目的:本研究通过IL-4诱导U937细胞构建M2型巨噬细胞及建立哮喘小鼠模型,观察平喘颗粒对CFD、M2型巨噬细胞、自噬相关分子以及哮喘小鼠气道重塑的影响,探讨平喘颗粒对CFD介导的自噬-巨噬细胞M2型极化的调控机制与改善气道重塑机制in vivo infection。方法:实验一:采用LV3 CFD(基因干扰慢病毒)转染野生型239T细胞,用逐孔稀释法对慢病毒进行滴度测定并构建CFD-sh RNA。采用PMA诱导U937细NSC 119875 IC50胞分化为巨噬细胞,将巨噬细胞分为4组,分别为空白组、模型组、平喘颗粒组、CFD-sh RNA组。空白组正常培养,模型组与平喘颗粒组均用IL-4诱导构建M2型巨噬细胞模型,平喘颗粒组及CFD-sh RNA组则分别给予平喘颗粒含药血清和LV3-CFD(基因干扰慢病毒)溶液进行培养。干预72小时后,用Western blot法检测各组CFD蛋白及m RNA水平;加入第5组(CFD-sh RNA+CFD组),其余4组巨噬细胞提取及培养、细胞分组和干预方法同前,第5组(CFD-sh RNA+CFD组)与CFD-sh RNA组干预方法相同,并额外加入CFD重组蛋白进行干预。各组细胞干预72小时后,用Western blot、RT-q PCR以及流式细胞术分别检测各组Arg-1、FIZZ1、YM1蛋白和m RNA的表达水平及CD206阳性细胞百分比;用Western blot检测各组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、p62蛋白以及FB/C3b/C5b信号通路确认细节中相关蛋白的表达水平;巨噬细胞提取及培养方法同实验一,分为4组,分别为模型组、平喘颗粒组、雷帕霉素组、平喘颗粒+雷帕霉素组。4组均用IL-4诱导构建M2型巨噬细胞模型,模型组正常培养,平喘颗粒组及雷帕霉素组分别给予平喘颗粒含药血清和雷帕霉素(自噬激动剂)干预。平喘颗粒+雷帕霉素组则用平喘颗粒含药血清和雷帕霉素(自噬激动剂)共同干预。用Western blot及RT-q PCR检测各组CFD、Arg-1、FIZZ1、YM1的表达水平及CD206阳性细胞百分比;随后将除模型组以外其余3组的雷帕霉素(自噬激动剂)更换为3-MA(自噬抑制剂),并用Western blot及RT-q PCR检测各组CFD、Arg-1、FIZZ1、YM1的表达水平及CD206阳性细胞百分比;实验二:50只C57BL/6小鼠被随机分为5组,分别为空白组、模型组、平喘颗粒组、CFD-sh RNA组和平喘颗粒+C…