正钒酸钠通过抑制自噬调控胃癌放疗增敏的研究

目的:过渡金属钒存在于天然环境中,对人体有多种生理和药理效用。正钒酸钠(SOV),作为一种众所周知的钒化合物,已在多种人类癌症中表现出明显的抗肿瘤活性。而正钒酸钠对胃癌的影响目前尚不清楚,并且尚未有研究报道正钒酸钠与胃癌放射敏感性之间的关系。所以在本研究中,我们探讨正钒酸钠是否能使胃癌细胞对放射线敏感。方法:采用人胃腺癌细胞SGC-7901、MGC-803和SPF级雌性BALB/cnu/nu裸鼠作为研究对象。(1)CCK-8法检测正钒酸钠不同药物浓度对于SGC-7901细胞和MGC-803细胞的抑制能力,并检测正钒酸钠的半数致死量IC50值。(2)蛋白免疫印记法检测SGC-7901细胞和MGC-803细胞在不同药物浓度作用下自噬水CL 318952生产商平的表达。(3)蛋白免疫印记法、细胞免疫荧光、CCK8法检测五组不同实验组的自噬蛋白LC3和P62的表达水平、自噬活性以及细胞活力。CCK8法检测回复实验中三组不同实验组的细胞活力。(4)平板克隆和EDU实验检测正钒酸钠在SGC-7901细胞和MGC-803细胞中是否有放射增敏性。(5)q RT-PCR测定不同正钒酸钠浓度下自噬相关基因m RNA含量筛选出药物作用的靶基因,并测定靶基因在对照组、放射组、放射+正钒酸钠组和放射+正钒酸钠+过表达靶基因的蛋白表达水平。(6)构建SGC-7901胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,检测正钒酸钠和放射联合治疗移植瘤的效果,增殖情况,蛋白免疫印记法检测不同组别瘤体组织中相关自噬基因的蛋白表达水平。结果:(1)药物正钒酸钠对于两种胃癌细胞的活力有显著的抑制性。PUN30119纯度(2)随着正钒酸钠药物浓度的升高,细胞的自噬水平随之降低,表明正钒酸钠是一种自噬抑制剂。(3)在放射状态下,抑制细胞的活力,与空白对照组相比,细胞的自噬水平升高。自噬抑制剂3-MA和自噬增强剂雷帕霉素RAPA可以调控放射状态下的自噬,3-MA抑制放射状态下的自duration of immunization噬,抑制细胞活力,雷帕霉素增强自噬,与单纯放射组相比,增强放射状态下的细胞活力。正钒酸钠跟3-MA有同样的作用,抑制放射激活的自噬,抑制细胞生长活力。在回复实验中,正钒酸钠可以调控自噬。(4)在细胞水平,正钒酸钠有明显的放射增敏作用。(5)随着正钒酸钠药物的升高,ATG10的m RNA含量随之下降。当暴露于辐射时,蛋白质ATG10以更高的水平存在。当存在辐射和正钒酸钠时,ATG10蛋白的量下降,过表达ATG10能够阻止下降趋势。(6)在体内实验中,正钒…