第一部分:Alpha LISA检测乙型流感病毒的方法建立与性能评价背景均相光激化学发光免疫分析技术(Alpha LISA),其原理是利用分子间相互作用,使供体微珠和受体微珠相互接近,从而产生放大的信号。该方法具有灵敏度高,操作简单的优点。乙型流感病毒(IBV)可在人群中引起季节性流行性呼吸道疾病,给公共卫生带来了较大的负担,然而目前IBV的常用诊断方法存在灵敏度低或耗时费力等问题,因此迫切需要新的灵敏快速的检测方法对IBV进行筛查诊断。目的建立用于检测IBV的Alpha LISA快速检测方法,并评价该检测方法的诊断性能。方法(1)2019年2月至7月于解放军总医院第五医学中心收集228份咽拭子样本。(2)通过筛选IBV标记的受体微珠、链霉亲和素偶联供体微珠和生物素化IBV抗体的最适比例,以及反应所需时间和温度,构建IBV的Alpha LISA快速检测方法。(3)采用灭活IBV、IBV抗原和咽拭子样本对Alpha LISA进行评价,并与化学发光酶免疫分析(CLEIA)和侧流胶体金免疫分析(LFIA)进行比较。结果(1)当IBV抗体标记的受体微珠为50μg/m L,链霉亲和素偶联供体微珠为40μg/m L,生物素化的IBVEntinostat IC50抗体为0.5μg/m L,孵育时间为15-10分钟,孵育温度为37℃时,Alpha LISA的反应条件最佳。(2)用于检测IBV的Alpha LISA不与其他常见呼吸道病毒发生交叉反应,批间变异系数(CV)和批内CV均<5%。(3)228份咽拭子样本的结果显示Alpha LISA和LFIA之间具有良好的一致性(Kappa=0.982),CLEIA和LFIA之间具有良好的一致性(Kappa=0.813)。Alpha LISA在检测灭活IBV中具有最高的灵敏度。结论Alpha LISA在检测IBV具有灵敏度高、特异度高、重复性好、操作简单和反应快速的优点,可适用于IBV的筛查。第二部分:Alpha LISA检测血清中性粒细胞载脂蛋白在脓毒血症患者中的应用背景中性粒载脂蛋白(HNL)作为新兴的生物标记物,已被证实在诊断细菌感染上具有高灵敏度与特异性,目前用于检测HNL的方法以ELISA为主,该方法存在耗时费力的缺点。脓毒血症作为ICU患者常见死亡原因,病情凶险且死亡率高。然而目前常用的生物标志物在诊断脓毒血症休克及预测脓毒血症患者预后的作用有限,因此迫切需要新的生物标志物来协助临床诊断。目的建立用于检测HNL浓度的Alpha LISA方法,并探讨HNL在诊断脓毒血症休克及预测脓毒血症患者预后的作用。方法(1)2021年9月至2022年4月于解放军总医院第五医学中心收集146份血清样本。(2)通过筛选最佳的一组单克隆HNL抗体和血清稀释比例构建用于检测血清HNL的Alpha LISA方法。(3)将Alpha LISA的HNL检测结果与商业ELISA试剂盒进行比较。(4)对78例脓毒血症患者进行研究,使用受试者特征曲线(ROC)曲线评估HNL在诊断脓毒血症休克和预测脓毒血症患者预后的性能。结果(1)最佳一组单克隆抗体为1F2-1G2;最佳血清稀释比例为1:20。(2)Serratia symbiotica血清HNL的Alpha LISA检测范围为1.5 ng/m L~1000 ng/m L,检测限为1ng/m L,检测时长约为25分钟。(3)Alpha LISA检测结果与ELISA结果高度一致(R2=0.9413)。(4)脓毒血症患者的HNL水平分析,脓毒血症休克组明显高于一般脓毒血症组(中位数356.47 ng/m L vs 158.93 ng/m L,P<0.0001),28天非存活组明显高于28天存活组(中位数331.83 ng/m L vs 175.17 ng/m L,P<0.0001)。(5)ROC曲线MRTX849分析结果显示,在诊断脓毒血症休克和预测脓毒血症患者预后中,HNL的AUC分别为0.857和0.784。(6)HNL与SOFA评分、APACHEⅡ评分之间具有较高相关性。结论(1)Alpha LISA与商业ELISA具有良好的一致性,并且相较于ELISA具有更短的操作时间和更宽的检测范围。(2)血清HNL具有诊断脓毒血症休克患者和预测脓毒血症患者预后的潜在价值。