本研究主要由三部分组成:1.基于炎症因子和肠道菌群变化探讨牛至油对溃疡性结肠炎小鼠的作用研究;2.优化牛至油-壳聚糖载药微球的处方及制备工艺研究;3.优化牛至油微球-水凝胶双载药结肠靶向给药系统的处方及制备工艺研究。1.基于炎症因子和肠道菌群变化探讨牛至油对溃疡性结肠炎小鼠的作用研究我们前期预实验结果显示,牛至油对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的炎症反应有一定的抑制作用,本研究为进一步探讨牛至油对葡聚硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的改善作用,及其可能的作用机制进行了以下实验。首先进行分组,将105只BALB/c小鼠平均分成正常组、模型组、美沙拉嗪组(阳性药组)、牛至油高剂量组、牛至油中剂量组、牛至油低剂量组及大豆油组(溶剂组)共7组,每组15只,在造模给药的同时灌胃给予牛至油,持续7天。第8天,处死小鼠取结肠、血清及收集粪便,进行HE染色观察其病理情况,ELISA法测定血清炎症因子浓度,16Sr RNA高通量测序法检测粪便中肠道菌群变化。结果表明:与正常组相比,模型组小鼠疾病活动指数(DAI)评分和结肠组织病理评分明显升高(P<AZD67380.01);血清中促炎因子IL-1β和TNF-α浓度上升,抑炎因子IL-10浓度下降,而其余各组相比于模型组具有一定程度的改善,其中牛至油高剂量组效果最佳;肠道菌群分析结果表明,与正常组相比,模型组小鼠肠道中乳酸菌属(Lactobacillus)等丰度有所降低,而厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线杆菌门(Actinobacteriota)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)等丰度均有所上升,各剂量组与模型组相比,各菌属丰度均有不同程度的变化。以上结果表明,牛至油对DSS诱导的UC小鼠确有一定的治疗作用,其作用机制可能与牛至油抑制肠道菌群中葡萄球菌属、肠球菌属、变形菌门等有害菌的定植,同时上调有益菌乳酸菌属的丰度,保护肠黏膜屏障功能有关。2.优化牛至油-壳聚糖载药微球的处方及制备工艺研究牛至油可通过调节溃疡性结肠炎小鼠的肠道菌群及炎症因子平衡改善其炎症反应,具有成为中药治疗溃疡性结肠炎新选择的潜力。本研究考察乳化交联法制备牛至油-壳聚糖载药微球的处方及制备工艺,并通过单因素和Box-Behnken响应面实验确定其最佳制备工艺条件。对于载药微球的评分指标参数主要包括以下几点:(1)采用高效液相色谱法确定载药微球中牛至油的包封率和载药量;(2)采用马尔文激光粒ABT-263体内实验剂量度仪检测微球的中位粒径(ID50);(3)并通过变异系数-AHP层次分析综合加权法确定其综合评分(OD)。此外,对于最佳工艺制备的载药微球表征及稳定性采用扫描电镜(SEM)观察其表面形态;采用红外光谱法(FT-IR)分析壳聚糖与交联剂的交联情况,采用加速实验考察载药微球的稳定性。结果表明牛至油-壳聚糖载药微球的最佳制备工艺为:牛至油/壳聚糖用量比为2:1,复乳乳化转速为200 r/min,初乳中乳化剂用量为4%,固化剂用量(25%戊二醛)1 m L,最佳工艺制备的微球平均包封率为45.33%±1.32%,平均载药量为30.59%±2.45%,中位粒径(ID50)为52.596μm±0.0231。本研究优化的牛至油-壳聚糖载药微球的制备方法稳定可靠,制备的微球粒径较小、圆整度良好,可较长期保存,且改善了牛至油的不良genitourinary medicine嗅味及刺激性,可作为一种良好的制剂中间体加以利用。3.优化牛至油微球-水凝胶双载药结肠靶向给药系统的处方及制备工艺研究本研究在前两章的基础上,为将牛至油-壳聚糖载药微球顺利送达结肠部位,设计了以壳聚糖、海藻酸钠为载体材料的结肠靶向水凝胶释药系统,通过单因素和响应面实验优化其处方及制备工艺,并采用变异系数法-AHP层次分析综合加权法确定各因素水平条件下的综合评分(OD值),通过对比各因素水平下的OD值,确定各因素最佳工艺水平。得出最佳工艺条件如下:壳聚糖/海藻酸钠用量比=1/8,壳聚糖合并海藻酸钠用量=1.4 g,载药微球的用量=0.3 g,按照最佳工艺制备3批水凝胶,在此条件下制得的载药水凝胶综合溶胀率为1048.33%±2.12%、包封率为96.34%±1.02%,载药量为12.52%±0.77%,与预测结果相似,表明优化的实验条件适用于载药水凝胶的制备且稳定性良好。释放度实验结果显示,最佳工艺条件下制备的水凝胶在人工胃液中48 h内不释放,在人工结肠液中,10 h时达到了最大释放度89.31%±0.02%>70%,达到了中国药典中对于肠溶制剂的溶出质量要求,10 h后溶出度有所降低,这可能是与牛至油的挥发性相关。扫描电镜结果显示,空白水凝胶内形成了大量的孔隙,这是三维网状结构形成的标志,载药水凝胶内部镶嵌的微球清晰可见,表明微球已被包裹于凝胶内部,双载药体系形成。