三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)为无色液体,气味似氯仿,是一种易挥发、难溶于水、易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂的不饱和卤代脂肪烃类化学物。TCE主要用于电路板、电子元件和五金制品的清洗去污,可通过挥发、泄漏、废液及焚烧等方式排放到环境中,其对人体的危害已引起广泛关注。但环境中的低浓度TCE也会导致免疫功能障碍,与TCE职业暴露相似,均能诱发免疫反应。研究显示,低剂量TCE暴露可促进自身免疫性肝炎发生(AIH),但相关致病机制仍不清楚。自身抗原是AIH发生的关键因素,但对TCE诱发AIH相关的自身抗原鲜有研究,其形成机制更是尚未见报道。发育阶段的机体接触到的小Dendritic pathology剂量(0.05mg/L,相当于环境水平,低于国家饮用水标准0.07mg/L)的TCE可以产生免疫毒性效应,并可在其成人后引发自身免疫性肝炎,其肝脏损伤程度与其成人时的高剂量(即职业暴露水平)相当,但长期低剂量TCE暴露引起自身免疫性肝炎的分子机制尚不清楚,前期课题组已成功构建TCE诱导的小鼠AIH模型,在此基础上,为了进一步探索低剂量三氯乙烯孕期暴露促进子代自身免疫性肝炎的发病机制,本论文主要从下几个方面开展研究工作:1.TCE促进MRL+/+小鼠自身免疫性肝炎相关自身抗原的鉴别方法:收集0.05mg/LTCE处理组小鼠血清(AIH阳性)与对照组小鼠血清(AI H阴性),定制相应蛋白标准品,将100ng-500ng标准品固定在NC膜上分别孵育TCE处理组(AC59采购IH阳性)与对照组(AIH阴性)小鼠血清,洗涤后孵育抗鼠IgG二抗,通过化学发光进一步验证自身抗原。结果:利用斑点杂交实验对前期课题组蛋白组学筛选出来的5个抗原蛋白的相应抗体水平进行鉴定,与对照组比较各抗体相对水平,结果显示ENO1(烯醇化酶)、ALDH1A1(乙醛脱氢酶)以及ADH1A(乙醇脱氢酶)蛋白对应的抗体在TCE处理组中升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功鉴别MRL+/+小鼠自身免疫性肝炎AIH中的关键自身抗原,ENO1、ALDH1A1以及ADH1A可能是TCE暴露后致自身免疫性肝炎发生的抗原。2.TCE代谢产物促进MRL+/+小鼠自身免疫性肝炎形成的分子机制方法:提取AIH小鼠与对照组小鼠肝组织蛋白,利用免疫沉淀联合修饰蛋白质组学技术明确自身抗原蛋白是否与TCE代谢产物1,2-二氯乙烯硫酮(SH-(1,2-Dichlorovinyl),DCVSCL 318952作用H)形成加合…