疥螨病是一种分布广泛的体外寄生虫病,其地理分布和寄生的宿主种类数量均呈持续增长趋势,该病影响经济动物生长发育,严重时会导致动物死亡。同时,疥螨病也是重要的人兽共患寄生虫病,并于2017年被列入易被忽视的热带病名单,每年全球约有3亿人受到疥螨病的影响。精氨酸激酶参与寄生虫-宿主相互作用,引起宿主免疫应答,被认为是促炎细胞因子的免疫调节器和效应器。目前,疥螨致病机制尚不完全明确,疥螨精氨酸激酶在疥螨—宿主相互作用中的功能尚缺乏研究。本研究对疥螨精氨酸激酶家族中两个不同的精氨酸激酶进行了生物信息学分析和原核表达;分析了其反应原性、酶活性以及在疥螨虫体和宿主皮肤中的定位;使用4个不同浓度梯度的两个重组蛋白分别刺激宿主的外周血单个核细胞(PBMCs),观察重组蛋白对细胞增殖、凋亡、迁移的影响,并检测凋亡相关因子和NF-κB的m RNA转录水平以及Th1/Th2、Treg/Th17相关细胞因子的分泌水平。主要的研究结果如下:一、疥螨精氨酸激酶Ss AK-1、Ss AK-2原核表达及蛋白特性分析成功克隆获得Ss AK-1、Ss AK-2基因,其均具有典型的ADP结合位点、精氨酸结合位点及底物特异性环;通过原核表达成功获得r Ss AK-1、r Ss AK-2,免疫印迹和酶活性测定发现r Ss AKselleckchem Cobimetinib-1、r Sselleck PD0325901s AK-2均具有良好的反应原性和一定的催化活性;免疫荧光定位结果表明,Ss AK-1广泛分布于疥螨全身,尤其是胃部和外骨骼区域,Ss AK-2广泛分布于疥螨口器、胃部和外骨骼区域,天然Ss AK-1蛋白和Ss AK-2蛋白均能被分泌或排泄至疥螨寄生部位周围的水池(寄生于皮肤上的疥螨在其身体周围分泌的透明液体)和皮肤表皮层中,可能参与到宿主-疥螨相互作用中,调节宿主免疫功能。二、疥螨精氨酸激酶r Ss AK-1、r Ss AK-2对宿主PBMCs增殖、凋亡、迁移的影响本研究对健康新西兰大白兔进行耳缘静脉采血以分离PBMCs,分别使用10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的r Ss AK-1和r Ss AK-2刺激细胞,使用CCK-8法检测r Ss AK-1和r Ss AK-2对细胞增殖的影响,利用流式细胞术和q RT-PCR检测重组蛋白对细胞凋亡以及凋亡因子(Fas、Bax、Bcl-2、Bcl-xl)和NF-κB(p65)m RNA转录水平的影响,使用Traswell小室检测r Ss AK-1和r Ss AK-2对细胞迁移的影响。结果显示,r Ss AK-1、r Ss AK-2显Burn wound infection著促进PBMCs增殖、抑制细胞凋亡、诱导细胞迁移,并呈浓度依赖性。其中,r Ss AK-1促增殖和凋亡的效果比r Ss AK-2更明显,而r Ss AK-2促迁移的效果比r Ss AK-1更明显。r Ss AK-1、r Ss AK-2均提高抗凋亡因子(Bcl-2、Bcl-xl)及NF-κB(P65)的转录水平,并呈浓度依赖性。三、疥螨精氨酸激酶r Ss AK-1、r Ss AK-2对宿主PBMCs Th1/Th2、Treg/Th17平衡的影响本研究分别使用10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的r Ss AK-1和r Ss AK-2刺激细胞,采用ELISA检测PBMCs中Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)、Th2细胞因子(IL-4)、Treg细胞因子(IL-10、TGF-β1)和Th17细胞因子(IL-17)分泌的变化。结果显示,随着r Ss AK-1、r Ss AK-2浓度升高,Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)分泌减少,Th2型细胞因子(IL-4)分泌增多,IL-10分泌减少,IL-17分泌增加,这表明Th1/Th2平衡向Th2方向移动,改变Th17/Treg平衡。