健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的调控作用研究

目的:研究健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将50只大鼠随机分为正常组和健脾消癌方含药血清组,每组25只,健脾消癌方含药血清组以健脾消癌方水煎液灌胃,正常组大鼠每日以等量蒸馏水灌胃,1次/d,连续7 d后获取含药血清和不含药血清。将对数生长期的HCT116细胞分为JPXAF组、WY组,JPXAF组予20%健脾消癌方含药血清干预,WY组以20%不含药血清干预,采用超速离心法提取外泌体,JPXAF组、WY组提取的外泌体分别命名为JPXAF-Exo、WY-Exo。将THP-1巨噬细胞分为对照组和外泌体组,对照组进行常规培养,外泌体组予HCT116细胞外泌体干预。采用反转录酶-聚合酶链反应(RTPCR)检测细胞MMP2 mRNA、MMP9mRNA、TNF-α mRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量。将THP-1巨噬细胞随机分为Control组metal biosensor、WY-Exo组、JPXAF-Exo组。Control组常规培养,WY-Exo组、JPXAF-Exo组分别予WY-Exo、JPXAF-Exo干预。采用RT-PCR法检测巨噬细胞中MMP2 mRNA、MMP9 mRNA、TNF-αmRStaurosporineNA、PDL1 mRNA、TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞TGF-Liraglutideβ RⅡ、Smad2/3蛋白的表达水平及Smad2/3蛋白的磷酸化水平。结果:外泌体组巨噬细胞中PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.01);外泌体组巨噬细胞中MMP2 mRNA、MMP9 mRNA、TNF-α mRNA相对表达量与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);JPXAF-Exo组巨噬细胞MMP9 mRNA相对表达量低于Control组、WY-Exo组(P<0.05);WY-Exo组、JPXAF-Exo组巨噬细胞PD-L1 mRNA的表达明显高于Control组(P<0.01);WY-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量明显高于Control组(P<0.01);JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量显著低于Control组、WY-Exo组(P<0.05或P<0.01)。JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-β RⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达均低于WY-Exo组...