为对照组、模型组、JWCH低剂量(JWCH-L)组、高剂量(JWCH-H)组，每组10只。除对照组外，其余各组每天定时灌胃给予50°酒精造模，连续灌胃4 w。第5周开始，对照组和模型组灌胃给予生理盐水，JWCH各治疗组给予JWCH水煎液，连续灌胃Fer-1供应商治疗2 w。称量小鼠体重和肝脏重量，计算肝脏指数变化；酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、过氧化氢酶selleckchem(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量；比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量；肝脏苏木素-伊红(HE)染色，观察形态学变化；Western印迹法检测肝脏蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶(GSK)-3β、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2蛋白表达量。结果 模型组较对照组肝脏指数明显升高(P<0.01),JWCH各治疗组肝脏指数较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。血清酶学检测显示，与对照组比较，模型组血清中CAT、GSH-Px、SOD明显降低(P<0.05),TG、ALT、AST、ROS含量明显升高(P<0.01);与模型组相比，JWCH各治疗组血清中CAT、GSH-Px、SOD含量明显上升(P<0.05),TG、ALT、AST、ROS水平明显下降(P<0.01)。HE染色显示，模型组肝脏组织出现明显的炎细胞浸润medical acupuncture和肝细胞脂肪变性，JWCH明显改善肝脏组织炎症和肝细胞脂肪变性。Western印迹检测结果发现，与对照组比较，模型组肝脏中p-AKT、p-GSK-3β、Nrf2蛋白表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较，JWCH各治疗组肝脏中p-AKT、p-GSK-3β、Nrf2蛋白表达量明显升高(P<0.05)。结论 JWCH对ALD小鼠具有明显的保护作用，其机制可能与调控AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路、抑制ALD氧化应激反应有关。

目的:为此网站了满足系列食品中食源性致病菌携带的β-内酰胺类抗生素耐药机制快速检测需求,开展了携带此类抗生素耐药性编码基因沙门氏菌参考菌株定性标准样品的研制,以提供溯源性强、评价准确度高、易在各检测机构间开展耐药微生物检测的技术保障。方法:活化实验室-80℃保存的3株沙门氏菌,通过PCR、DNA测序和BLACL 318952配制ST比对验证其所携带的β-内酰胺类抗生素耐药机制编码基因,同时检验目标基因的遗传稳定性。在真空冷冻干燥条件下制备活菌量为106～107CFU/瓶的菌株标准样品。按照GB/T 150ER-Golgi intermediate compartment00.3-2008要求对参考菌株标准样品进行均匀性检验,使用方差分析法(F检验)对结果进行统计分析、均匀性评价。分别于37,4℃和-80℃模拟运输和贮藏条件,检验参考菌株的稳定性。委托具有检验资质的7家实验室对参考菌株进行联合定值。结果:3株候选参考菌株中1株同时携带β-内酰胺类抗生素耐药机制编码基因blaCTX-M-55/blaTEM-1,1株同时携带blaTEM-1/blaOXA-1/blaCTX-M-l5,1株携带blaCTX-M-3,在15代内均可稳定遗传。制备的参考菌株均匀性良好。在37℃贮藏13 d,4℃贮藏90 d,-80℃贮藏360 d,活菌量基本稳定在×104CFU/瓶以上。7家实验室联合定值结果表明,制备的参考菌株特性值与目标一致,可作为标准样品使用。结论:遵循标准样品制备标准和规范,研制了3株适于β-内酰胺类抗生素耐药机制检测用参考菌株,可用于食源性细菌β-内酰胺类抗生素耐药机制的快速检测。

目的 探讨血清异常凝血酶原(protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)和甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌(primary hepatocCL13900半抑制浓度ellular carcinoma, PHC)的临床诊断价值.方法 选取PHC患者98例，肝硬化患者50例，慢性肝炎患者50例，健康体检者50名；检测其血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平，绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve, ROC),并计算临界值确认细节、灵敏度、特异度及曲线下面积(Area under the curve, AUC);诊断PHC的临界值：血清PIVKA-Ⅱ为40 mAu/mL,AFP为20 ng/mL.结果 PHC组血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平高于其他3组(P<0.05);血清PIVKA-Ⅱ、AFP及联合诊断PHC的AUC面积分别为0.931、0.887和0.934,灵敏度分别为89.80%、84.70%、91.80%,特异度分别为88.70%、87.30%、84.00%;将40 mAu/mL、20 ng/mL分别作为血清PIVKA-Ⅱ、AFP诊断PHC临界值时，联合诊断优于二者单独诊断；血清PIVKA-Ⅱ对血清AFP阴性、血清AFP阳性的PHC患者均有诊断价值(P>0.05).结论 opioid medication-assisted treatment血清PIVKA-Ⅱ可用于PHC的诊断，尤其对于AFP阴性PHC的诊断；血清PIVKA-Ⅱ、AFP联合诊断PHC的价值优于二者的单独诊断.

目的建立并评获悉更多估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力,为后续防治布病提供基础理论指导。方法设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。比较MC法与离心柱法、磁珠法及手工法提取布氏菌核酸效率;设计微流控全自动核酸检测(MC-PCR)与基因测序符合性测试、以及实时荧光定量核酸扩增检测(q PCR)、Taq Man探针法检测比较实验;评估MC-PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限。结果MC法提取布氏菌核酸在27个循环就达到设定的阈值,效率优于大多成品试剂盒,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MC-PCR与基因测序Kappa值0.659、与q PCR Kappa值0.777,检测具有高度一致性;MC-PCR与基因测序、Taq Man探针法、q PCR检测阳性结果符合率为100%、1PCI-32765生产商00%和97.3%;准确性结果符合率为100%;特异性结果阴性率100%;重复性结果均可以检出布氏菌;检Medical clowning出限浓度为825 copies/m L时,经两两比较MC-PCR与Taq Man、QPCR不同检测方法之间检出率差异有统计学意义(P<0.05)。结论MC-PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床。这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用。

醛酮还原酶（AKR1C3）是治疗去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的重要靶点，寻找高选择性的AKR1C3抑制剂是该靶点研究的热点和难点。本文采用Topomer CoMFA技术，对46个AKR1C3选择性抑制剂进行三维获悉更多定量构效关系研究，得到3D-QSAR模型确认细节，其交互验证系数q~2为0.59，非交叉相关系数r~2为0.918，主成分数N为5,q_(pred)~2为0.98，结果表明该模型有较好的预测能力。采用Topomeimmune modulating activityr Search技术在Decoy数据库中进行R基团的筛选，选择RN值最大的10个Ra片段和8个Rb片段进行拼接，获得7个活性预测值高于模板分子，3个活性预测值与模板分子相当的化合物。最后，用分子对接技术研究所设计的新化合物与AKR1C3的作用模式，发现化合物N05和N06可以同时与关键酶催化位点（OS）和选择性口袋SP1中的氨基酸残基Tyr55和Asn167发生作用，说明所设计的AKR1C3抑制剂具有较高的AKR1C3选择性。