仙台病毒递送新型冠状病毒RBD蛋白鼻内免疫接种增强呼吸道黏膜和系统性免疫应答的初步研究

[摘要]目的 研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应寻找更多答的特征。方法 Cytoskeletal Signaling抑制剂利用同源重组技术构建SARS-CoV-2RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并用Westernblottinprotozoan infectionsg验证;将RBD-Fc融合蛋白表达质粒转染293-T细胞大量表达并使用亲和层析进行蛋白纯化;通过SeV递送RBD-Fc蛋白进行鼻内免疫接种,同时设置RBD-Fc组、SeV组、PBS组作为对照,各组分别在2周后加强免疫1次,3周后检测血清样本和肺泡灌洗液(BALF)中特异性抗体水平,并评价它们诱导免疫细胞增殖的差异。结果 RBD、Fc蛋白编码基因片段通过重叠PCR方法得到融合蛋白基因片段(RBD-Fc),成功构建pCAGGS-RBD-Fc真核表达质粒;Westernblotting结果显示RBD-Fc融合蛋白的表达条带符合预期大小,大量表达后经亲和层析获得一条单一的接近60kDa的条带,与预期大小一致,纯度高;与RBD-Fc组、SeV组、PBS组相比,SeV递送RBD-Fc蛋白通过鼻腔加强免疫小鼠后的血清样本和支气管BALF中均可检测到RBD特异性IgG,且BALF中RBD特异性IgA有升高趋势。结论SeV在递送SARS-CoV-2 RBD蛋白进行鼻内免疫接种方面能够诱导较高水平的黏膜免疫和系统性免疫,为呼吸道传染病的黏膜疫苗研究提供了初步的实验基础。