目的:本研究通过转录组测序技术(transcriptome sequencing technology,RNA-Seq)分析小鼠成釉细胞LS8转染Eda1质粒后Eda信号通路下游关键分子差异表达,探讨突变Eda1通过调节FBJ鼠科骨肉瘤病毒癌基因同源物B(FBJ osteosarcoma oncogene B,Fosb)影响牙源性上皮细胞增殖、迁移等生物学行为导致先天缺牙的致病机制。方法:1.分组:本实验分为野生型对照组、空载体空白对照组和4个突变实验组:野生型Eda1组(Eda1-Wt)、单纯突变型Eda1组(NSTA-A259E)、单纯突变型Eda1组(NSTA-S374R)、综合征突变型Eda1组(STA-H252L)、综合征突变型组Eda1(STA-A349V)和空载体对照组(p CMV-CEGFP,NC),并分别将6组质粒瞬时转染LS8细胞。2.细胞转染突变Eda1质粒,转录组表达量变化的研究:利用RNASeq筛查野生型、单纯型、综合征型Eda1在LS8细胞中瞬时转染后的基因差异表达,寻找Eda1下游差异表达显著的相关信号分子。3.利用Q-PCR(实时荧光PF-03084014临床试验定量聚合酶链反应)检测差异表达基因RNA的表达水平以及利用Western blot(蛋白质印迹法)检测差异表达基因的蛋白质表达水平。结果:1.RNA-Seq结果:1.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)比较,突变组Fos、Fosb、Jun、Junb基因差异表达具有显著性。1.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)比较,突变组的细胞增殖、细胞迁移、细胞分化等生物学过程显著下调。1.3与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,突变组TNF、MAPK、Toll样受体、破骨细胞分化、WNT、细胞凋亡等信号通路显著下调。1.4利用String数据库对上述差异基因Impending pathological fractures构建PPI网络,得到9个hub基因:Jun、Fos、Egr1、Dusp1、Fosb、Nr4A1、Btg2、Ier2、Junb。2.Q-PCR结果:2.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,综合征型突变组、单纯型突变组Fos m RNA未见显著性差异。2.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA25www.selleck.cn/products/Gefitinib9E)Jun m RNA表达下降27.4%(p<0.05),单纯型突变Eda1组(NSTAS374R)Jun m RNA表达下降50.4%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Jun m RNA表达下降39.6%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Jun m RNA表达下降53.1%(p<0.01)。2.3与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA259E)Fosb m RNA表达下降34.7%(p<0.01),单纯型突变组Eda1(NSTA-S374R)Fosb m RNA表达下降43.7%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Fosb m RNA表达下降62%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Fosb m RNA表达下降78.7%(p<0.01)。2.4与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变组和综合征型突变Eda1组Junb m RNA表达未见显著性差异。3.Western blot结果:3.1与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,单纯型突变Eda1组(NSTAA259E)Fosb蛋白表达量下降33.8%(p<0.05),单纯型突变Eda1组(NSTA-S374R)Fosb蛋白表达量下降44%(p<0.05),综合征型突变Eda1组(STA-H252L)Fosb蛋白表达量下降50.2%(p<0.01),综合征型突变Eda1组(STA-A349V)Fosb蛋白表达量下降39.8%(p<0.05)。3.2与野生型Eda1组(Eda1-Wt)相比,综合征型、单纯型突变组Jun蛋白未见显著性差异。结论:1.Eda信号通路下游关键表达差异相关分子为Fosb、Fos、Jun、Junb。2.突变Eda调控Eda信号通路下游信号分子Fosb m RNA和蛋白的表达,从而进一步调控牙源性细胞的增殖、迁移等生物学行为。