【目的】探讨沉默腺苷酸激酶4后对肝内胆管细胞癌细胞增殖、迁移及EMT的影响和分子机制变化。【方法】使用免疫组织化学法明确正常胆管组织和肝内胆管癌组织中AK4的表达差异。选择3株肝内胆管癌细胞:HCCC-9810、RBE、HUCCT1,用实时定量聚合酶链反应和免疫印迹法筛选出AK4高表达细胞株用于本实验。用免疫荧光技术检测AK4在细胞的表达。用小干扰RNA技术沉默细胞株中AK4的表达,用荧光显微镜和WB技术验证转染效寻找更多率,同时筛选出沉默效果最好的si RNA。用划痕实验检测si RNA沉默AK4后癌细胞迁移能力的变化。用Ed U法检测si RNA沉默AK4后癌细胞增殖能力的变化;WB检测沉默AK4后上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、Fibronectin、Snail 2及Vimentin)的变化;WB检测沉默AK4后Wnt/β-Catenin通路蛋白(β-Catenin、Cycli获悉更多n D1、MMP-2、c-Myc和Survivin)的变化。本实验数据使用IBM SPSS Statistics 26、STATA 14、Graph Pad Prism 8.0软件进行统计分析。【结果】免疫组织化学法显示AK4在肝内胆管癌组织中显著高表达。实时定量聚合酶链反应和免疫印迹法结果显示在HCCC-9810、RBE、HUCCT1这3株肝内胆管癌细胞中,HUCCT1细胞的AK4表达量最高,因此用于后续实验。免疫荧光实验显示AK4在主要分布于细胞质中。荧光显微镜和WB显示si RNA转染效率高,WBOral relative bioavailability显示si RNA-AK4-3的沉默效果最好,因此用于本实验后续步骤。划痕实验显示,在si RNA-AK4-3组中,HUCCT1的迁移能力明显减弱(P<0.05)。Ed U结果显示,在si RNA-AK4-3组中,HUCCT1的增殖能力明显减弱(P<0.05)。EMT实验显示,在si RNA-AK4-3组中,HUCCT1细胞的上皮样标志物E-cadherin表达量明显升高,而间质样标志物Fibronectin、Snail 2、Vimentin明显降低(P<0.05)。WB检测Wnt/β-Catenin通路显示:信号通路关键蛋白β-Catenin在si RNA-AK4-3组中被明显沉默,通路下游蛋白Cyclin D1、MMP-2和c-Myc也在沉默AK4后出现了表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),而Survivin蛋白在NC组和实验组无差异(P>0.05)。【结论】AK4高表达可能是促进肝内胆管细胞癌发生增殖、转移及EMT的因素之一。AK4可能通过Wnt/β-Catenin信号通路来促进肝内胆管癌细胞的增殖、迁移和EMT等生物学行为发生发展。