目的 利用PCR和基因定点突变技术，分别selleckchem Canagliflozin扩增出K88ac、K99、LT_B和突变的ST_1基因，构建了重组菌株BL21(DE3)(pXKKSL4),酶切鉴定和序列分析表明构建的pXKKSL4表达载体包含有K88ac-K99-3ST_1-LT_B融合基因且阅读框架正确。方法 SDS-PAGE分析表明融合蛋白占菌体总蛋白含量的35.72%。ELISA检测证实融合蛋白能与ST_1单抗、LT_B、K88ac和K99抗体相结合。结果 乳鼠灌胃实验表明K88ac-K99-3ST_1-LT_B融合蛋白已失去phosphatidic acid biosynthesisST_1天然毒性，免疫保护试验表明菌株氢氧化铝佐剂苗和包涵体粗提物氢氧化铝佐剂苗均具有良好的免疫效果，其免疫保护率分为98%和96%Blebbistatin体内。结论 上述研究表明构建的四价灭活疫苗不但解决了ST_1肠毒素毒性问题，而且又赋予其免疫原性，同时增加K99菌毛可使免疫效果进一步增强，这样从肠毒素和菌毛两种途径，达到预防由ETEC引起的腹泻目的，从而有效控制腹泻的发生，为将来制备产肠毒素大肠杆菌基因工程灭活疫苗打下坚实基础。