目的:以氧化低密度脂蛋白刺激的人主动脉血管平滑肌细胞medical model作为动脉粥样硬化的体外模型,通过高通量测序筛选出表达上调的差异lnc RNA,经q PCR验证后sh RNA慢病毒感染细胞来抑制相关lnc RNA的表达,同未干预HA-VSMC对比,检测人主动脉血管平滑肌细胞的增殖、迁移及胆固醇水平,为探索动脉粥样硬化的病因、治疗提供新的靶点及思路。方法:1.第一阶段,HA-VSMC随机分为两组:ox-LDL组和selleckchem PLX5622非ox-LDL组。前者予以100μg/ml的氧化低密度脂蛋白刺激24h,后者未予特殊处理。质检合格后,Trizol法提取总RNA,进行高通量测序,筛选符合标准的表达上调的差异lnc RNA。q PCR验证差异lnc RNA。2.第二阶段,HA-VSMC随机分为三组。sh RNA慢病毒感染72小时的正常人主动脉血管平滑肌细胞作为实验组,空载病毒感染为sh Ctrl组,正常HA-VSMC未予任何处理为对照组(CON组),通过显微镜下观察荧光及感染效率,使用q PCR检测3组目的基因表达量,验证实验组基因干扰的有效性。3.第三阶段,分为三组。第一组:正常人主动脉血管平滑肌细胞未予任何处理。第二组:仅加用100μg/ml氧化低密度脂蛋白刺激的正常HA-VSMC。第三组:加用100μg/ml氧化低密度脂蛋白的上述sh RNA慢病毒感染的成功细胞,分别为ox-LDL+sh BOLA3-AS1组、ox-LDL+sh POC1B-AS1组、ox-LDL+sh GRXCR1-4组。以第二组作对照组,CCK8法检测3组细胞增殖活力;transwell小室法检测3组细胞迁移能力,ELISA法检测细胞内胆固醇浓度。结果:1.经过ox-LDL处理过的人主动脉血管平肌细胞与正常该细胞相比,初步筛选和验证出三种显著差异表达上调的长链非编码RNA BOLA3-AS1、POC1B-AS1、以及GRXCR1-4。2.显示本阶段实验组的细胞感染效率达到80%以上,细胞形态正常,感染成功。q PCR检测本阶段实验组与对照组相比,目标lnc RNA的表达量均显著降低(P<0.001),差异有统计学意义。3.与对照组相比,ox-LDL+sh BOLA3-AS1组、ox-LDL+sh POC1B-AS1组、ox-LDL+sh GRXCR1-4组人主动脉血管平滑肌细胞的增殖活性显著降低(P<0.001),差异有统计学意义。ox-LDL+sh BOLA3-AS1组、ox-LDL+sh GRXCR1-41组、ox-LDL+sh POC1B-AS1组细胞的迁移数分别为52±10.07、58±5.57、43±8.62,对照组细胞迁移数为120±10.41,与对照组相比,慢病毒感染组细胞迁移数显著降低(P<0.01),差异有统计学意义。根据标准品对应的浓度和OD值得到回归直线方程y=0.4126x+0.0548(R~2=0.9943),与对照组相比,正常组胆固醇量明显降低(P<0.001),各慢病毒感染组胆固醇浓度均显著降低(P<0.001),差异有统计学意义。结论:1.高通量测序技术可以进行动脉粥样硬化lnc RNA的筛选。2.Lnc RNA可能参与调控动脉粥样硬化的进程。3.高表达的Lnc RNA(BOLA3-AS1、POC1B-AS1、GRXCR1-4)经验证后显示与动脉粥样硬化相关。4.Lnc RNA(BOLA3-AS1、PGefitinib IC50OC1B-AS1、GRXCR1-4)可能作为新的干预靶点,有助于动脉粥样硬化疾病的病因学研究及药物靶点治疗。