红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)作为我国北方重要海水经济动物,GDC-0068小鼠近年来其盾纤毛虫病患问题愈发严重,本研究开展了红鳍东方鲀IgM多克隆抗体的制备、盾纤毛虫免疫原性抗原的筛选与鉴定以及红鳍东方鲀抗盾纤毛虫疫苗的研制工作,主要研究结果如下:1.对红鳍东方鲀IgM重链恒定区CH1-CH4基因进行克隆,PCR扩增得到1326bp特异性条带;构建了BL21-pET28a-IgM原核表达体系,获得约62k Da的重组蛋白,可溶性分析结果表明,BL21-pET28a-IgM主要以包涵体的形式表达;将重组蛋clinical and genetic heterogeneity白免疫BALB/c小鼠,成功制备红鳍东方鲀IgM特异性多克隆抗体,Western blot结果显示,该抗体可以特异性识别天然红鳍东方鲀血清中的IgM蛋白。2.以实验室保存虫株——水滴伪康纤虫(Pseudocohnilembus persalinus)为抗原,成功制备了水滴伪康纤虫多克隆抗体,DOT-ELISA结果显示,抗体效价最高可达1:40000;对水滴伪康纤虫全虫蛋白进行SDS-PAGE与特异性抗体的Western blot分析,结果表明其中35k Da处蛋白免疫反应最为强烈;将35k Da处蛋白进行分离纯化与质谱鉴定,质谱鉴定结果为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)。3.对当前大连地区红鳍东方鲀多发盾纤毛虫病原进行采样分离与鉴定,通过形态学观察及18S rDNA测序鉴定其为海洋尾丝虫(Uronema marinum);将分离得到的病原盾纤毛虫体外富集培养并制备全虫疫苗,并使用CpG ODN作为免疫增强剂制备盾纤毛虫与CpG联合疫苗免疫红鳍东方鲀,结果表明,注射海洋尾丝虫全虫疫苗组较对照组红鳍东方鲀7天内感染盾纤毛虫数量减少约69%,14天内累计死亡量数减少50%,注射全虫疫苗可有效预防盾纤毛虫感染,注射联合疫苗在抗盾纤毛虫感染上的免疫效LEE011分子量果则不明显;ELISA检测各组红鳍东方鲀IgM表达量结果显示,实验组血清中的IgM表达量均在第14天达到峰值,其中注射全虫疫苗组血清中IgM表达量最高,而对照组血清IgM总体变化不大,表明疫苗注射可以有效刺激红鳍东方鲀产生免疫反应。本研究为基于红鳍东方鲀IgM的免疫学实验提供了工具,为盾纤毛虫免疫原性抗原分析提供了参考,为红鳍东方鲀盾纤毛虫病的免疫学防治提供了思路。