人源SOD1及其突变体的表达纯化及酶学性质

分析人源SOD1(hSOD1)、牦牛SOD1序列，定点突变得到hSOD1突变体Mt1SOD1(E25G、P29T、E101V、C112S)和Mt2SOD1(I18T、N20H、K31V、C112S),全合成经密码子优化的hSOD1、Mt1SOD1、Mt2SOD1、牦牛SOD1序列后，将其重组克隆到表达载体pET-28a(+)中，转化大肠杆菌selleckchem DolutegravirBL21(DE3)获得重组菌。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导，在含800μmol/L Cu~(2+)和20μmol/L Zn~(2+)的LB培养基中，25℃、180férfieredetű meddőség r/min诱导培养16 h, 4种SOD1均以可溶性形式高效表达，镍亲和层析可有效纯化重组SOD1。100 mL LB摇瓶培养获得的hSOD1活性为71 094 U/mg,产率为4.57 mg。Mt1SOD1活性为128 506 U/mg,产率为3.13 mg。Mt2SOD1活性为58 700.1 U/mg,产率为5.47 mg。牦牛SOD1活性为42 969.5 U/mg,C59细胞培养产率为6.81 mg。对hSOD1、Mt1SOD1的酶学性质研究表明，在25℃～55℃,酶活力基本保持不变，75℃保温30 min, hSOD1相对酶活力保持在50%左右，Mt1SOD1保持30%酶活性。在pH 3.6～10.4条件下放置30 min,两种SOD1均能保持70%以上的酶活力。研究通过定点突变获得高活性高稳定性的hSOD1和Mt1SOD1,为SOD1在医疗、保健、化妆品等领域的应用奠定基础。