禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Bioglass nanoparticlesAvian Leukosis virus,ALV)引起的一类具有传染性的禽肿瘤性疾病的统称。ALV感染后可以引起鸡只生长缓慢、免疫抑制、肿瘤发生和死亡等,严重影响了我国养禽业的发展并带来巨大的经济损失。依据囊膜糖蛋白Gp85的不同可以将ALV分为A～K 11个亚群,目前ALV的防控主要依靠淘汰阳性种鸡群。前期的研究中发现,ALV-A感染后可以导致肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3/A20)转录水平上调,A20作为一种泛素编辑酶在多种肿瘤或癌症发生及发展的进程中起着极其重要的作用,目前在禽类的研究中发现,A20的上调可以缓解鸡小肠上皮细胞由脂多糖(LPS)诱导的NF-κB信号通路的激活和炎症反应的产生,除此之外在禽类的研究中再无其它报道。禽白血病作为禽类三大肿瘤病之一,对我国的家禽及相关产业造成了巨大的经济损失,前期研究发现感染https://www.selleck.cn/products/MLN8237.htmlALV-A后A20转录上调,因此,研究A20在ALV-A诱导肿瘤发生过程中的作用及机制具有重要理论和实践意义。本研究对2015年分离到的一株致淋巴细胞瘤和髓细胞瘤毒株HB2015012进行反向遗传学操作获得背景清晰的毒株;利用腺病毒载体构建A20过表达和A20sh RNA干扰腺病毒,并将构建的重组腺病毒接种蛋鸡研究A20在ALV-A感染后的作用;为了探索A20介导的ALV-A致瘤机制,我们对A20进行过表达和敲低,并对可能的信号通路进行验证,结果如下:1.ALV-A毒株HB2015012感染性克隆构建及病毒拯救提取ALV-A HB2015012株感染的DF-1细胞基因组DNA,根据HB2015012病毒基因组中自身携带限制性内切酶位点分为3段使用PCR扩增并将其分别克隆至载体p Topo-Blunt Simple,通过酶切、连接构确认细节建携带有HB2015012完整基因组的重组质粒Topo-HB2015012。将重组质粒转染至易感宿主细胞DF-1进行病毒拯救。测序结果表明重组质粒Topo-HB2015012无任何突变,感染性试验和IFA结果均表明成功拯救出病毒,并命名为rHB2015012。背景清晰的ALV-A毒株rHB2015012可为进一步研究ALV-A致瘤机制提供物质基础。2.rHB2015012生物学特性使用IFA对rHB2015012和HB2015012进行病毒滴度测定。等量等体积的病毒rHB2015012和HB201…