目的:桂枝茯苓丸是《金匮要略》中治疗妇人瘀阻不下的经典名方,现常用于治疗多种疾病。肝纤维化具有血瘀之病理因素,与桂枝茯苓丸证病机相符合。肝星状细胞的增殖及活化是肝纤维化形成的重要机制,本实验主要探究桂枝茯苓丸对肝星状细胞增殖及迁移的影响,并探讨桂枝茯苓丸是否通过靶向PTEN抑制PI3K-ElexacaftorAKT通路的激活,进而抑制肝星状细胞的增殖。研究方法:选择LX-2细胞(人肝星状细胞)为试验对象,CCK-8测定桂枝茯苓丸对LX-2细胞的IC50浓度。实验分为空白组、GFW组、PDGF-BB组、GFW+PDGF-BB组四组。细胞计数法测定各组LX-2细胞生长曲线;WB检测细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1和CDK4的表达,免疫荧光法检测增殖相关抗原Ki67的表达,探究桂枝茯苓丸对PDGF-BB诱导的LX-2细胞增殖的影响;细胞划痕试验和博伊登室迁移试验探究桂枝茯苓丸对PDGF-BB诱导的LX-2细胞迁移的影响;WB检测PI3K-p110β、AKT、p-AKT、GSK3β和β-catenin蛋白的表达,免疫荧光检测p-AKT和β-catenin蛋白的表达,探究桂枝茯苓丸对PDGF-BB诱导的LX-2细胞中PI3K-AKT通路的影响;WB检测PI3K抑制剂PTEN蛋白及慢病毒转染敲低或过表达PTEN后细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1和CDK4的表达,探究桂枝茯苓丸是否通过靶向PTEN介导PI3K-AKT通路的激活,进而影响PDGF-BB诱导的LX-2细胞增殖。研究结果:1.桂枝茯苓丸浓度为175μg/m L时可抑制50%的LX-2细胞活力;2.培养0h、12h、24h、36h、48h后各组之间细胞数量增长趋势结果如下:PDGF-BB组>PDGF-BB+GFW组>空白组>GFW组;3.桂枝茯苓丸可显著抑制PDGF-BB诱导的LX-2细胞中增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4和增殖相关抗原Ki67的表达(P<0.01);4.桂枝茯苓丸能显著增大PDGF-BB诱导的LX-2细胞划痕面积(P<0.01);5.桂枝茯苓丸能显著降低PDGF-BB诱导的LX-2细胞迁移数量(P<0.01);6.桂枝茯苓丸能显著减少PDGF-BB诱导的LX-2细胞中PI3K-p110β、p-AKT和β-cateniTaurine核磁n蛋白的表达(P<0.01),显著增高GSK3β蛋白的表达(P<0.thoracic oncology01);7.桂枝茯苓丸能显著增加PDGF-BB诱导的LX-2细胞中PTEN蛋白的表达(P<0.01);8.敲低PTEN后桂枝茯苓丸对PDGF-BB诱导的LX-2细胞中增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4的抑制作用显著减低(P<0.01),过表达PTEN后桂枝茯苓丸对PDGF-BB诱导的LX-2细胞中增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4的抑制作用显著增强(P<0.01)。研究结论:1.桂枝茯苓丸可显著抑制PDGF-BB诱导的LX-2细胞增殖;2.桂枝茯苓丸可显著抑制PDGF-BB诱导的LX-2细胞迁移;3.桂枝茯苓丸可抑制PI3K-AKT通路的激活;4.桂枝茯苓丸可通过靶向PTEN抑制PI3K-AKT通路的激活,进而抑制PDGF-BB诱导的LX-2细胞增殖。