akt receptor

慢性疾病是指不构成传染、具有长期积累形成疾病形态损害的疾病的总称。常见的慢性病主要有肿瘤、糖尿病、关节炎、皮肤病、肥胖、心脑血管疾病、慢性呼吸系统疾病与其他慢性系统性疾病或其他慢性脏器病等。慢性疾病一般病Soil microbiology程长、病情迁延不愈,病因复杂,难以一次性治愈。在全球范围内,慢性疾病患者的患病比例逐年增长,造成极大的生命危害和经济损失。目前常规口服给药和注射给药均存在一定的限制因素,不能满足日常广泛的慢性疾病治疗的需求。因此,在本研究中,我们采用纳米技术,将模型药物制备成为适合以皮肤交付为主的经皮给药纳米颗粒,满足经皮给药的需求以及特定疾病的治疗特点,对慢性创面、肿瘤以及慢性疼痛的疾病进行治疗。主要取得以下的研究结果:(1)建立了一种基于生物粘附设计胶束的壳聚糖-虫胶海绵创面敷料用于皮肤交付积雪草苷以促进慢性伤口愈合。慢性创面是一种复杂的、延续时间长、难以自行愈合的创面,其危害巨大,不接受及时治疗甚至会危害生命健康,目前临床常用伤口敷料进行治疗。慢性创面敷料主要目标是能够保持湿润的伤口环境,能够预防和治疗感染,以及能够减少创口与接触物之间的摩擦造成的二次损伤。在这项研究中,我们开发了一种壳聚糖-虫胶基海绵支架,载积雪草苷,用于慢性创面治疗。壳聚糖与虫胶经交联后,形成孔隙率高,密度小,吸水性和保水性好,机械强度理想的海绵支架。积雪草苷被制备成为胶束,极大提高了溶解度,随后积雪草苷胶束被装载进壳聚糖-虫胶基海绵支架中用于体内外抗菌活性与促慢性创面修复活性的评价。结果显示,积雪草苷胶束中积雪草苷的溶解度超过了 5mg/mL,被装载入壳聚糖-虫胶基海绵支架后,具有良好的释放特性,在体内外均表现出明显的抗菌活性,同时具有良好的促细胞增殖效果。积雪草苷胶束-壳聚糖-虫胶基海绵支架在糖尿病创面和压疮模型中的应用,快速发挥了止血、抗菌以及促创面愈合的特性,这些结果提示,积雪草苷胶束-壳聚糖-虫胶基海绵支架具有成为一种良好的慢性创面敷料的可能性。(2)建立了一种简单制备的皮下黑色素瘤微环境响应的主动靶向无针注射给药系统用于原位治疗黑色素瘤。黑色素瘤是一种严重的致命性肿瘤,其在全球范围内,发病率持续上升。据统计,黑色素瘤以仅占皮肤癌的3%,却贡献了超过三分之二的皮肤癌的死亡率。目前,手术仍然是黑色素瘤,特别是早期黑色素瘤的治疗方案,但对转移性黑色素瘤与晚期黑色素瘤的效果有限。针对于转移性黑色素瘤和晚期黑色素瘤,多采LY2157299体内用化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等手段。紫杉醇(PTX)是一种已经用于严重或转移性黑色素瘤化疗逾几十年的化疗药物。在本研究中,我们开发了一种简单制备的有效靶向的无针注射制剂,包载PTX用于原位黑色素瘤的治疗。叶酸(FA)修饰的甘草酸二钾(DG)与 Polyvinyl caprolactam-polyvinyl acetate-polyethylene glycol graft copolymer(Soluplus(?))构建的混合胶束(PTX@Soluplus/DG-pp-FA)形成一种能够主动靶向黑色素瘤,并能在肿瘤部位微环境发生响应性变化,进而滞留释药的智能给药系统。结果表明,经处方优化后的PTX@Soluplus/DG-pp-FA胶束为球状,大大提高了 PTX的溶解度,是游离PTX溶液的100倍。PTX@Soluplus/DG-pp-FA具有良好的流变性,利于构建无针注射给药系统(NF#PTX@Soluplus/DG-pp-FA)。体内分布显示,由于Soluplus和DG存在产生的环境响应性,PTX@FA-pp-DG-NF无针注射给药比静脉给药更容易导致PTX在肿瘤部位聚集。药效学结果表明NF#PTX@Soluplus/DG-pp-FA显著提高了 PTX治疗黑色素瘤的疗效,延长了荷瘤小鼠的生存期。以上结果提示NF#PTX@Soluplus/DG-pp-FA在构建PTX多功能给药平台方面具有很大潜力。(3)建立了一种微针介导的功能型脂质体膜融合外泌体递送齐考诺肽用于中枢神经的镇痛研究。慢性疼痛是一种普遍存在的公共和身体健康危机,是一个严重的公共卫生问题,患病率极高,给社会带来沉重负担。慢性疼痛是指超过正常组织愈合时间的疼痛,没有明显的生物学价值,是一种与实际或潜在组织损伤相关的不愉快的感觉和情绪体验。根据病史和检查将其分为伤害性、神经性或混合性,给医师带来了巨大的挑战。齐考诺肽(Ziconotide,ZIC)是一种N型钙通道拮抗剂,可用于治疗难以耐受的严重慢性疼痛,或其他药物(如鞘内注射吗啡和全身镇痛药)治疗不佳的疼痛。由于ZIC只能在大脑和脑脊液中发挥作用,因此鞘内注射是ZIC唯一的给药途径。本研究将冰片(BOR)修饰的脂质体(LIPs)与间充质干细胞(MSCs)来源的外泌体融合,并负载ZIC制备了微针(MN#ZIC@MSCEXO/LIP-BOR MNs),以提高ZIC穿过血脑屏障的效率。随后,在周围神经损伤、糖尿病神经病理性疼痛、化疗痛和紫外线-B(ultraviolet-B,UV-B)辐射诱发的神经源性炎性痛动物模型中,考察行为性疼痛对热刺激和机械刺激的敏感性,以评价MNs的局部镇痛效果Tofacitinib半抑制浓度。负载ZIC的BOR修饰的LIPs(ZIC@LIP-BOR)呈球形或近似球形,粒径约为95 nm,Zeta电位为-7.8 mV。与MSC外泌体融合后的ZIC@MSCEXO/LIP-BOR的粒径增加至175 nm,Zeta电位增加至-3.8 mV。基于ZIC@MSCEXO/LIP-BOR构建的纳米MNs具有良好的机械性能,可有效穿透皮肤释放药物。镇痛实验结果表明,ZIC在不同疼痛模型中均有显著的镇痛作用。综上所述,本研究构建的MN#ZIC@MSCEXO/LIP-BOR MNs为慢性疼痛的治疗提供了一种安全有效的给药方式,并为ZIC的临床应用提供了巨大的潜力。综上所述,我们通过纳米制剂技术,将用于特定疾病治疗的存在难溶性问题或结构问题的生物大分子或典型治疗药物制备成为适合相应疾病治疗的纳米药物递送系统,解决传统给药递送困难或依从性低的缺点,并借助皮肤交付、经皮给药的手段进行应用,为慢性疾病临床治疗提供一条新的给药途径,为纳米制剂技术以及皮肤交付、经皮给药在临床上的使用提供新的方式,为新制剂研发提供新的思路和技术支持。

目的:(1)探究经直肠超声造影参数、彩色多普勒超STM2457抑制剂声血流参数及血清外泌体浓度对前列腺癌的诊断效能;(2)探nursing medical service究前列腺癌经直肠超声造影参数、彩色多普勒超声血流参数与血清外泌体浓度的相关性。方法:选取临床60例拟诊前列腺癌患者,收集患者的临床相关信息;所有病人均接受经直肠超声造影及彩色多普勒超声检查、超声引导下前列腺穿刺活检病理检查;采集外周血10ml,高速离心法提取血清外泌体,采用透射电子显微镜观察其形态、纳米颗粒追踪分析技术检测外泌体浓度;根据穿刺病理、SPECT/CT检查结果分为前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)组、前列腺癌NSC125066化学结构非骨转移(Non-bone metastasis,NBM)组及前列腺癌骨转移(Bone metastasis,BM)组,分析三组患者临床资料的差异;分析三组患者超声造影参数、彩色多普勒血流参数的差异;分析三组患者血清外泌体浓度的差异;分析前列腺增生组、前列腺癌非骨转移组及前列腺癌骨转移组超声造影参数、彩色多普勒血流参数与血清外泌体浓度的相关性。绘制ROC曲线,评估超声造影参数与血清外泌体浓度对前列腺疾病的诊断效能。结果:60例患者根据病理结果及SPECT/CT或骨骼相关检查诊断前列腺增生20例、前列腺癌非骨转移21例及前列腺癌骨转移19例。(1)提取的血清外泌体在电子显微镜下呈“茶托样”或“双凹面”形状。使用纳米颗粒追踪仪分析发现,平均粒径和粒径峰值均在典型外泌体的粒径范围内,约20～200 nm。(2)前列腺癌BM组血清外泌体浓度高于前列腺癌NBM组和BPH组,NBM组血清外泌体浓度高于BPH组(P<0.001)(3)前列腺癌BM组彩色多普勒血流参数收缩期峰值流速(Peak systolic velocity,PSV)、收缩期峰值流速与舒张末期流速比值(Peak systolic velocity/End diastolic velocity,S/D)、阻力指数(Resistance index,RI)值均高于前列腺癌NBM组及BPH组(P<0.001),前列腺癌NBM组彩色多普勒血流参数PSV、S/D、RI值均高于BPH组(P<0.001),血流参数舒张末期流速(End diastolic velocity,EDV)之间无差异(P>0.05)。(4)前列腺癌BM组超声造影参数峰值强度(Peak intensity,PI)、曲线下面积(Area under the curve,AUC)值高于前列腺癌NBM组及BPH组,前列腺癌BM组造影参数梯度(Grad)高于BPH组(P<0.001),NBM组超声造影参数PI、AUC值高于BPH组(P<0.001)。(5)BPH组、前列腺癌NBM组及BM组彩色多普勒超声血流参数与血清外泌体浓度无显著相关性(均P>0.05)。三组间造影参数与血清外泌体浓度无显著相关性(均P>0.05)。(6)根据区分前列腺增生与前列腺癌的ROC曲线图显示,超声造影参数PI、AUC、Glad和血清外泌体分别以17.98d B、1104.73d Bs、1.51d B/s、2.38×E~(10)particles/m L为最佳截断值,单独及联合检测预测前列腺癌的AUC分别为0.83、0.86、0.75、0.90、0.98(P均<0.05),联合检测的AUC大于各指标单独检测。进一步区分前列腺癌NBM与BM的ROC曲线图显示,超声造影参数PI、AUC、Glad和血清外泌体分别以19.33d B、1156.63d Bs、2.02d B/s、3.34×E~(10)particles/m L为最佳截断值,单独及联合检测预测前列腺癌BM的AUC分别为0.89、0.83、0.74、0.75、0.97(P均<0.05),联合检测的AUC大于各指标单独检测。结论:前列腺经直肠超声参数和血清外泌体浓度能够鉴别前列腺良、恶性病变及不同风险程度的前列腺癌(骨转移、非骨转移);经直肠超声参数联合血清外泌体可以对前列腺癌患者是否发生骨转移进行预测,为临床诊断和治疗前列腺癌提供客观的依据。

目的 探讨血清炎性指标及乳酸对新生儿窒息的诊断价值及临床意义。方法 选取2022年1月至2023年4月蚌埠市第三人民医院新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit, NICU)收治的窒息新生儿90例为窒息组，窒息组中轻度窒息组52例，重度窒息组38例，选取同期出生的无窒息史患儿50例为对照组，采用Apgar评分进行窒息程度的评估，分别比较窒息组与对照组患儿、轻度窒息组与重度窒息组患儿血中白细胞(leukocyte, WBC)、乳酸(lactic acid, LA)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-tolymphocyte ratio, NLR)、血小板(blood platelet, PLT)、C-反应蛋白(c-reactive protein, CRP)、降钙素原(procalcitonin, PCT)的水平，针对血中WBC、LA、NLR、PLT、CRP及PCT的表达水平与新生儿评分(Apgar评分)进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic 点击此处curve, ROC)评估WBC、LA、NLR、PLT、CRP及PCT表达水平对新生儿窒息的诊断价值。结果 窒息组患儿血中WBC、LA、NLR、PCT、CRP水平高于对照组，PLT水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。重度窒息组患儿血中WBC、LA、NLR水平高GSK1349572临床试验于轻度窒息组，PLT水平低于轻度窒息组，差异有统计学意义(P<0.05);重度窒息组患儿血中CRP及PCT水平与轻度窒息组患儿对比，差异无统计学意义(P>0.05)。患儿血中WBC、LA、NLR、CRP、PCT水平与Apgar评分负相关(r分别为-0.547、-0.599、-0.513、-0.293、-0.175,P<0.05);PLT水平与Apgar评分正相关(r为0.518,P<0.05)。ROC曲线表明联合指标WBC、LA、NLR、CRP、PLT在新生儿窒息的诊断中具有良好的价值，ROC曲线下的面积(Area Under Curve, AUC)为0.939,敏感度87.80%,特异度为88%。结论 监测窒息患儿血中WBC、LA、NLR、CRP、PCT和PLT水平可以及时了解窒息患儿的病情进展，对窒息患儿的早期诊断及严重程度做出判断、及时Bioactive char进行早期干预，有助于减少后遗症的发生。

中亚bionic robotic fish造山带由图瓦-蒙古山弯构造、哈萨克斯坦山弯构造及塔里木-华北克拉通3大地质单元增生拼贴形成。其中图瓦-蒙古与哈萨克斯Tamoxifen细胞培养坦山弯构造的拼贴过程，是理解中亚造山带演化过程的重点和难点。新疆北部中国阿尔泰南缘-西准噶尔北缘位于中亚造山带内两大山弯构造结合部位，是研究山弯构造拼贴演化的理想实验室。同时古生代该地区岛弧岩浆活动频繁，构造变形强烈，发育多条蛇绿岩带，并富集内生矿床。与矿业活动相关的灾害频发，对研究区增生过程演化的研究，为限定中亚造山带关键地质单元拼贴过程，探明该地区工程扰动灾害本底提供了依据。采用大比例尺填图，我们在中国阿尔泰南缘科克森套地区识别出增生杂岩组合，包括基性岩、辉长岩、玄武岩、硅质岩、浊积岩等。通过野外解析与同位素年代学、地球化学分析等工作，厘定selleck Wnt-C59出增生楔由中国阿尔泰向南持续生长到科克森套地区，对厘定该地区的区域演化提供了新的证据。运用碎屑锆石定年与物源分析，识别出萨吾尔岛弧（北侧）与成吉思岛弧（南侧）的边界，以和布克赛尔蛇绿混杂岩的解剖为基础，厘定出成吉思岛弧的俯冲-增生演化模型。将中国阿尔泰南缘与西准噶尔北缘古生代增生演化过程相联系，为进一步厘定哈萨克斯坦与图瓦-蒙古山弯构造拼贴时空演化，理解研究区矿业活动工程扰动灾害机理提供了坚实证据。

目的 探讨仙茅苔黑酚龙胆二糖苷（orcinol gentiobioside,OGB）对Captisol分子式氧化应激诱导的破骨细胞（osteoclasts,OCs）的作用及机制。方法 可溶性核因子-κB受体活化因子配体（soluble receptor activator of nuclear factor-κB ligand,sRANKL）联合H2O2诱导RAW264.7细胞，建立氧化应激诱导的OCs模型；CCK-8法检测OCs活力；抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色测定OCs的数目；磷酸苯二钠法测定OCs的TRAP活性；免疫荧光法观察OCs的Factin环结构和形态，以及p65和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的核转位；ELISA法测定OCs相关的生化指标；Western blotting检测骨吸收关键蛋白及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和Nrf2通路相关蛋白的表达。结果 OGB显著抑制氧化应激诱导的OCs的形成和分化（P<0.01），并抑制TRAP活性、F-actin环的形成及其骨吸收作用（P<0.05、0.01），下调骨吸收关键蛋白c-Fos、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的表达（P<0.05、0.01），降低活性氧（reactive oxygen species,ROS）和还原型辅酶Ⅱ(nicot寻找更多inamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶4(NADPH oxidasdigital immunoassaye 4,NOX4)的活性（P<0.05、0.01），增加抗氧化酶血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS）的活性（P<0.05、0.01），增强OCs中Nrf2的表达和核转位，抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的募集、核因子-κB抑制因子α(inhibitor of NF-κB-α,IκBα)的降解，并阻止p65的磷酸化和核转位（P<0.05）。结论 OGB能够通过调控NF-κB和Nrf2通路，抑制氧化应激诱导的OCs形成分化和骨吸收作用。

目的 观察经尿道柱状水囊前列腺扩开术(TUCBDP)与经尿道前列腺等离子电切术(TUPKP)治疗小体积(≤30 mL)良性前列腺增生(BPH)的疗效及其对尿控与性功能的影响。方法 回顾性分析2021年6月—2022年1月于山东大学齐鲁医院德州医院泌尿外科行手术治疗的BPH患者的资料。选取前列腺体积≤30 mL、有规律性生活的95例患者作为研究对象。将采用TUCBDP治疗的45例作为TUCBDP组，采用TUPKP治疗的50例作为TUPKP组，随访12个月，对两组患者的围手术期数据及随访结果进行分析。结果 TUCBDP组手术时间、术中出血量、术后血红蛋白(Hb)下降量及血清Na~+下降量、膀胱冲洗时间、术后疼痛视觉模拟评分(VAS)、尿管保留时间及术后住院时间均少于TUPKP组(P<0.05);两组患者术后12个月时尿控指标：国际前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QoL)、残余尿量(PVR)、最大尿流率(Qmax)较术前比较均有显著好转(P<0.05);两组患者术后12个月勃起功能selleck Gefitinib-based PROTAC 3指标：国际勃起功能评分(IIEF-5)、勃起硬度分级(EHS)、早泄患者性功能-5(CIPE-5)评分均较术前无显著变化(P>0.05);术后12个月射精情况：TUPKP组射精功能评分及射精困扰度评分均较术前变差(P<0.05),而TUCBDP组无明显变化(P>0.05),且该两指标TUCBDP组优于TUPKP组；TUCBDP组并发症发生率比TUPKP组显著降低(P<0.05)。结论Muscle biomarkers TUCBDP术式治疗小体积(≤30 mL)BPH安全、有效，创伤小、生化干扰小、疼痛轻、并发症少、病程短，对患者的射精功能及勃起功能影响小，对要求保留性功获悉更多能的患者更为适用。

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是一种临床上常forced medication见的炎症性、免疫性和激素依赖性疾病。该疾病的机制尚未完全确定，近年来发现细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)在EMs的发生发展中起到重要作用。PCD是一种由基因调控的自主细胞死亡行为，包括：凋亡、自噬、焦亡、铁死亡和坏死性凋亡。在凋亡中，中药主要通过上调caspase-3表达，增强异位内膜的凋亡干预EMs进展。自噬过程中，中药可以抑制PI3K-AKT-mTOR通路促进异位病灶的自噬，也可以下调Beclin-1、p62水平抑制正常内膜细胞自噬。焦亡是依赖caspase引起以炎症反应为主的死亡方式，而产生的炎症环境可selleck抑制剂能selleck激酶抑制剂也是影响EMs的原因，中药可通过抑制炎症因子的释放而治疗疾病。铁死亡反应中，中药可以增强细胞抗氧化能力而对抗铁死亡。坏死性凋亡是一种高度免疫原性的细胞死亡模式，迄今为止还未有研究探讨其在EMs中的作用机制，感染是引发此反应的条件之一，而EMs会使体内处于慢性炎症状态，因此推断坏死性凋亡也影响着疾病的发生发展。故该文对国内外应用中药干预PCD治疗EMs的相关研究进行综述，并探讨中药及其有效成分调控PCD治疗EMs作用机制。

人体重要的呼吸器官肺的发育受到多种信号通路的调控,其具体的分子机理一直是研究的热点。Isl1基因是一个LIM同源结构域转录因子,其在胚胎发育过程中起着至关重要的作用。我们的实验结果显示Isl1基因在小鼠肺发育早期的上皮细胞中特异性表达。为了进一步研究Isl1Physiology and biochemistry基因在肺发育过程中的功能,我们利用Shh~(Cre)工具鼠与Isl1~(f此网站/f)小鼠交配,成功获得在肺上皮细胞中特异性敲除Isl1基因的突变型小鼠(Isl1~(Shh Cre))。通过对突变型小鼠的表型分析,我们发现肺上皮细胞中Isl1的缺失会导致肺分支缺陷。与野生型小鼠相比,E11.5-E12.5天Isl1~(Shh Cre)突变型小鼠肺间充质细胞增殖显著降低,而上皮细胞的增殖没有显著差异。TUNEL结果显示突变型小鼠与野生型小鼠的肺部细胞凋亡没有明显差异。为了寻找Isl1基因的靶分子,我们利用RNA-Seq技术筛选E11.5天突变型小鼠肺组织中的差异表达基因。RNA-Seq和原位杂交结果显示与肺发育密切相关的基因Shh、Ptch1、Sox9、Irx1、Irx2、Tbx2和Tbx3在Isl1~(Shh Cre)突变型小鼠肺中的表达明显下调。其LY2157299说明书中,Shh是在肺部分支形态发生中的重要信号分子,肺间充质细胞的增殖也受到Shh的调控。体外肺原代细胞中过表达Isl1可以明显上调Shh的表达,Ch IP实验结果也证实转录因子ISL1可以与Shh基因增强子序列(MACS1)结合。这些结果都表明Isl1可以在转录水平上直接调控Shh的表达。我们利用体外器官培养实验证实Hedgehog信号通路的激活可以挽救Isl1缺失导致的肺间充质细胞增殖缺陷。体内激活Hedgehog信号通路也可以部分挽救Isl1基因敲除导致的肺分支形态发生缺陷。综上所述,Isl1基因在肺分支发育过程中起着关键作用,Isl1基因可能通过影响SHH信号通路调控肺分支发育过程。

FG-4592试验旨在探究精原干细胞（SSCs）形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体（mi R-302d mimics）；合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体（mi R-302d inhibitor）。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型（WT）和突变型载体（MT）；将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞，检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示：成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体；预测结果显示Tle4为mi R-302AMG510半抑制浓度d的潜在靶基因，且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因；双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中，与转染WT+miBiosurfactant from corn steep water R-NC组相比，转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降（P<0.05），而共转染MT+mi R-302d组的荧光素酶活性差异不显著（P>0.05），且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达，而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明，miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

【目的】骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是由于骨吸收增强、骨形成减弱造成骨稳态失衡而引发的骨量进行性丢失的全身性骨骼疾病,其特征是骨量下降、骨组织微结构受损、骨脆性增加和易引发骨折。研究发现巨噬细胞极化诱发的慢性炎症可导致破骨细胞活性增强、成骨细胞活性减弱,在OP的病理进展中发挥着重要的调控作用。随着我国老龄化人NVP-TNKS656临床试验群日益增加,预计到2050年OP患者将达1.2亿,髋部骨折患者1年内致死率达20-24%,致残率高达40%。与高发病率、高致残率、高致死率相悖的是,目前OP的治疗手段仍然有限,挖掘新的治疗靶点和策略、寻找新的药物已经迫在眉睫。研究发现经典瞬时受体电位通道1(Transient receptor potential canonical channels 1,TRPC1)在骨组织的多种细胞中表达,其介导的Ca~(2+Alisertib试剂)相关通路与骨骼疾病进程紧密相关。且有实验证实,细胞质内的[Ca~(2+)]i升高可促进巨噬细胞向M1极化。然而尚未有研究报道TPRC1是否通过调控巨噬细胞极化参与OP发生发展。本研究以TRPC1为切入点,从动物、组织、细胞和分子水平阐明TRPC1调控OP发生的作用和分子机制,以期为抗OP药物研发提供新靶点和理论依据。【方法】选用C57BL/6J小鼠和TRPC1 knockout(Trpc1~(-/-))小鼠构建摘除双侧卵巢(OVX)诱发的OP模型,提取C57BL/6J小鼠和Trpc1~(-/-)小鼠原代骨髓巨噬细胞诱导其极化构建巨噬细胞极化模型。Micro-CT分析测定股骨干骺端骨量及骨小梁微结构变化,评价TRPC1对OP的作用;骨组织病理学检测成骨细胞和破骨细胞数量并检测相关蛋白表达水平,确定TRPC1对骨吸收和骨形成的作用;荧光共定位检测TRPC1在OP组织中的表达分布,寻找TRPC1主要的效应细胞;采用免疫组化、Western blot在组织和细胞水平探究TRPC1对巨噬细胞极化的影响,以确证TRPC1介导巨噬细胞极化调控OP;采用双波长离子影像实验、Western blot、核浆分离Carcinoma hepatocelular、免疫荧光和Elisa等方法,进一步在细胞水平上探究TRPC1调控巨噬细胞内Ca~(2+)水平,影响细胞极化的分子机制。【结果】1.TRPC家族中TRPC1在OVX小鼠骨组织中表达升高且变化最显著。2.TRPC1敲除小鼠的骨量增加、骨小梁数量增加、骨小梁间距减小,且TRPC1敲除可逆转OVX引起的骨量下降、骨组织微结构受损。3.TRPC1敲除可抑制OVX引起的骨形成减弱和骨吸收增强。4.TRPC1主要表达和分布于OVX小鼠骨组织巨噬细胞中。5.TRPC1敲除可逆转OVX引起的巨噬细胞M1极化增多、M2极化减少。6.TRPC1敲除可抑制LPS/IFN-γ诱导的巨噬细胞M1极化,促进IL-4诱导的巨噬细胞M2极化。7.TRPC1敲除抑制LPS/IFN-γ诱导的巨噬细胞Ca~(2+)内流增加,抑制Ca N/NF-κB信号通路激活诱发的巨噬细胞M1极化,并抑制巨噬细胞分泌炎症细胞因子。【结论】本研究发现,TRPC1可通过促进巨噬细胞的Ca~(2+)内流,影响胞内Ca~(2+)水平,而激活Ca N/NF-κB信号通路,促进骨髓巨噬细胞M1极化,增强骨吸收、抑制骨形成,导致骨稳态失衡,促进OP发生。通过敲除TRPC1,可降低OVX诱发巨噬细胞内高钙水平,从而抑制Ca N/NF-κB信号通路,减缓OP的发生。以上研究结果提示,TRPC1有望作为OP治疗的潜在靶点,通过抑制其功能而减缓OP的作用机制也可能成为此类疾病预防和治疗的新策略。