背景结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界第三大恶性肿瘤,目前主要治疗方式为手术结合放化疗,随着药物耐受和复发率的升高,结直肠癌患者的生存期没有明显的改善,因此,寻找新的有效的治疗靶点和方案对于改善患者预后具有重要意义。长链非编码RNAs是一类长度超过200个核苷酸且不能翻译为蛋白质的非编码RNA,主要通过表观遗传调控、转录调控及转录后调控参与多种恶性肿瘤的发生发展。本课题前期研究发现,长链非编码RNA LWTA参与了结直肠癌细胞的增殖和迁移,但作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨长链非编码RNA LWTA在结直肠癌中的作用机制,为寻找结直肠癌治疗新的潜在靶点提供理论依据。目的筛选与结直肠癌演进相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA);明确lncRNA LWTA调控结直肠癌发生发展的分子机制,为临床靶向治疗结直肠癌,改善患者预后提供新Fulvestrant细胞培养的思路。方法1.收集临床结直肠癌和癌旁正常组织,测序分析寻找在结直肠癌中异常表达的lncRNA。2.利用si RNA对筛选出的差异大的3个lncRNA检测对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响。3.利用荧光原位杂交(FISH)方法检测筛选出lncRNA在细胞内的定位。4.RNA pull-down和质谱分析明确lncRNA翻译能力和结合蛋白。5.免疫hepatitis-B virus组化检测lncRNA编码多肽在结直肠癌中的表达及与患者预后之间的关系。6.CCK8和平板克隆实验检测编码多肽对细胞增殖的影响。7.Transwell迁移实验检测编码多肽对细胞迁移的影响。8.编码多肽细胞内结合蛋白的预测和免疫共沉淀(Co-IP)对预测进行验证。结果1.筛选出485个差异lncRNAs,其中255个lncRNAs在结直肠癌组织中表达下调,230个lncRNAs表达上调。2.将3个差异大的lncRNA进行si RNA干扰后,只有lncRNA NONHSAT184602.1能同时引起结直肠癌细胞增殖和迁移相关基因的变化。3.体外细胞培养和结直肠癌组织中NONHSAT184602.1主要分布在细胞浆。4.NONHSAT184602.1含有7个开放阅读框(ORF1-7),其中ORF3表达最强,并且可以编码多肽,我们将NONHSAT184602.1命名为具有翻译能力的长链非编码RNA(lncRNA with translation abilit,LWTA)。5.ORF3编码多肽在结直肠癌组织中显著高表达且与病人的不良预后相关。6.CCK8增殖实验和平板克隆实验显示,高表达ORF3可以明显增加细胞的增殖速率。7.Transwell迁移实验显示,高表达ORF3可以明显的增加结直肠癌细胞的迁移能力。8.数据库分析和Co-IP验证结果显示,ORF3编码多肽可以与RAB11A和14-3-3γ蛋白形成复合体,我们将ORF3编码多肽命名为RAB11A与14-3-3γ支架蛋白(scaffolding proteins of RAB11A and 14-3-3γ,SPRY)。结论lncRNA NONHSAT184602.1(LWTA)在结直肠癌组织中高表达,促进细胞的增殖与迁移,LWselleckchem Imidazole ketone erastinTA主要通过编码多肽SPRY,结合RAB11A与14-3-3γ蛋白发挥其调控结直肠癌细胞生物学功能的作用。