哮喘是一种常见的由基因-环境相互作用引起的慢性气道炎症性疾病,这些患者中半数以上为过敏性哮喘表型,该型的特征是辅助型T细胞(T helper,Th)2介导的嗜酸性粒细胞气道炎症。茜草是中国药典中的传统的中药,具有凉血止血、祛瘀通经的功效,临床上用于治疗子宫出血、过敏性紫瘢、类风湿性关节炎等疾病。此外,茜草还能用于支气管炎、耐多药Medical expenditure肺结核等肺的炎症性疾病的治疗。大叶茜草素作为茜草中的主要活性成分,现代药理学研究显示,其具有抗炎、抗肿瘤和抗血小板聚集等作用。然而,大叶茜草素是否能减轻肺的非感染性疾病,如过敏性哮喘气道炎症,尚没有相关报道。因此,我们利用虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘模型,研究大叶茜草素对过敏性哮喘气道炎症的作用及机制。目的:明确大叶茜草素对过敏性哮喘小鼠气道炎症作用及机制。方法:1、建立虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠模型分析大叶茜草素的作用。将C57BL/6小鼠随机分为5组,即对照组、模型组、地塞米松阳性对照组(1 mg/kg)、大叶茜草素(5Staurosporine溶解度 mg/kg和10 mg/kg)给药组。模型组和大叶茜草素给药组小鼠于第0、7、14天腹腔注射含铝佐剂的虾原肌球蛋白,于第21天通过支气管给予虾原肌球蛋白,第22-25天通过滴鼻激发诱导过敏性哮喘。在激发前两天,即第19天,阳性对照组和大叶茜草素给药组小鼠分别腹腔注射地塞米松和大叶茜草素,每天1次,连续给药7天,对照组给予等体积的生理盐水。末次激发24h后,麻醉后处死小鼠,取肺组织检测肺重/体重比值,采用HE染色观察小鼠肺组织形态学变化,天狼星红染色观察小鼠嗜酸性粒细胞浸润情况,分光光度法检测小鼠肺组织中EPO的活性;PAS染色观察小鼠气道上皮细胞黏液分泌状态;ELISA法检测小鼠肺组织和脾细胞中IL-4、IL-5的含量;免疫组织化学法检测小鼠肺组织和肺泡灌洗液中的巨噬细胞Arg-1的表达;qRT-PCR法检测小鼠肺组织中Eotaxin、Ccl-17、Muc5ac、IL-4、IL-5、IL-13、Arg-1、Ym-1 和 Fizz-1 的 mRNA 水平。2、利用IL-4诱导的M2巨噬细胞模型和虾原肌球蛋白诱导的脾淋巴细胞模型分析大叶茜草素的作用机制。运用网络药理学、分子对接和蛋白配体相互作用分析工具对大叶茜草素的核心靶点进行预测。在ILRepSox试剂-4诱导M2巨噬细胞极化模型中,采用qRT-PCR法检测巨噬细胞中Arg-1的mRNA 水平,Western blot法检测巨噬…