淫羊藿素通过抑制TGF-β/Smad2信号通路发挥抗肝纤维化作用机制研究

目的:研究淫羊藿素对转化生长因子β_(1) (TGF-β_(1))诱导活化人肝星状细胞(HSC-LX-2)和大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的影响及相关作用机制.方法:体外培养HSC-LX-2和HSC-T6细胞,分为溶剂对照组、单给淫羊藿素(1 μmol/L)组、TGF-β_(1)(10 ng/mL)诱导组、TGF-β_(1)+淫羊藿素低、中、高浓MG132试剂度(0.25、0.5、1 μmol/L)组.蛋白免疫印迹法检测I和II型TGF-β受体(TβRI和TβRII),磷酸化Smad2(p-Smad2)及其总蛋白(t-Smad2),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),纤维连接蛋白(fibronectin),Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)蛋白表达水平;细胞免疫荧光染色法检Medial collateral ligament测HSC-LX-2和HSC-T6细胞p-Smad2在细胞内分布情况.结果:蛋白免疫印迹法结果显示,与Smoothened Agonist试剂溶剂对照组比较,TGF-β_(1)可诱导肝星状细胞 TβRI/II、p-Smad2、α-SMA、fibronectin、collagen Ⅰ 蛋白水平明显上调(P<0.05);与TGF-β_(1)刺激组比较,淫羊藿素不同浓度(0.25、0.5、1 μmol/L)能显著抑制TGF-β_(1)活化肝星状细胞中TβRI、p-Smad2、α-SMA、fibronectin和collagen I 的蛋白表达,且呈浓度依赖关系;细胞免疫荧光结果显示,与TGF-β_(1)刺激组相比,淫羊藿素(1 μmol/L)处理能明显抑制TGF-β_(1)诱导的p-Smad2入核.结论:淫羊藿素抑制了TGF-β_(1)诱导的肝星状细胞活化及细胞外基质成分的合成,从而发挥体外抗肝纤维化作用,该作用可能与其抑制TGF-β/Smad2通路有关