嗜盐古菌胞外蛋白酶通常具有嗜盐碱、耐高温、耐有机溶剂等特征,在工业上具有巨大应用潜力。本研究以低盐适应性嗜盐古菌Halococcus salifodinae的胞外蛋白酶Hly A为研究对象,探究Hly A在不同温度、盐度、p H下的稳定性及降解产物,比较Hly A和C端延伸区(C-terminal extension,CTE)缺失突变体Hly A△CTE的酶学性质,初步研究具有优良催化性能的Hly A△CTE作为外加酶对鱼露发酵的影响。Hly A在高温或低盐条件下自加工降解成稳定的产物。采用Escherichia coli异源表达、镍柱亲和层析、体外复性及凝胶过滤层析,获得了纯度较高的Hly A。Hly A在低温、高盐、p H 6.0-10.0下均具有良好的稳定性,但是,在40℃以上的高温或2 M Na Cl以下的低盐环境中会自加工降解成稳定的产物。蛋白质C端测序结果表明降解产物是CTE缺失、仅含催化结构域的Hly A△CTE。纯化的重组Hly A△CTE前体未能复性获得成熟酶,表明CTE在自催化成熟过程中发挥着重要作用。自剪切位点(P1和P1’)定点突变Hly AE421A和Hly AE421A+T422A对重组菌株Haloferax volcanii胞外上清液酶活没有显著影响,但是,成熟酶仍然会发生自剪切。Hly A△CTE是高稳定性、高活性的广适性蛋白酶。Hly A的降解产物Hly A△CTE在广泛的温度(-20-60℃)、盐度(0.5-4 M Na Cl)和p H(6.0-10.0)范围内均具有良好的稳定性。Hly A的最适反应条件为40-45℃、p H 8.5,Hly A△CTE的最适反应条件为60℃、p H 7.0。Hly A和Hly A△CTE在低盐条件(0.5-1.5 M Na Cl)下活性较高。与Hly A相比,Hly A△CTE的温度耐受性更好,在高温下具有更高的活性。K~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)和SrGefitinib-based PROTAC 3作用~(2+)促进Hly A和Hly A△CTE的酶活。Hly A和Hly A△CTE能够水解多种蛋白质底物,对DMSO、吐温20有较好的耐受性。Hly A△CTE最大反应速率V_(max)是Hly A的2.1JNJ-42756493体外倍。Hly A△CTE能够促进鱼蛋白水解,提高鱼露游离氨基酸含量。模拟鱼露发酵过程中,外加Hly A△CTE的鱼露氨基酸态氮含量、TCA-多肽含量和蛋白酶活性均高于外加碱性蛋白酶、外加中性蛋白酶和未加酶的鱼露。外加Hly A△CTE的鱼露人体必需氨基酸和鲜味氨基酸含量最高,其游离氨基酸总量分别是外加碱性蛋白酶、外加中性蛋白酶及未加酶鱼露的1.4倍、1.9倍和3.0倍。综上,Hly A在高温或低盐环境中会自加工降解,降解产物Hly Aantibiotic residue removal△CTE具有优良的酶学性质,能够促进鱼露发酵中蛋白质的水解。本研究将为嗜盐古菌胞外蛋白酶应用于高盐发酵食品工业提供重要的理论依据。